四章中藥制劑含量測(cè)定

1、第四章 中藥制劑含量測(cè)定 學(xué)生:07級(jí)藥事管理1樣品處理的目的第一節(jié) 樣品處理1. 釋放被測(cè)組分，制成穩(wěn)定試樣2. 除去雜質(zhì)，純化3. 濃縮或衍生化4. 試樣形式符合測(cè)定的要求使其符合所選定的分析方法的要求2一、樣品的粉碎 目的取樣均勻，提取完全粉碎設(shè)備粉碎機(jī)、研缽、勻漿機(jī)注意：粒度大小合適 防止污染或損失3溶劑的選擇水、酸水、堿水親水性的有機(jī)溶劑：乙醇（酒精）、甲醇（木精）、丙酮親脂性的有機(jī)溶劑：石油醚、苯、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、二氯乙烷二、樣品的提取關(guān)鍵提取完全41.浸泡提取法冷浸法 優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單，適于熱不穩(wěn)定的樣品，且提取雜質(zhì)少缺點(diǎn)：費(fèi)時(shí)（12-24 h）、費(fèi)溶劑（10-50倍）放置或

2、指定25溫浸（4050 ） 熱水浸泡（7080 ） 部分測(cè)定法等量測(cè)定法全部測(cè)定法總量測(cè)定法靈寶護(hù)心丹（牛黃、麝香等）中膽酸的含量測(cè)定 取本品適量，研細(xì)，取約0.5g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，加石油醚（60-90）4ml，浸泡1小時(shí)，濾過(guò)，濾渣及濾紙揮去溶劑，放回錐形瓶中，精密加入冰醋酸無(wú)水乙醇溶液（1 10）15ml，搖勻，密塞，稱(chēng)定重量，浸泡12小時(shí)，再稱(chēng)定重量，用冰醋酸無(wú)水乙醇溶液（1 10）補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。1.浸泡提取法52.回流提取法加快溶出速度，省時(shí)（每次提取時(shí)間0.52h，提取次數(shù)13次）適宜受熱穩(wěn)定的藥物適宜較難溶出的組分特點(diǎn)采用回流裝置，

3、用單一溶劑或混合溶劑于水浴上加熱回流提取萬(wàn)應(yīng)膠囊（黃連等）中鹽酸小檗堿測(cè)定+HCl-70%乙醇溶液，加熱回流1h63.連續(xù)回流提取法特點(diǎn)樣品置于索氏提取器中，利用低沸點(diǎn)的有機(jī)溶劑進(jìn)行連續(xù)回流提取保和丸（陳皮等）中橙皮甙測(cè)定+甲醇，加熱回流至提取液無(wú)色為止節(jié)省溶劑，提高提取效率適宜受熱穩(wěn)定的藥物費(fèi)時(shí)74.超聲提取法利用超聲波的助溶作用進(jìn)行提取。超聲波振蕩器（超聲波清洗器）簡(jiǎn)便 省時(shí) 提取率高保濟(jì)丸（厚樸等）中厚樸酚測(cè)定+石油醚（30-60），超聲處理（功率500W，頻率33kHz）2次，每次30min85.超臨界流體萃取法（SFE）以超臨界流體（常用CO2）作溶劑的樣品提取新技術(shù)。當(dāng)壓力和溫度超

4、過(guò)氣體的臨界點(diǎn)時(shí)所形成的單一相態(tài)超臨界流體特殊的物質(zhì)狀態(tài)密度 d 液體 溶解能力強(qiáng)粘度 氣體 傳質(zhì)快，有利于待測(cè)組分的擴(kuò)散表面張力幾乎為 0 浸潤(rùn)性能好密度受壓力、溫度的影響大 改變對(duì)溶質(zhì)的溶解能力，加入甲醇、氯仿、苯等改變極性 提取不同極性的成分優(yōu)點(diǎn)：速度快、萃取效率高、方法準(zhǔn)確度高、選擇性較高91.沉淀法二、樣品的分離凈化關(guān)鍵保留有效成分復(fù)方益母草口服液中水蘇堿的含量測(cè)定利用雷氏鹽（硫氰酸鉻銨）作沉淀劑，在酸性介質(zhì)中可與大部分有機(jī)堿生成難溶于水的配合物與其它雜質(zhì)分離。 102.蒸餾法適用于具揮發(fā)性的待測(cè)組分，如揮發(fā)油、小分子的生物堿、丹皮酚等113. 液液萃取法直接萃取法萃取劑的選擇 親脂

5、性有機(jī)溶劑，如苯、氯仿或乙醚 弱親脂性的溶劑，如乙酸乙酯、正丁醇等多次萃?。?-4次）調(diào)整水相酸度，提取有機(jī)酸、有機(jī)堿利用鹽析作用，提高提取率12BH+（水相）+ In-(水相) BH+In-（水相） BH+In- （有機(jī)相） 適合于高度電離的有機(jī)酸、堿化合物的萃取 水相酸度的控制 離子對(duì)試劑的選擇離子對(duì)萃取法13分離的原理：吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、 凝膠色譜按操作方式：柱色譜、薄層色譜、紙色譜裝柱方法：濕法裝柱、干法裝柱微柱色譜（固相萃?。┲拇笮。洪L(zhǎng)515cm，內(nèi)徑0.51cm 柱填料：硅膠、氧化鋁、活性炭、聚酰胺、大孔樹(shù)脂、硅藻土、離子交換樹(shù)脂、鍵合相硅膠C8、C18等 4.

6、色譜法（層析法）14制劑中所選被測(cè)成分主要是： 化學(xué)結(jié)構(gòu)已經(jīng)明確的有效成分； 能大致明確的某類(lèi)主要活性物質(zhì)； 能反映某味主要藥物特征的指標(biāo)性成分； 劇毒性成分或貴重藥材的成分。第二節(jié) 常用含量測(cè)定方法15常用方法： 高效液相色譜法； 氣相色譜法； 薄層色譜法； 紫外可見(jiàn)分光光度法； 化學(xué)分析法 重量分析法 容量分析法16第三節(jié) 含量測(cè)定方法驗(yàn)證分析方法驗(yàn)證的目的 是證明采用的方法適合于相應(yīng)的檢測(cè)要求。需驗(yàn)證的分析項(xiàng)目 鑒別試驗(yàn)、雜質(zhì)檢查、原料藥及制劑中有效成分含量測(cè)定及其它成分測(cè)定驗(yàn)證內(nèi)容 準(zhǔn)確度、精密度、專(zhuān)屬性、檢測(cè)限、定量限、線性、范圍和耐用性17 準(zhǔn)確度是指測(cè)得結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的

7、程度，表示分析方法測(cè)量的正確性。 準(zhǔn)確度（ccuracy） 由于“真實(shí)值”無(wú)法準(zhǔn)確知道，因此，通常采用回收率（%）來(lái)表示。 18長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)要求至少測(cè)定高、中、低三個(gè)濃度，每個(gè)濃度測(cè)定三次，共提供9個(gè)數(shù)據(jù)進(jìn)行評(píng)價(jià)。中藥制劑含量回收率一般為95%105%，RSD一般應(yīng)為2以?xún)?nèi)。 用已知純度的對(duì)照品做加樣回收測(cè)定，即于已知被測(cè)成分含量的供試品中再加入已知純度的被測(cè)成分對(duì)照品。回收率計(jì)算公式為：回收率%=C-AB100%A 供試品所含被測(cè)成分量B 加入對(duì)照品量C 實(shí)測(cè)值19長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)系指在規(guī)定測(cè)試條件下，同一均勻供試品，經(jīng)多樣取樣測(cè)定所的結(jié)果之間接近的程度。精密度（precision）在藥物分

8、析中，常用相對(duì)偏差(RD)、標(biāo)準(zhǔn)偏差（S）和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）表示。至少 6 次結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)精密度是考察分析方法在不同的時(shí)間、操作人員、實(shí)驗(yàn)室，所獲得結(jié)果之間的重現(xiàn)性和重復(fù)性。20長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)1.重復(fù)性 在較短時(shí)間間隔內(nèi)，在相同的操作條件下由同一分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度。精密度驗(yàn)證內(nèi)容包括重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性2.中間精密度 在同一實(shí)驗(yàn)室，由于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部條件的改變，如不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備測(cè)定所得結(jié)果的精密度。3.重現(xiàn)性 在不同實(shí)驗(yàn)室由不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度。21長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)是指在樣品介質(zhì)中有其他組分（如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等）可能存在下，采用的方法能準(zhǔn)確測(cè)定出被

9、測(cè)物的特性。專(zhuān)屬性（specificity）22長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)檢測(cè)限（limit of detection, LOD）試樣中被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低濃度或量。23長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)定量限（limit of quantitation, LOQ）是指在保證具有一定準(zhǔn)確度和精密度的前提下，分析方法能夠測(cè)定出的樣品中藥物的最低量。24長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)線性（linearity）在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，測(cè)試結(jié)果與樣品中供試物濃度成正比關(guān)系的程度。范圍（range）范圍指能達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性，測(cè)試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。表示：mg/Lmg/L25長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)耐用性（robustness）指在測(cè)定條件有小變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果不受影響的承受程度。26高效液相色譜法雙黃連口服液的含量測(cè)定（反相HPLC外標(biāo)一點(diǎn)法） 含量測(cè)定 黃芩 照高效液相色譜法（附錄VI D）測(cè)定。 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-冰醋酸（50:50:1）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為274nm。理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1500。 對(duì)照品溶液的制備 取黃芩苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加50%甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。 供試品溶液的制備 精密量取本品1ml，置