各種緩沖液的配制方法-

1、各種緩沖液的配制方法-各種緩沖液的配制方法Na2HPO4- 檸檬酸鈉緩沖液P0.2mol/L0.1mol/L P 0.2mol/L0.1mol/LHNa2HPO檸檬酸鈉 HNaHPO檸檬酸鈉424(ml)(ml)(ml)(ml)20.419.6510.729.28.2221.2418.76511.158.85.4422.1817.82511.608.40.6623.1716.83512.097.91.8834.1115.89612.637.37.0034.9415.06613.226.78.2235.7014.30613.856.15.4436.4413.56614.555.45.6637.1

2、012.90615.454.55.8847.7112.29716.473.53.0048.2811.72717.392.61.2248.8211.18718.171.83.4449.3510.65718.731.27.6649.8610.14719.150.85.88510.309.70819.450.55.00Na2HPO4。 2HO，分子量 =178.050.2mol/L溶液含 35.61g/L檸檬酸 . H 2O，分子量液含 21.01g/L=210.140.1mol/L溶檸檬酸 - 檸檬酸鈉緩沖溶液（ 0.1mol/L ）P0.1mol/L0.1mol/LP0.1mol/L0.1mol

3、/LH 檸檬酸檸檬酸H檸檬酸檸檬酸鈉（ml）鈉（ ml）（ml）(ml)318.61.458.211.8.00317.22.857.312.7.22316.04.056.413.6.44314.95.155.514.5.66314.06.054.715.3.88413.16.963.816.2.00412.37.762.817.2.22411.48.662.018.0.44410.39.761.418.6.6649.210.8.8檸檬酸 . H 2O，分子量 =210.140.1mol/L液含 21.01g/L檸檬酸鈉 . 2H 2O，分子量 =294.12 ；0.1mol/L液含溶溶醋酸緩沖

4、液（ 0.2mol/L，18）P0.2mol/L0.2mol/LP0.2mol/L0.2mol/LH NaAC(ml)HAC(ml)H NaAC(ml)HAC(ml)30.759.2545.904.10.6831.208.8057.003.00.8041.808.2057.902.10.0242.657.3558.601.40.2443.706.3059.100.90.4644.905.1059.400.60.68NaAC.3 H2O,分子量 =136.090.2mol/L溶液含 27.22g/L1）醋酸鹽溶液的配制：醋酸醋酸鈉緩沖液 (pH3.6)取醋酸鈉 5.1g, 加冰醋酸 20ml，再

5、加水稀釋至 250ml, 即得。醋酸醋酸鈉緩沖液 (pH3.7)取無水醋酸鈉 20g, 加水 300ml 溶解后，加溴酚藍(lán)指示液 1ml 及冰醋酸 6080ml，至溶液從藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)榧兙G色，再加水稀釋至 1000ml，即得。醋酸醋酸鈉緩沖液 (pH3.8)取 2mol/L 醋酸鈉溶液 13ml 與 2mol/L 醋酸溶液 87ml, 加每 1ml 含銅 1mg 的硫酸銅溶液0.5ml, 再加水稀釋至1000ml，即得。醋酸醋酸鈉緩沖液 (pH4.5)取醋酸鈉 18g, 加冰醋酸 9.8ml, 再加水稀釋至 1000ml, 即得。醋酸醋酸鈉緩沖液 (pH4.6)取醋酸鈉 5.4g, 加水 50ml

6、 使溶解，用冰醋酸調(diào)節(jié) pH值至 4.6 ，再加水稀釋至 100ml，即得。醋酸醋酸鈉緩沖液 (pH6.0)取醋酸鈉 54.6g ，加 1mol/L 醋酸溶液 20ml 溶解后，加水稀釋至 500ml，即得。用醋酸和醋酸鈉配制的緩沖溶液的 PH=PKa+lgC(NaAc)/C(HAc) （在此， C(HAc)指醋酸的濃度， C(NaAc)指醋酸鈉的濃度 ,Ka 是醋酸的解離常數(shù) =1.8*10-5 （1.8 乘 10 的-5 次方）， PKa=-lgKa=4.75 ， 將 PH=5.5 代 入 ， 可 得 C(NaAc)/C(HAc)=5.6 通 常 我 們 配 制 時(shí) 會(huì) 使 C(HAc)=

7、0.1mol/L ，或是 C(HAc)=0.2mol/L 等。若 是 配 制 C(HAc)=0.1mol/L ， 則C(NaAc)=0.56mol/L 稱 量 醋酸 鈉固 體質(zhì) 量為 82*0.56=46 克量取冰醋酸體積為 0.1*1000/17.5=5.7mL 。 將稱好的醋酸鈉和量好的冰醋酸加入 1000mL水中溶解、攪拌均勻即可。當(dāng)然若想配制其它的濃度，也可照公式計(jì)算即可，通常緩沖溶液不能配的太稀， 否則緩沖能力要下降，太濃的話又浪費(fèi)試劑。苯二甲酸氫鉀 - 氫氧化鈉緩沖液PH0.1mol/LNaOH(ml)0.2mol/L加水至苯二甲酸(ml)氫鉀（ ml）4.00.4025.0010

8、0.004.23.6525.00100.004.47.3525.00100.004.612.0025.00100.004.817.5025.00100.005.023.6525.00100.005.229.7525.00100.005.435.2525.00100.005.639.7025.00100.005.843.1025.00100.006.045.4025.00100.006.247.0025.00100.000.2mol/L 苯二甲酸氫鉀溶液：稱取在硫酸干燥器中干燥過 24 小時(shí)的苯二甲酸氫鉀 20.44g 溶于水中，稀釋至 500ml。磷酸緩沖液（ 0.2mol/L）P0.2mol

9、/L0.2mol/LP0.2mol/L0.2mol/LHNaHPONaHPOHNaHPONaHPO24242424(ml)(ml)(ml)(ml)58.092.0761.039.0.80612.387.7772.028.0.02618.581.5781.019.0.24626.573.5787.013.0.46637.562.5791.58.5.68649.051.0894.75.3.80Na2HPO4 .2 H2O ,分子量=178.05 ，0.2mol/L溶液含 35.61g/LNaH2PO4 . 2 H2O , 分子量 =156.03 ，0.2mol/L溶液含 31.21g/LNaHPO

10、 . H2O,分子量 =138.03 ， 0.2mol/L24溶液含 27.6g/LNa2HPO4 .12 H2O,分子量=358.22，0.2mol/L溶液含 71.64g/L磷酸鹽緩沖液（ PBS）配制方法0.01M PBSPBS(135 mMNaCl, 2.7 mMKCl, 1.5 mMKH2PO4, and 8 mM K2HPO4，pH 7.2)PBS 緩沖液（ pH7.27.4 ）：NaCl 137mmol/L ，KCl 2.7mmol/L ，Na2HPO4 4.3mmol/L， KH2PO4 1.4mmol/L稱 7.9g NaCl，0.2g KCl，0.24g KH2PO4(or

11、1.44gNa2HPO4)和 1.8g K2HPO4，溶于 800 ml 蒸餾水中，用 HCl 調(diào)節(jié)溶液的 pH 值至 7.4 ，最后加蒸餾水定容至 1 L 。保存于 4冰箱中即可。需要注意的是，通常所說的濃度 0.01 M 指的是緩沖溶液中所有的磷酸根濃度，而非 Na 離子或 K 離子的濃度， Na 離子和 K 離子只是用來調(diào)節(jié)滲透壓的。母液的配制：0.2M Na2HPO4：稱取 71.6gNa2HPO4-12H2O，溶于 1000ml 水0.2M NaH2PO4：稱取 31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于 1000ml 水各種濃度 PB(pH=7.4) 的配制：先 配0.2MPB (

12、pH=7.4，100ml)： 取19ml0.2mol/L的NaH2PO4，Na2HPO4, 即可。81ml0.2mol/L的然后 只需將 0.2M PB (pH=7.4) 按相應(yīng)比例適當(dāng)稀釋 即可，如：0.1M PB（PH=7.4） ：取 500ml 0.2M PB ，加水稀釋至 1000ml 即可。0.01M PB （PH=7.4）：取 50ml 0.2M PB ，加水稀釋至 1000ml 即可。0.02M PB （PH=7.4）：取 100ml 0.2 M PB ，加水稀釋至 1000ml 即可。若 需 要NaCl 的 話 ， 加 入NaCl 至0.9%g/100ml ）即可。另：其它各種

13、另 PH 值的 0.2M PB（ 100ml) 配方 ：pH0.2M NaH2PO4 （ml）0.2MNa2HPO4（ml）5.793.56.55.89285.990106.087.712.36.185156.281.518.56.377.522.56.473.526.56.568.531.56.662.537.56.756.543.56.851496.945557.038627.133677.228727.323777.419ml81ml7.516847.613877.710.590.57.88.591.57.97938.05.394.70.01M 磷酸鹽緩沖液（ PBS）配制方法稱取 8g

14、 NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和 0.24g KH2PO4,溶于 800ml 蒸餾水中，用 HCl 調(diào)節(jié)溶液的 pH值至 7.4 ，最后加蒸餾水定容至 1L 即可。在 15lbf/in2(1034 105Pa)高壓下蒸氣滅菌（至少 20 分鐘），保存存于室溫或 4冰箱中。需要注意的是，通常所說的濃度 0.01M 指的是緩沖溶液中所有的磷酸根濃度，而非 Na 離子或 K 離子的濃度， Na 離子和 K 離子只是用來調(diào)節(jié)滲透壓的。如果是用于免疫組化的話， 則需要在配置的時(shí)候分別加入 100 u/ml 青霉素和鏈霉素之后再調(diào) PH、定容、滅菌消毒。PH7.67.47.27.

15、0H2O1000100010001000NaCl8.58.58.58.5Na2HPO4 2.22.22.22.2NaH2PO4 0.10.20.30.4根據(jù)經(jīng)驗(yàn)來看，新鮮配置的PBS攪勻后其 PH值約在 7.2-7.4之間，可是在溫度的影響下， 尤其在夏天，其電離常數(shù)發(fā)生了改變， 在經(jīng)過晝夜的時(shí)間后， PH值會(huì)明顯改變（我親自測(cè)過偏酸） 。所以做實(shí)驗(yàn)的同學(xué)可要注意了， PH 值可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果， 甚至可能導(dǎo)致陰性。 所以務(wù)必記得這個(gè)時(shí)候和天氣， 要加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)條件控制問題。 每次使用前最好用試紙測(cè)一下過夜了的 PBS，如果發(fā)生偏酸或偏堿，注意重新?lián)Q新液。PBS緩沖液稱取 NaCl 8g，KCl

16、0.2g ，Na2HPO4?12H2O3.63g, KH2PO40.24g ，溶于 900ml 雙蒸水中，用鹽酸調(diào)pH值至 7.4 ，加水定容至 1L，常溫保存?zhèn)溆?。PBST緩沖液取 300l Tween-20 加入 PBS 100ml 中，混勻后即刻使用。現(xiàn)用現(xiàn)配。如果是把所有固體加大十倍， 配置為濃縮液， 工作時(shí)候十倍稀釋，那么，在剛配好濃縮液時(shí)， PH在 6.5 左右，明顯偏酸。不能用鹽酸調(diào)。雖然可以用氫氧化鈉顆粒調(diào)，但是有更方便的方法。十倍稀釋以后， PH 自動(dòng)升高到所需要的值。不需要其它任何處理。這個(gè)可以先取少量試一試，配好之后再測(cè)一次 PH8.0 的 PBS配方詳細(xì)NaCl 137

17、mmol/L ，KCl 2.7mmol/L ，Na2HPO4 4.3mmol/L ， KH2PO4 1.4mmol/L向燒杯中加入約 800 ml 的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙?。滴加濃鹽酸將 pH值調(diào)節(jié)至 8.0 ，然后加入去離子水將溶液定容至 1 L 。高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：上述 PBS Buffer 中無二價(jià)陽離子，如需要，可在配方中補(bǔ)充 1 mMCaCl2 和 0.5 mMMgCl2。0.05mol/L PBS( 磷酸緩沖液 Phosphate Buffer Solution ，PBS)的配制：甲液： 0.05mol/L Na2HPO4 溶液 ：稱取磷酸氫二鈉 9.465g 7.0

18、99g, 加蒸 餾水至 1000ml ; 乙液： 0.05mol/L KH2P04 溶液 : 稱取磷酸二氫鉀 , 9.07g 6.803g, 加蒸餾水至 1000m1。將甲乙液分裝在棕色瓶?jī)?nèi)，于 4冰箱中保存，用時(shí)甲、乙兩液各按不同比例混合，即可得所需 pH的緩沖液 , 見下表 :pH甲液 ml乙液 mI5.292.597.55.595.095.05.9110.090.06.2420.080.06.4730.070.06.6440.060.06.8150.050.06.9860.040.07.1770.030.07.3880.020.07.7390.010.08.0495.05.0你要配制 p

19、H=6.8 的 PBS，可用甲、乙液各 50ml 混合即可。硼酸緩沖液（ 0.2mol/L硼酸鹽）P 0.05mol/0.2mol/LP 0.05mol/0.2mol/LHL 硼砂硼酸（ml） HL 硼砂硼酸（ml）（ml）（ml）71.09.083.56.5.4271.58.584.55.5.6472.08.086.04.0.8783.07.098.02.0.00硼砂 Na2B4O7.10H2O, 分子量 =381.43,0.05mol/L 溶液 =0.2mol/L 硼砂含 19.07g/L硼酸，分子量 =61.84,0.2mol/L 溶液含 12.37g/L 硼砂易失去結(jié)晶水， 必須在帶塞

20、得瓶中保存； 硼砂溶液也可以用半中和的硼酸溶液代替鹽酸 - 氯化鉀緩沖液P 0.1mol0.02mo加 P 0.1mol0.02mo加H/LHCl(l/LKCl水 H/LHCl(l/LKCl水ml)(ml)至ml)(ml)至(（mmll）)194.562.701123.7638.1010.0.0107175.1012.451118.6840.6010.0.0208159.6820.151114.9842.5010.0.0309147.4026.301211.9044.0510.0.0400137.6431.20129.4645.0310.0.0501129.9035.00127.5246.25

21、10.0 .06020.02mol/LKCl溶液：溶 7.455g氯化鉀于水中，稀釋至 500ml苯二甲酸氫鉀 - 鹽酸緩沖液P0.1mol0.02mo加 P0.1mol0.02mo加H/LHCll/L 苯水 H/LHCll/L 苯水(ml)二甲酸至(ml)二甲酸至氫鉀（氫鉀（ml）m（ml）mii）246.6025.001314.8025.0010.0.0202239.6025.00139.9525.0010.0.0404233.0025.00136.0025.0010.0.0606226.5025.00132.6525.0010.0.0808320.4025.001.0000.02mol/L 苯二甲酸氫鉀溶液：稱取在硫酸干燥器中干燥過 24 小時(shí)額苯二甲酸氫鉀 20.44g 溶于水中，