多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增片段講課

1、多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增片段講課第1頁，共19頁，2022年，5月20日，14點(diǎn)16分，星期二第2頁，共19頁，2022年，5月20日，14點(diǎn)16分，星期二第3頁，共19頁，2022年，5月20日，14點(diǎn)16分，星期二第4頁，共19頁，2022年，5月20日，14點(diǎn)16分，星期二細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外DNA復(fù)制環(huán)境的區(qū)別體內(nèi)DNA的復(fù)制體外的模擬模板（母鏈）細(xì)胞內(nèi)源外源加入引物引物合成酶外源加入底物dNTP細(xì)胞內(nèi)源外源加入聚合酶細(xì)胞內(nèi)源外源加入反應(yīng)環(huán)境細(xì)胞內(nèi)環(huán)境緩沖液第5頁，共19頁，2022年，5月20日，14點(diǎn)16分，星期二PCR儀第6頁，共19頁，2022年，5月20日，14點(diǎn)16分，星期二微量離心管

2、微量移液器第7頁，共19頁，2022年，5月20日，14點(diǎn)16分，星期二靶序列靶序列PCR 循環(huán)第一步 ：加熱變性第8頁，共19頁，2022年，5月20日，14點(diǎn)16分，星期二靶序列靶序列引物 引物 53553533PCR 循環(huán)第二步 ：引物與靶序列退火第9頁，共19頁，2022年，5月20日，14點(diǎn)16分，星期二靶序列靶序列引物引物53553533Taq DNA聚合酶PCR 循環(huán)第三步 ：引物延伸第10頁，共19頁，2022年，5月20日，14點(diǎn)16分，星期二靶序列 靶序列第1個(gè) PCR 循環(huán)完成后 ：得到兩個(gè)拷貝的靶序列第11頁，共19頁，2022年，5月20日，14點(diǎn)16分，星期二循環(huán)次

3、數(shù)DNA數(shù)量122438201,048,576301,073,741,8243、30次循環(huán)后靶序列擴(kuò)增的數(shù)量第12頁，共19頁，2022年，5月20日，14點(diǎn)16分，星期二循環(huán)數(shù)變性復(fù)性延伸第一次94C，10min30次4，30s55，30s72，1min最后一次72，10min第13頁，共19頁，2022年，5月20日，14點(diǎn)16分，星期二計(jì)算DNA含量（ g ）50 x (260nm的讀數(shù)）x 稀釋倍數(shù)50：1 g /ml的DNA在厚度為1cm比色杯中的吸光值為0.02第14頁，共19頁，2022年，5月20日，14點(diǎn)16分，星期二比色杯第15頁，共19頁，2022年，5月20日，14點(diǎn)1

4、6分，星期二葡萄RS基因的RT-PCR擴(kuò)增葡萄RS基因的RT-PCR擴(kuò)增圖譜M. DNA Marker 2000；1.RS 基因約1300bp第16頁，共19頁，2022年，5月20日，14點(diǎn)16分，星期二第17頁，共19頁，2022年，5月20日，14點(diǎn)16分，星期二第18頁，共19頁，2022年，5月20日，14點(diǎn)16分，星期二實(shí)驗(yàn)小結(jié) PCR儀加熱使（ ）變性, 復(fù)性使引物與模板DNA（ ）,延伸需將反應(yīng)溫度升至中溫( ),在（ ）的作用下,以 （ ）為原料,以（ ）為復(fù)制的起點(diǎn),合成新鏈。 如此重復(fù)改變反應(yīng)溫度,經(jīng)（ ）三個(gè)階段為一個(gè)循環(huán),每一次循環(huán)使特異區(qū)段的基因拷貝數(shù)放大一倍,一般樣品是經(jīng)過30次循環(huán),最終使基因放大了數(shù)百萬倍; 將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳,經(jīng)溴化乙錠染色,在紫外燈照射下肉眼能見到擴(kuò)增特異區(qū)段的