食品微生物學(xué)檢驗(yàn)致病菌的檢驗(yàn)

1、食品微生物學(xué)檢驗(yàn)致病菌檢驗(yàn)食品藥品檢驗(yàn)所 第1頁食品微生物學(xué)檢驗(yàn)致病菌檢驗(yàn)食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)微生物常規(guī)檢驗(yàn)技術(shù)致病菌的檢驗(yàn)第2頁食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)GB 4789.1- 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 總則GB 4789.2- 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 菌落總數(shù)測定GB 4789.3- 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 大腸菌群計(jì)數(shù)GB 4789.4- 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 沙門氏菌檢驗(yàn)GB 4789.5- 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 志賀氏菌檢驗(yàn)GB/T 4789.7- 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 副溶血性弧菌檢驗(yàn)GB 4789.10- 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)GB/T 4789.11- 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 溶血性鏈球菌檢驗(yàn)GB 4789.15-

2、食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 霉菌和酵母計(jì)數(shù)GB 4789.18- 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 乳與乳制品檢驗(yàn)GB 4789.30- 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 單核細(xì)胞增生李斯特 氏菌檢驗(yàn)GB 4789.35- 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 乳酸菌檢驗(yàn)GB/T 4789.36- 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 大腸埃希菌O157： H7/NM檢驗(yàn)GB 4789.40- 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 阪崎腸桿菌檢驗(yàn)第3頁食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)室環(huán)境應(yīng)不影響檢測結(jié)果準(zhǔn)確性。試驗(yàn)室工作區(qū)域應(yīng)與辦公室區(qū)域顯著分開。試驗(yàn)室工作區(qū)域面積和總體布局應(yīng)能滿足從事檢測工作需求，試驗(yàn)室布局應(yīng)采取單方向工作流程，防止交叉污染。試驗(yàn)室內(nèi)溫度、濕度、照度、噪聲和潔凈度等應(yīng)符合工作要求。環(huán)

3、境： 第4頁食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 普通樣品檢測應(yīng)在潔凈區(qū)域(包含超凈工作臺或潔凈試驗(yàn)室)進(jìn)行，潔凈區(qū)域應(yīng)有顯著標(biāo)示。 病原微生物分離判定工作應(yīng)在二級生物安全試驗(yàn)室(Biosafety level 2 BSL-2) 進(jìn)行(超凈工作臺不能替換生物安全柜)。環(huán)境： 第5頁食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)BSL2試驗(yàn)室第6頁食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 參考菌株能夠從國際菌種保藏中心如ATCC、國內(nèi)具資質(zhì)菌種保藏中心或室間質(zhì)控活動中取得，準(zhǔn)確判定過分離株也可使用。 試驗(yàn)室要準(zhǔn)備好足夠種類和數(shù)量參考菌株，滿足培養(yǎng)基、試劑盒和試劑質(zhì)量測試需要。菌種： 第7頁食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)第8頁食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)第9頁食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)第10頁食品安全國家

4、標(biāo)準(zhǔn)第11頁微生物常規(guī)檢驗(yàn)技術(shù)平板劃線分離： 第12頁微生物常規(guī)檢驗(yàn)技術(shù)形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察： 染色特征 形狀 大小 排列方式 細(xì)胞結(jié)構(gòu)（包含細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞核、鞭毛、 芽孢等） 第13頁微生物常規(guī)檢驗(yàn)技術(shù)革蘭氏染色： 1884年由丹麥病理學(xué)家C.Gram所創(chuàng)建。革蘭染色法可將全部細(xì)菌區(qū)分為革蘭氏陽性菌（G+）和革蘭氏陰性菌（G-）兩大類，是細(xì)菌學(xué)上最慣用判別染色法。第14頁微生物常規(guī)檢驗(yàn)技術(shù)革蘭氏染色： G-菌細(xì)胞壁中含有較多易被乙醇溶解類脂質(zhì)，而且肽聚糖層較薄、交聯(lián)度低，故用乙醇或丙酮脫色時(shí)溶解了類脂質(zhì)，增加了細(xì)胞壁通透性，使初染結(jié)晶紫和碘復(fù)合物易于滲出，結(jié)果細(xì)菌就被脫色，再經(jīng)石炭酸復(fù)紅復(fù)染后

5、就成紅色。 G+菌細(xì)胞壁中肽聚糖層厚且交聯(lián)度高，類脂質(zhì)含量少，經(jīng)脫色劑處理后反而使肽聚糖層孔徑縮小，通透性降低，所以細(xì)菌仍保留初染時(shí)顏色。第15頁微生物常規(guī)檢驗(yàn)技術(shù)革蘭氏染色：第16頁微生物常規(guī)檢驗(yàn)技術(shù)革蘭氏染色：第17頁微生物常規(guī)檢驗(yàn)技術(shù)細(xì)菌運(yùn)動性觀察： 第18頁微生物常規(guī)檢驗(yàn)技術(shù)細(xì)菌運(yùn)動性觀察： 第19頁微生物常規(guī)檢驗(yàn)技術(shù)設(shè)計(jì)生化試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)： 在試驗(yàn)中加入一些 化學(xué)物 質(zhì)，使細(xì)菌代謝路徑中分解代謝產(chǎn)物與加入化學(xué)物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生一些改變或出現(xiàn)某種特征。第20頁微生物常規(guī)檢驗(yàn)技術(shù)過氧化氫酶及過氧化物酶試驗(yàn)原理： 2H2O2 過氧化氫酶 2H2O+O2 過氧化物酶：RH2+H2O2 過氧化物酶

6、R+2H2O 陽性：細(xì)菌變?yōu)楹诤稚?，有氣泡產(chǎn)生； 陰性： 不變色。陽性陽性陰性第21頁微生物常規(guī)檢驗(yàn)技術(shù)細(xì)胞色素氧化酶試驗(yàn)原理： 細(xì)胞色素C 細(xì)胞色素氧化酶 氧化型細(xì)胞色素C +對苯二胺 + -奈酚 靛酚蘭（藍(lán)色） 陽性： 2分鐘內(nèi)生成藍(lán)色為陽性； 陰性：無改變。陽性陰性第22頁微生物常規(guī)檢驗(yàn)技術(shù)氰化鉀試驗(yàn)： 陽性： 不抑菌，變混濁 陰性：抑菌第23頁微生物常規(guī)檢驗(yàn)技術(shù)硝酸鹽還原試驗(yàn)原理： KNO3 還原酶 KNO2 KNO2+對氨基苯磺酸+ -萘胺 （立刻或數(shù)分鐘內(nèi)）紅色化合物陽性陰性第24頁微生物常規(guī)檢驗(yàn)技術(shù)糖發(fā)酵試驗(yàn)：分解糖產(chǎn)酸，PH值下降，使培養(yǎng)基酸堿指示劑發(fā)生改變。 陽性：產(chǎn)酸產(chǎn)氣陰

7、性陽性第25頁微生物常規(guī)檢驗(yàn)技術(shù)氧化發(fā)酵試驗(yàn)（O/F試驗(yàn)） ： 有些微生物分解葡萄糖必須有氧參加，此種細(xì)菌稱為氧化型； 有些細(xì)菌有氧無氧均可分解葡萄糖，稱發(fā)酵型； 有些細(xì)菌任何條件都不能分解葡萄糖，稱產(chǎn)堿型。陰性滅菌瓊脂（厭氧）第26頁微生物常規(guī)檢驗(yàn)技術(shù)甲基紅試驗(yàn)（MR試驗(yàn)）原理 ：一些細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸可被深入分解為甲酸、乙酸、乳酸和琥珀酸而使培養(yǎng)基pH值下降到4.5以下，加入甲基紅指示劑出現(xiàn)紅色反應(yīng)。第27頁微生物常規(guī)檢驗(yàn)技術(shù)V-P試驗(yàn)原理：一些細(xì)菌分解葡萄糖為丙酮酸，深入脫羧產(chǎn)生乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在堿性溶液中被空氣中氧氧化成二乙酰丁二酮，進(jìn)而與培養(yǎng)基內(nèi)蛋白胨中所含精

8、氨酸胍基發(fā)生反應(yīng)生成紅色化合物。陰性陽性第28頁微生物常規(guī)檢驗(yàn)技術(shù)檸檬酸鹽試驗(yàn)（枸櫞酸鹽試驗(yàn)）原理： 一些微生物能夠以銨鹽作為唯一氮源，以檸檬酸鹽作為唯一碳源，在檸檬酸鹽培養(yǎng)基上生長，分解檸檬酸鹽生成碳酸鹽，使培養(yǎng)基變成堿性，酸堿指示劑變色。陰性陽性第29頁微生物常規(guī)檢驗(yàn)技術(shù)丙二酸鈉試驗(yàn)原理： 一些微生物能夠以丙二酸鈉作為唯一碳源，分解丙二酸鈉生成碳酸鈉，使培養(yǎng)基變成堿性，酸堿指示劑變色。陰性陽性第30頁微生物常規(guī)檢驗(yàn)技術(shù)馬尿酸鹽試驗(yàn)原理： 一些細(xì)菌能夠水解馬尿酸生成苯甲酸和甘氨酸，苯甲酸和Fe3+反應(yīng)生成有色苯甲酸鹽沉淀。陽性第31頁微生物常規(guī)檢驗(yàn)技術(shù)明膠液化試驗(yàn)原理： 一些細(xì)菌可產(chǎn)生胞外酶

9、，使明膠蛋白分解為氨基酸,而失去明膠凝固能力。苯丙氨酸脫氨酶試驗(yàn)原理： 一些細(xì)菌有苯丙氨酸脫氨酶，能夠使培養(yǎng)基中苯丙氨酸脫氨 生成苯丙酮酸，其與FeCl3反應(yīng)產(chǎn)生藍(lán)綠色 。陽性第32頁微生物常規(guī)檢驗(yàn)技術(shù)氨基酸脫羧酶試驗(yàn)原理： 一些細(xì)菌能夠產(chǎn)生氨基酸脫羧酶使氨基酸脫酸，產(chǎn)生胺類物質(zhì)，使培養(yǎng)基變堿，酸堿指示劑變色。陽性陰性第33頁微生物常規(guī)檢驗(yàn)技術(shù)脲酶試驗(yàn)原理： 一些細(xì)菌能產(chǎn)生脲酶（尿素酶），可催化尿素分解為氨和二氧化碳，使pH變高，培養(yǎng)基變?yōu)閴A性，酚紅指示劑變?yōu)榧t色。第34頁微生物常規(guī)檢驗(yàn)技術(shù)靛基質(zhì)試驗(yàn)（吲哚試驗(yàn)）原理：一些細(xì)菌含有色氨酸酶，能夠分解蛋白胨色氨酸，產(chǎn)生靛基質(zhì)，靛基質(zhì)可與對二甲氨基

10、苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而成紅色。陽性陰性第35頁微生物常規(guī)檢驗(yàn)技術(shù)ONPG試驗(yàn)（ 檢測-半乳糖苷酶）原理： 鄰硝基苯-D-吡喃半乳糖苷 -半乳糖苷酶 鄰硝基苯酚+ -D半乳糖陽性陰性第36頁微生物常規(guī)檢驗(yàn)技術(shù)淀粉酶試驗(yàn)原理： 一些細(xì)菌可產(chǎn)生淀粉酶將淀粉分解為雙糖或單糖，加入碘不變色。接種菌，可產(chǎn)生淀粉酶第37頁微生物常規(guī)檢驗(yàn)技術(shù)卵磷脂酶試驗(yàn)原理：一些梭狀芽孢桿菌產(chǎn)生卵磷脂酶，經(jīng)鈣離子作用，能分解卵黃或血清中卵磷脂產(chǎn)生混濁沉淀狀甘油酯和水溶性磷酸膽堿，在菌落周圍形成一個(gè)乳白色沉淀或渾濁帶。乳白色渾濁帶第38頁微生物常規(guī)檢驗(yàn)技術(shù)脫氫酶試驗(yàn)原理： 一些微生物有脫氫酶，可使氯化三苯四氮唑（TTC)還

11、原，由無色變?yōu)榧t色。陽性第39頁微生物常規(guī)檢驗(yàn)技術(shù)硫化氫試驗(yàn)原理： 一些微生物分解含硫氨基酸（胱氨酸或半胱氨酸），產(chǎn)生硫化氫與二價(jià)鐵鹽或鉛鹽生成黑色沉淀。陽性第40頁微生物常規(guī)檢驗(yàn)技術(shù)七葉苷水解試驗(yàn)原理： 一些細(xì)菌能分解七葉苷生成七葉素，七葉素與培養(yǎng)基中枸櫞酸鐵二價(jià)鐵離子發(fā)生反應(yīng)，形成黑色化合物。第41頁微生物常規(guī)檢驗(yàn)技術(shù)石蕊牛奶試驗(yàn)原理：細(xì)菌對牛奶利用分為：產(chǎn)酸及酸凝固產(chǎn)堿胨化作用凝乳酶凝固石蕊還原 第42頁微生物常規(guī)檢驗(yàn)技術(shù)三糖鐵試驗(yàn)（TSI）： 成份：牛肉膏、蛋白胨（氮源） 三糖：葡萄糖0.1%、乳糖1%、蔗糖1% 硫酸亞鐵 瓊脂 pH值調(diào)到7.4 培養(yǎng)基擺成高層斜面 黃 pH7接種：（

12、1）穿刺接種 （2）斜面劃線接種 36oC培養(yǎng)18-二十四小時(shí)第43頁三糖鐵試驗(yàn)（TSI）：觀察結(jié)果。（1）分解葡萄糖、乳糖、蔗糖：斜面產(chǎn)酸變?yōu)辄S色（陽性），底層產(chǎn)酸變?yōu)辄S色（陽性）。（2）分解乳糖、蔗糖，不分解葡萄糖：斜面、底層都產(chǎn)酸變?yōu)辄S色（陽性）。 （3）分解葡萄糖、不分解乳糖、蔗糖： 斜面：產(chǎn)堿顯紅色 （陰性） 底層：產(chǎn)酸顯黃色 （陽性）（4）分解含硫氨基酸 產(chǎn)硫化氫硫化氫與Fe2+生成黑色沉淀，培養(yǎng)基變黑（FeS）。（5）分解糖類產(chǎn)氣，培養(yǎng)基中有氣泡。微生物常規(guī)檢驗(yàn)技術(shù)（1）（2）（3）第44頁微生物常規(guī)檢驗(yàn)技術(shù)血清學(xué)試驗(yàn)：抗原與抗體在體外發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)叫血清學(xué)試驗(yàn)。 抗原：能在

13、體內(nèi)引發(fā)免疫反應(yīng)物質(zhì) 抗體：抗原刺激產(chǎn)生物質(zhì)玻片凝集試驗(yàn)Ag+AbAg+生理鹽水（對照）第45頁微生物常規(guī)檢驗(yàn)技術(shù)生化試驗(yàn)陽性對照菌株陰性對照菌株靛基質(zhì)試驗(yàn)大腸埃希氏菌產(chǎn)氣腸桿菌甲基紅試驗(yàn)大腸埃希氏菌產(chǎn)氣腸桿菌VP試驗(yàn)陰溝腸桿菌大腸埃希氏菌尿素酶分解試驗(yàn)奇異變形桿菌大腸埃希氏菌硫化氫產(chǎn)生試驗(yàn)普通變形桿菌宋內(nèi)氏痢疾桿菌苯丙氨酸脫氨酶奇異變形桿菌大腸埃希氏菌丙二酸鹽利用試驗(yàn)肺炎克雷伯菌或亞利桑那沙門氏菌大腸埃希氏菌第46頁微生物常規(guī)檢驗(yàn)技術(shù)生化試驗(yàn)陽性對照菌株陰性對照菌株賴氨酸脫羧酶鼠傷寒沙門氏菌或粘質(zhì)沙雷氏菌普通變形桿菌鳥氨酸脫羧酶鼠傷寒沙門氏菌或奇異變形桿菌普通變形桿菌精氨酸雙水解酶鼠傷寒沙門

14、氏菌或陰溝腸桿菌普通變形桿菌鄰位硝基苯-D半乳糖苷大腸埃希氏菌奇異變形桿菌第47頁微生物常規(guī)檢驗(yàn)技術(shù)生化試驗(yàn)陽性對照菌株陰性對照菌株明膠液化試驗(yàn)銅綠假單胞菌硝酸鹽陰性桿菌硝酸鹽還原試驗(yàn)銅綠假單胞菌硝酸鹽陰性桿菌凝固酶試驗(yàn)（兔血漿）金黃色葡萄球菌表皮葡萄球菌觸酶試驗(yàn)金黃色葡萄球菌肺炎鏈球菌膽鹽溶菌試驗(yàn)肺炎鏈球菌綠色鏈球菌七葉苷分解試驗(yàn)?zāi)c球菌溶血性鏈球菌6.5%氯化鈉肉湯腸球菌溶血性鏈球菌第48頁微生物常規(guī)檢驗(yàn)技術(shù)生化試驗(yàn)陽性對照菌株陰性對照菌株氧化酶試驗(yàn)銅綠假單胞菌大腸埃希氏菌氰化鉀抑制試驗(yàn)產(chǎn)氣腸桿菌大腸埃希氏菌Dnase試驗(yàn)粘質(zhì)沙雷氏菌陰溝腸桿菌桿菌肽試驗(yàn)A群鏈球菌B群鏈球菌第49頁致病菌檢驗(yàn)

15、沙門氏菌檢驗(yàn)：沙門氏菌是與腸桿菌科中形態(tài)和培養(yǎng)特征，生化反應(yīng)及抗原結(jié)構(gòu)相同，被O1噬菌體裂解一群革蘭氏陰性桿菌。廣泛存在于自然環(huán)境中，經(jīng)過沙門氏菌病患者或健康帶菌人和動物排泄物污染環(huán)境和食品。 易于污染高危食物：畜禽肉類、蛋、奶及其制品。沙門菌在肉類中不分解蛋白質(zhì)，不產(chǎn)生靛基質(zhì)，所以當(dāng)食品污染了沙門菌后，通常沒有感官性狀改變。第50頁沙門氏菌檢驗(yàn)第51頁沙門氏菌檢驗(yàn)菌體短桿狀，革蘭氏染色陰性，無芽孢。第52頁沙門氏菌檢驗(yàn) 菌落為黑色有金屬光澤、棕褐色或灰色, 菌落周圍培養(yǎng)基可呈黑色或棕色；有些菌株形成灰綠色菌落, 周圍培養(yǎng)基不變。BS培養(yǎng)基第53頁沙門氏菌檢驗(yàn)XLD平板科瑪嘉沙門氏菌顯色培養(yǎng)基

16、平板第54頁沙門氏菌檢驗(yàn)初篩微生物菌落顏色沙門氏菌紫色(直徑約1mm)檸檬酸桿菌屬藍(lán)色(直徑約1mm)變形桿菌無色或被抑制第55頁沙門氏菌檢驗(yàn)賴氨酸脫羧酶靛基質(zhì)尿素分解氰化鉀（KCN）甘露醇硫化氫產(chǎn)生山梨醇ONPG衛(wèi)茅醇水揚(yáng)苷丙二酸鹽沙門氏菌A-F“O”多價(jià)血清凝集三糖鐵分解葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不發(fā)酵乳糖，產(chǎn)生硫化氫關(guān)鍵特征第56頁沙門氏菌檢驗(yàn)斜面紅色，底面黃色制好培養(yǎng)基培養(yǎng)基全黃色斜面、底部黃色，并產(chǎn)生H2S斜面紅色，底部黃色，產(chǎn)生H2S底面黃色，并產(chǎn)生CO2對照管TSI試驗(yàn)第57頁沙門氏菌檢驗(yàn)靛基質(zhì)（吲哚）試驗(yàn)第58頁沙門氏菌檢驗(yàn)?zāi)蛩孛冈囼?yàn)第59頁沙門氏菌檢驗(yàn)ONPG試驗(yàn)左為陽性（黃） 右為

17、陰性第60頁沙門氏菌檢驗(yàn) 血清學(xué)分型判定：有條件可進(jìn)行血清學(xué)分型判定。 依據(jù)生化試驗(yàn)和血清學(xué)分型判定結(jié)果，匯報(bào)檢驗(yàn)結(jié)果。第61頁志賀氏菌檢驗(yàn)志賀氏菌檢驗(yàn)： 需氧或兼性厭氧。營養(yǎng)要求不高，能在普通培養(yǎng)基上生長，最適溫度為37，最適pH為6.4-7.8。37培養(yǎng)18-二十四小時(shí)后菌落呈圓形、微凸、光滑濕潤、無色、半透明、邊緣整齊，直徑約2nm，能分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。不發(fā)酵乳糖，靛基質(zhì)產(chǎn)生不定，甲基紅陽性，VP試驗(yàn)陰性，不分解尿素，不產(chǎn)生H2S。根據(jù)生化反應(yīng)可進(jìn)行初步分類。第62頁志賀氏菌檢驗(yàn)第63頁志賀氏菌檢驗(yàn)菌體呈短桿狀，革蘭氏染色陰性，無芽孢志賀氏菌顯色培養(yǎng)基第64頁志賀氏菌檢驗(yàn)葡萄糖半固

18、體黃色，無動力氧化酶葡萄糖銨5乳糖發(fā)酵西蒙氏檸檬酸鹽七葉苷分解賴氨酸脫羧酶靛基質(zhì)鳥氨酸脫羧酶甘露醇尿素酶棉子糖氰化鉀生長甘油水楊苷分解志賀氏菌屬四種多價(jià)血清凝集三糖鐵分解葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不發(fā)酵乳糖，不產(chǎn)生硫化氫關(guān)鍵特征第65頁志賀氏菌檢驗(yàn)葡萄糖+乳糖- 甘露醇- 痢疾志賀氏菌1、3、4、5、6、9、10型 痢疾志賀氏菌2、7、8型 福氏6型，鮑氏1、2、3、4、5、6、8、10、12、14型 福氏痢疾菌（1、2、3、4、5型）鮑氏5、7、9、11、13、15型靛基質(zhì)- 乳糖+ 宋氏志賀氏菌 靛基質(zhì)- 靛基質(zhì)+ 靛基質(zhì)- 靛基質(zhì)+ 甘露醇+ 第66頁志賀氏菌檢驗(yàn)2志賀氏菌3沙門氏菌4大腸桿菌

19、三糖鐵（TSI）瓊脂試驗(yàn)第67頁溶血性鏈球菌檢驗(yàn)溶血性鏈球菌檢驗(yàn)：鏈球菌科鏈球菌屬，據(jù)溶血能力不一樣分四種：甲型溶血性鏈球菌（-溶血性鏈球菌）、乙型溶血性鏈球菌（-溶血性鏈球菌）、丙型溶血性鏈球菌（-溶血性鏈球菌）、亞甲型溶血性鏈球菌（-溶血性鏈球菌）。 形態(tài)：本菌呈球形或卵圓形，直徑0.51微米，鏈狀排列，鏈長短不一，短者48個(gè)細(xì)胞組長，長者2030個(gè)，鏈長短常與細(xì)菌種類及生長環(huán)境相關(guān)；液體培養(yǎng)中易呈長鏈；在固體培養(yǎng)基中呈短鏈，不形成芽孢，無鞭毛，不能運(yùn)動。 培養(yǎng)特征：兼性厭氧，營養(yǎng)要求高。第68頁溶血性鏈球菌檢驗(yàn)第69頁溶血性鏈球菌檢驗(yàn)溶血性鏈球菌第70頁溶血性鏈球菌檢驗(yàn)甲鏈乙鏈丙鏈血平板

20、第71頁溶血性鏈球菌檢驗(yàn)鏈激酶試驗(yàn)桿菌肽敏感試驗(yàn)溶血關(guān)鍵特征第72頁溶血性鏈球菌檢驗(yàn)?zāi)倘芙怄溂っ该舾性囼?yàn)第73頁溶血性鏈球菌檢驗(yàn)桿菌肽敏感試驗(yàn)第74頁金黃色葡萄球菌檢驗(yàn) 金黃色葡萄球菌判定： 形態(tài)與染色：金黃色葡萄球菌無芽胞、鞭毛，大多數(shù)無莢膜。經(jīng)典金黃色葡萄球菌為球型，直徑0.8 mm左右，顯微鏡下排列成葡萄串狀。革蘭氏染色陽性。 金黃色葡萄球菌營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長良好，需氧或兼性厭氧，最適生長溫度37，最適生長pH 7.4。平板上菌落厚、有光澤、圓形凸起，邊緣整齊、表面光滑、濕潤，直徑普通為12 mm。血平板菌落周圍形成透明溶血環(huán)。金黃色葡萄球菌有高度耐鹽性，可在7.515%

21、NaCl肉湯中生長。第75頁金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)第76頁金黃色葡萄球菌檢驗(yàn) 經(jīng)典金黃色葡萄球菌在BP瓊脂平板上為灰黑色菌落，其外圍有一不透明圈。 本培養(yǎng)基用于直接判定金黃色葡萄球菌，假如在 18-24 小時(shí)沒有出現(xiàn)經(jīng)典菌落，需再培養(yǎng)18-24 小時(shí)。有時(shí)金黃色葡萄球菌不顯灰黑色 ，但其外圍有一不透明圈。 第77頁金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)血漿凝固酶試驗(yàn)第78頁副溶血性弧菌檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)： 形態(tài)與染色：革蘭氏陰性，展現(xiàn)多形態(tài)，表現(xiàn)為桿狀、棒狀、弧狀甚至球狀、絲狀等各種形態(tài)，無芽孢，有鞭毛。 培養(yǎng)特征：耗氧性強(qiáng)，在厭氧條件下生長遲緩，營養(yǎng)要求不高，在無鹽培養(yǎng)基中不能生長，在含鹽0.5%培養(yǎng)基中即可生長

22、，生長適宜鹽濃度為3-3.5%。第79頁副溶血性弧菌檢驗(yàn)第80頁副溶血性弧菌檢驗(yàn)第81頁副溶血性弧菌檢驗(yàn) 副溶血弧菌菌落在TCBS培養(yǎng)基上呈圓形 , 邊緣整齊、濕潤、稍混濁、半透明，多數(shù)具尖心、斗笠狀，藍(lán)綠色菌落，直徑 2-4mm 。 第82頁副溶血性弧菌檢驗(yàn)氧化酶+V-P動力+ONPG蔗糖（實(shí)際為）嗜鹽性(NaCl%)葡萄糖+0%NaCl甘露醇+3%NaCl分解葡萄糖產(chǎn)氣6%NaCl乳糖8%NaCl硫化氫10%NaCl賴氨酸脫羧酶關(guān)鍵特征第83頁大腸肝菌O157：H7/NM檢驗(yàn)大腸肝菌O157：H7/NM檢驗(yàn)： 腸出血性大腸桿菌（EHEC）是能引發(fā)人出血性腹瀉和腸炎一群大腸埃希氏菌。革蘭氏染

23、色陰性，無芽胞，有鞭毛，動力試驗(yàn)呈陽性。其鞭毛抗原可丟失，動力試驗(yàn)陰性。以O(shè)157:H7血清型為代表菌株。 第84頁大腸肝菌O157：H7/NM檢驗(yàn)第85頁大腸肝菌O157：H7/NM檢驗(yàn)大腸肝菌O157：H7/NM檢驗(yàn)： CT-SMAC（山梨醇麥康凱瓊脂基礎(chǔ) ）顯色培養(yǎng)基不發(fā)酵山梨醇菌落為圓形、光滑、較小無色菌落，中心展現(xiàn)較暗灰褐色；發(fā)酵山梨醇菌落為紅色CHROMagarO157弧菌顯色培養(yǎng)基圓形、較小菌落，中心呈淡紫色-紫紅色，邊緣為無色或淺灰色第86頁大腸肝菌O157：H7/NM檢驗(yàn)大腸肝菌O157：H7/NM檢驗(yàn)： CHROMagarO157弧菌顯色培養(yǎng)基O157第87頁大腸肝菌O157：H7/NM檢驗(yàn)CT-SMAC顯色培養(yǎng)基第88頁大腸肝菌O157：H7/NM檢驗(yàn)山梨醇氧化酶MR-VPMR,VP纖維二糖發(fā)酵西蒙氏檸檬酸鹽靛基質(zhì)賴氨酸脫羧酶棉子糖發(fā)酵鳥氨酸脫羧酶MUG三糖鐵產(chǎn)酸，不產(chǎn)生硫化氫關(guān)鍵特征第89頁單核細(xì)胞增生李斯特氏菌檢驗(yàn)單核細(xì)胞增生李斯特氏菌檢