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文檔簡(jiǎn)介
1、 專題1基因工程基因工程是在水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)和施工的,又叫做技術(shù)。(一)基因工程的基本工具“分子手術(shù)刀”一一()來(lái)源:主要是從中分離純化出來(lái)的。()功能:能夠識(shí)別雙鏈分子的某種的核苷酸序列,并且使每一條鏈中部位的兩個(gè)核苷酸之間的斷開(kāi),因此具有性。()結(jié)果:經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的片段末端通常有兩種形式:和“分子縫合針”一一兩種連接酶(連接酶和連接酶)的比較:相同點(diǎn):都縫合鍵。區(qū)別:-連接酶來(lái)源于3只能將雙鏈片段互補(bǔ)的之間的磷酸二酯鍵連接起來(lái);而連接酶能縫合,但連接平末端的之間的效率較一。TOC o 1-5 h z與聚合酶作用的異同聚合酶只能將加到已有的核苷酸片段的末端,形成磷酸二酯鍵。連接酶是連接的末
2、端,形成磷酸二酯鍵?!胺肿舆\(yùn)輸車”-()載體具備的條件:。()最常用的載體是斷是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單的、獨(dú)立于細(xì)菌染色體外,并具有to的分子有()其它載體:(二)基因工程的基本操作程序基因工程中,如果用某種生物發(fā)育的某個(gè)時(shí)期的反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的多種互補(bǔ)片段,與載體連接后儲(chǔ)存在一個(gè)受體菌群中,這個(gè)受體菌群體就叫做這種生物的第一步:目的基因是指:編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因。目的基因的獲取方法.技術(shù)擴(kuò)增目的基因()原理:()過(guò)程:第一步:加熱至5使;第二步:冷卻到,_第三步:加熱至,熱穩(wěn)定聚合酶從引物起始互補(bǔ)鏈的合成。第二步:方法:限制酶分別切割載體和目的基因,再用連接酶把兩者連接。目的基因能與運(yùn)載體重組的原因
3、目的:使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在,并且可以遺傳至下一代,使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。組成:_()啟動(dòng)子:是一段有特殊結(jié)構(gòu)的片段,位于基因的,是有識(shí)別和結(jié)合的部位,能驅(qū)動(dòng)基因車錄出,最終獲得所需的蛋白質(zhì)。()終止子:也是一段有特殊結(jié)構(gòu)的片段,位于基因的尾端。()標(biāo)記基因的作用:是為了鑒定,從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來(lái)。常用的標(biāo)記基因是分子重組限制酶原核生物特定特定磷酸二酯鍵專一粘性末端平末端連接酶磷酸二酯鍵大腸桿菌粘性末端兩種末端低單個(gè)核苷酸兩個(gè)片段運(yùn)載體能在受體細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)定保存具有一至多個(gè)限制酶切點(diǎn),供外源片段插入具有標(biāo)記基因,供重組的鑒定和選擇質(zhì)粒自我復(fù)制雙鏈環(huán)狀噬菌體動(dòng)植物病
4、毒文庫(kù)獲取目的基因從基因文庫(kù)中獲取人工合成雙鏈復(fù)制原理解旋引物與互補(bǔ)單鏈結(jié)合基因表達(dá)載體的構(gòu)建同種的組成和結(jié)構(gòu)相同目的基因啟動(dòng)子終止子標(biāo)記基因首段聚合受體細(xì)胞中是否含有目的基因抗生素抗性基因第三步2轉(zhuǎn)化的概念:是目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi),并且在受體細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定存在和表達(dá)的過(guò)程。2常.用的轉(zhuǎn)化方法:將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞:采用最多的方法是其次還有和等。將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞:最常用的方法是5此方法的受體細(xì)胞多是。將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞:原核生物作為受體細(xì)胞的原因是,最常用的原核細(xì)胞是,其轉(zhuǎn)化方法是:先用處理細(xì)胞,使其成為再將溶于緩沖液中與感受態(tài)細(xì)胞混合,在一定的溫度下促進(jìn)感受態(tài)細(xì)胞吸收分子,完成轉(zhuǎn)
5、化過(guò)程。重組細(xì)胞導(dǎo)入受體細(xì)胞后,篩選含有基因表達(dá)載體受體細(xì)胞的依據(jù)是標(biāo)記基因是否表達(dá)。第四步:首先要檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的染色體上是否插入了目的基因,方法是采用其次還要檢測(cè)方法是采用用標(biāo)記的目的基因作探針與雜交。最后檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì),方法是從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì),用相應(yīng)的進(jìn)行有時(shí)還需進(jìn)行個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定。如轉(zhuǎn)基因抗蟲植物是否出現(xiàn)抗蟲性狀。(三)1蛋白質(zhì)工程的概念蛋白質(zhì)工程是指以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ),通過(guò)對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造,或制造一種,以滿足人類的生產(chǎn)和生活的需求。(基因工程在原則上只能生產(chǎn)自然界已存在的蛋白質(zhì))蛋白質(zhì)工程的基本途徑:從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)
6、,設(shè)計(jì)預(yù)期白用9推測(cè)應(yīng)有的0找到相對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列(基因)以上是蛋白質(zhì)工程特有的途徑;以下按照基因工程的一般步驟進(jìn)行。1將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞2農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法3基因槍法4花粉管通道法5顯微注射技術(shù)繁殖快多為單細(xì)胞遺傳物質(zhì)相對(duì)較少8大腸桿菌9鈣離子10感受態(tài)1將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞2農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法3基因槍法4花粉管通道法5顯微注射技術(shù)繁殖快多為單細(xì)胞遺傳物質(zhì)相對(duì)較少8大腸桿菌9鈣離子10感受態(tài)11基因表達(dá)載體12測(cè)與鑒定13DNA分子雜交技術(shù)14目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA15抗原16抗原一抗體雜交法或基因合成18新的蛋白質(zhì)19蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)20氨基酸序列專題2細(xì)胞工程(一)植物細(xì)胞工程理論基礎(chǔ)(原理
7、):全能性表達(dá)的難易程度O受精卵O生殖細(xì)胞O胚胎干細(xì)胞O干細(xì)胞O體細(xì)胞排序用6受精卵7目的基因的檢17基因修飾植物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞(大于或小于)重植物組織培養(yǎng)技術(shù)(1)過(guò)程:離體的植物器官、組織或細(xì)胞()用途:微型繁殖、目()地位:是培育轉(zhuǎn)基因植物、植物體細(xì)胞雜交技術(shù)試管苗一一植物體、細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)。培育植物新品種的最后一道工序。過(guò)程:讖豳年一晉1性質(zhì)物港嗝的船融細(xì)胞Zr續(xù)a原生質(zhì)曉廣質(zhì)但史雋產(chǎn)杷鯉制前右組織百分雜神桎模誘導(dǎo)融合的方法:物理法包括離心、振動(dòng)、電刺激等?;瘜W(xué)法一般是用意義:細(xì)胞全能性受精卵生殖細(xì)胞胚胎干細(xì)胞干細(xì)胞體細(xì)胞;大于愈傷組織5作物脫毒、制造人工種子、單倍體育種6植植物體
8、細(xì)胞雜交技術(shù)克服了遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙。作為誘導(dǎo)劑。(二)動(dòng)物細(xì)胞工程1.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)()概念:動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)的組織,將它分散成1然后放在適宜的中,讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖。()動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的流程:取動(dòng)物組織塊(動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織)一剪碎一用處理分散成一制成一轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng)一貼滿瓶壁的細(xì)胞重新用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)。()細(xì)胞貼壁和接觸抑制:懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上,稱為。細(xì)胞數(shù)目不斷增多,當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面時(shí),細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖,這種現(xiàn)象稱為()動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要滿足以下條件:培養(yǎng)液應(yīng)進(jìn)行處理。通常還要在培養(yǎng)液中添加
9、一定量的,以防培養(yǎng)過(guò)程中的污染。止匕外,應(yīng)定期更換培養(yǎng)液,防止。:合成培養(yǎng)基成分:糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、微量元素等。通常需加入等天然成分。:適宜溫度:哺乳動(dòng)物多是.5;H。:空氣+_C是所必需的,的主要作用是()動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用:制備病毒疫苗、檢測(cè)有毒物質(zhì)、培養(yǎng)醫(yī)學(xué)研究的各種細(xì)胞。動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物()哺乳動(dòng)物核移植可以分為核移植(比較容易)和核移植(比較難)。()選用去核卵母細(xì)胞的原因:卵母細(xì)胞()體細(xì)胞核移植的大致過(guò)程是:為理為。(4)體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用:加速家畜遺傳改良進(jìn)程,促進(jìn)良畜群繁育;保護(hù)瀕危物種,增大存活數(shù)量;生產(chǎn)珍貴的醫(yī)用蛋白;作為異種移植的供體
10、;用于組織器官的移植等。()體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問(wèn)題:克隆動(dòng)物存在著健康問(wèn)題、表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷等。1單個(gè)細(xì)胞,培養(yǎng)基胰2蛋白酶或膠原蛋白酶單個(gè)細(xì)胞細(xì)胞懸液原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)。3細(xì)胞貼壁相互抑制細(xì)胞的接觸抑制。無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境無(wú)菌處理抗生素代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害。營(yíng)養(yǎng):血清、血漿溫度:氣體環(huán)境:細(xì)胞代謝所必需的,維持培養(yǎng)液的。5制備單克隆抗體6胚胎細(xì)胞體細(xì)胞7比較大,容易操作營(yíng)養(yǎng)豐富。8核移植胚胎移植動(dòng).物細(xì)胞融合()動(dòng)物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交,是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程。融合后形成的具有原來(lái)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞,稱為二細(xì)胞雜交()動(dòng)物細(xì)胞融合與植物原生質(zhì)
11、體融合的原理基本相同,誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法與植物原生質(zhì)體融合的方法類似,常用的誘導(dǎo)因素有、電刺激等。()動(dòng)物細(xì)胞融合的意義:克服了、成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物生物新品種培育的重要手段。(4)動(dòng)物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的比較:比較項(xiàng)目細(xì)胞融合的原理細(xì)胞融合的方法誘導(dǎo)手段用法植物體細(xì)胞雜交細(xì)胞膜的流動(dòng)性去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合離心、電刺激、振動(dòng),聚乙二醇誘導(dǎo)克服了遠(yuǎn)緣雜交的不親和性,獲得雜種植株動(dòng)物細(xì)胞融合細(xì)胞膜的流動(dòng)性使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合再加滅活的病毒誘導(dǎo)制備單克隆抗體的技術(shù)之一4.單克隆抗體()抗體:一個(gè)淋巴細(xì)胞只分泌一種。從血清中分離出的抗體產(chǎn)量低、純度低、特異性差。
12、()單克隆抗體的制備過(guò)程:()雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn):既能,又能產(chǎn)生。()單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn):。()單克隆抗體的作用::準(zhǔn)確識(shí)別各種抗原物質(zhì)的細(xì)微差異,并跟一定抗原發(fā)生特異性結(jié)合,具有準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速的優(yōu)點(diǎn)。:主要用于治療癌癥治療,可制成“”,也有少量用于治療其它疾病。大量繁殖,又能產(chǎn)生專一的抗體。特異性強(qiáng),靈敏度高,并能大量制備。作為診斷試劑用于治療疾病和運(yùn)載藥物“生物導(dǎo)彈”專題3胚胎工程(一)動(dòng)物胚胎發(fā)育的基本過(guò)程1胚胎工程是指對(duì)動(dòng)物所進(jìn)行的多種顯微操作和處理技術(shù),如、等技術(shù)。經(jīng)過(guò)處理后獲得的胚胎,還需移植到生產(chǎn)后代,以滿足人類的各種需求。2動(dòng)物胚胎發(fā)育的基本過(guò)程()受精場(chǎng)所是母體的。()卵
13、裂期:特點(diǎn):細(xì)胞有絲分裂,細(xì)胞數(shù)量不斷增加,但胚胎的總體體積。()桑椹胚:特點(diǎn):胚胎細(xì)胞數(shù)目達(dá)到個(gè)左右時(shí),胚胎形成致密的細(xì)胞團(tuán),形似桑椹。是(全能或者已分化)細(xì)胞。()囊胚:特點(diǎn):細(xì)胞開(kāi)始出現(xiàn)(該時(shí)期細(xì)胞的全能性)以聚集在胚胎一端個(gè)體較大的細(xì)胞稱為,將來(lái)發(fā)育成胎兒的各種組織。中間的空腔稱為0()原腸胚:特點(diǎn):有Y(幾層)胚層的分化,具有囊胚腔和原腸腔。(二)胚胎干細(xì)胞1哺乳動(dòng)物的胚胎干細(xì)胞簡(jiǎn)稱或細(xì)胞,來(lái)源于中分離出來(lái)。2具有胚胎細(xì)胞的特性,在形態(tài)上表現(xiàn)為小,大,明顯;在功能上,具有,可分化為成年動(dòng)物體內(nèi)任何一種組織細(xì)胞。另外,在體外培養(yǎng)的條件下,可以增殖而不發(fā)生分化,可進(jìn)行冷凍保存,也可進(jìn)行遺
14、傳改造。、胚胎干細(xì)胞的主要用途是:可用于研究哺乳動(dòng)物個(gè)體發(fā)生和發(fā)育規(guī)律;是在體外條件下研究細(xì)胞分化的理想材料,在培養(yǎng)液中加入,如牛黃酸等化學(xué)物質(zhì)時(shí),就可以誘導(dǎo)細(xì)胞向不同類型的組織細(xì)胞分化,這為揭示細(xì)胞分化和細(xì)胞凋亡的機(jī)理提供Y有效的手段;可以用于治療人類的某些頑疾,如帕金森綜合癥、少年糖尿病等;利用可以被誘導(dǎo)分化形成新的組織細(xì)胞的特性,移植細(xì)胞可使壞死或退化的部位得以修復(fù)并恢復(fù)正常功能;隨著組織工程技術(shù)的發(fā)展,通過(guò)細(xì)胞體外,定向培育出,用于,解決供體器官不足和器官移植后的問(wèn)題。(三)胚胎工程的應(yīng)用1體.外受精和胚胎的早期培養(yǎng)(1卵)母細(xì)胞的采集和培養(yǎng):主要方法:用處理,使其排出更多的卵子,然后
15、,從中沖取卵子,直接與獲能的精子在體外受精。第二種方法:從剛屠宰母畜的卵巢中采集卵母細(xì)胞;第三種方法是借助超聲波探測(cè)儀、腹腔鏡等直接從中吸取卵母細(xì)胞。采集的卵母細(xì)胞,都要在體外經(jīng)人工培養(yǎng)成熟后,才能與獲能的精子受精。精子的采集和獲能:在體外受精前,要對(duì)精子進(jìn)行處理。受精:獲能的精子和培養(yǎng)成熟的卵細(xì)胞在溶液或?qū)S玫氖芫芤褐型瓿墒芫^(guò)程。胚胎的早期培養(yǎng):精子與卵子在體外受精后,應(yīng)將受精卵移入發(fā)育培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng),以檢查受精狀況和受精卵的發(fā)育能力。培養(yǎng)液成分較復(fù)雜,除一些無(wú)機(jī)鹽和有機(jī)鹽外,還需添加維生素、激素、氨基酸、核苷酸等營(yíng)養(yǎng)成分,以及等物質(zhì)。當(dāng)胚胎發(fā)育到適宜的階段時(shí),可將其取出向或冷凍保存。
16、不同動(dòng)物胚胎移植的時(shí)間不同。牛、羊一般要培育到謔胚階段才能進(jìn)行移植,小鼠、家兔等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物可在更早的階段移植,人的體外受精胚胎可在個(gè)細(xì)胞階段移植。早期胚胎或配子胚胎移植、體外受精、胚胎分割、胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)雌性動(dòng)物體內(nèi)輸卵管上段。5并不增加,或略有減小全6能細(xì)胞。7分化較高內(nèi)細(xì)胞團(tuán)囊胚腔。8三早9期胚胎或從原始性腺中10體積小,細(xì)胞核大,核仁明顯;發(fā)育的全能性11分化誘導(dǎo)因子1誘2導(dǎo)分化人造組織器官器官移植免疫排斥1、促性腺激素處理輸卵管中沖取卵子卵巢1獲4能1獲5能溶液16血清受體移植桑椹胚或囊胚2胚.胎移植胚胎移植是指將雌性動(dòng)物的早期胚胎,或者通過(guò)體外受精及其它方式得到的胚胎,移植到其它雌性動(dòng)
17、物的體內(nèi),使之繼續(xù)發(fā)育為新個(gè)體的技術(shù)。其中提供胚胎的個(gè)體稱為:”_接受胚胎的個(gè)體稱為“。(供體為優(yōu)良品種,作為受體的雌性動(dòng)物應(yīng)為常見(jiàn)或存量大的品種。)地位:如轉(zhuǎn)基因、核移植,或體外受精等任何一項(xiàng)胚胎工程技術(shù)所生產(chǎn)的胚胎,都必須經(jīng)過(guò)才能獲得后代,是胚胎工程的最后一道“工序”。胚胎移植的意義:大大縮短了供體本身的繁殖周期,充分生理學(xué)基礎(chǔ):動(dòng)物發(fā)情排卵后,同種動(dòng)物的供、受體生殖器官的。這就為供體的胚胎移入受體提供了。早期胚胎在一定時(shí)間內(nèi)處于狀態(tài)。這就為胚胎的收集提供了可能。受體對(duì)移入子宮的外來(lái)胚胎(發(fā)生或者不發(fā)生)免疫排斥反應(yīng).。這為胚胎在受體的存活提供了可能。供體胚胎可與受體子宮建立正常的聯(lián)系,但
18、供體胚胎的遺傳特性在孕育過(guò)程中不受影響。基本程序主要包括:對(duì)供、受體的選擇和處理。選擇優(yōu)秀的供體,有健康的體質(zhì)和正常繁殖能力的受體,供體和受體是(相同或者不同)物種。并用激素進(jìn)行用對(duì)供體母牛做處理。配種或人工授精。對(duì)胚胎的收集、檢查、培養(yǎng)或保存。配種或輸精后第天,用特制的沖卵裝置,把供體母牛子宮內(nèi)的胚胎沖洗出來(lái)也叫沖卵。對(duì)胚胎進(jìn)行質(zhì)量檢查,此時(shí)的胚胎應(yīng)發(fā)育到或階段。直接向受體移植或放入一的液氮中保存。對(duì)胚胎進(jìn)行移植。移植后的檢查。對(duì)受體母牛進(jìn)行的檢查。胚胎分割概念:是指采用機(jī)械方法將呈切割等份、等份等,經(jīng)移植獲得的技術(shù)。意義:來(lái)自同一胚胎的后代具有(相同或者不同)的遺傳物質(zhì),屬于(有性還是無(wú)性)繁殖。材料:發(fā)育良好,形態(tài)正常的桑椹胚或囊胚。(桑椹胚至囊胚的發(fā)育過(guò)程中,細(xì)胞開(kāi)始分化,但其全能性仍很高,也可用于胚胎分割。)操作過(guò)程:對(duì)囊胚階段的胚胎分割時(shí),要_分割,否則會(huì)影響分割后胚胎的恢復(fù)和進(jìn)一步發(fā)育專題4,5轉(zhuǎn)基因生物的安全性爭(zhēng)論:基因生物與轉(zhuǎn)基因生物與對(duì)生物多樣性的影響轉(zhuǎn)基因生物與對(duì)生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)定性的影響生態(tài)工程基本原理:原理如無(wú)廢棄物農(nóng)業(yè)原理提高生態(tài)系統(tǒng)的抵抗力穩(wěn)定性原理處理生
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