內(nèi)標法研究甘遂及其炮制品的指紋圖譜

1、內(nèi)標法研究甘遂及其炮制品的指紋圖譜【關(guān)鍵詞】甘遂高效液相色譜法指紋圖譜內(nèi)標法甘遂為大戟科大戟屬植物甘遂EuphrbiakansuiT.N.LiuexT.P.ang的枯燥塊根1，主產(chǎn)于陜西、山西等地，本品苦寒有毒，具有瀉水逐飲、破積通便之功，常用于水腫、腹水、大小便不利等癥2。甘遂炮制后能降低毒性，緩和峻瀉作用，因此研究出甘遂炮制前后其化學成分的變化情況，為其炮制機理研究和臨床合理應(yīng)用提供科學根據(jù)，同時尋找一種全面質(zhì)量控制標準顯得尤為重要。本試驗以胡薄荷酮pulegne作為內(nèi)標參照物，采用高效液相色譜法，對不同產(chǎn)地甘遂的生品及醋制品進展了指紋圖譜研究。1儀器與試藥aters515高效液相色譜儀，

2、aters2487雙波長紫外檢測器，illenniu32數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)；Krasil18(4.6200，5)色譜分析柱大連化學物理研究所。胡薄荷酮對照品純度98%，批號：1052990，購自AldrihEheialpany,In；乙腈色譜醇，美國Tedia公司；自制重蒸去離子水。生甘遂飲片十批(陜西產(chǎn)編號0l,02,03，04批；山西產(chǎn)編號05,06批；河南產(chǎn)編號07,08批；市場統(tǒng)貨09，10批)，醋甘遂飲片陜西產(chǎn)編號l,02,03，04批；山西產(chǎn)編號05,06批；河南產(chǎn)編號07,08批；市場統(tǒng)貨09，10批)，炮制品09、10批直接購自市場，其余均按炮制標準化的標準工藝炮制。藥材經(jīng)本院中藥鑒

3、定教研室吳啟南教授鑒定為大戟科大戟屬植物甘遂EuphrbiakansuiT.N.LiuexT.P.ang的塊根。甘遂藥材分別購自安徽省亳州市藥材總公司、無錫山禾集團靖江醫(yī)藥、南京中醫(yī)藥大學百草堂、國醫(yī)堂門診部。2方法與結(jié)果2.1色譜條件Krasil18(4.6200，5)為色譜柱。以水為流動相A，乙腈為流動相B，進展二元梯度洗脫：013in,5%25%B；1320in,25%55%B；2030in,55%60%B；3045in,60%100%B；4585in,100%B。流速：1.0Lin-1，檢測波長：235n，進樣量：10L，柱溫：30。2.2供試品溶液的制備分別稱取甘遂、醋甘遂粉末(過2

4、4目篩)約20g，加體積分數(shù)為95%的乙醇100L回流提取，3次，每次2h，濾液濃縮，真空枯燥，所得浸膏用甲醇溶于25L容量瓶中至刻度，生品、醋制品分別參加2.5L、2L濃度為1gL-1的胡薄荷酮作為內(nèi)標參照物，所得混合液用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。HPL分析前用0.45微孔濾膜過濾。2.3指紋圖譜的方法學驗證2.3.1穩(wěn)定性試驗取01號甘遂按“2.2項方法制備溶液，分別于0、2、4、8、16、24h依法進展檢測，獲取指紋圖譜。結(jié)果說明，各共有峰相對保存時間及相對峰面積RSD均3%。說明24h內(nèi)供試品溶液的成分穩(wěn)定。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.3.2精細度試驗取01號甘遂按“2.2項方法制備溶

5、液，依法連續(xù)進樣5次，對主要色譜峰的相對保存時間及相對峰面積進展比擬，RSD均3%。2.3.3重現(xiàn)性試驗取批號為01的樣品，按“2.2項方法制備溶液5份，同法檢測，以胡薄荷酮為對照，各共有峰相對保存時間及相對峰面積RSD均3%。2.4結(jié)果2.4.1甘遂指紋圖譜按供試品溶液制備方法，制備4個產(chǎn)地生品、醋制甘遂各10批的樣品溶液。按“2.1項下條件測定，記錄色譜圖并進展分析，結(jié)果17個峰是所有樣品共有的峰，確定其為指紋峰，生品、醋制甘遂各10批樣品的指紋圖譜見圖1、圖2，HPL參照指紋圖見圖3。2.4.2相似度評價采用國家藥典委員會?中藥指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)2022A版?對上述年終批次藥材的指紋

6、圖譜進展了相似度的分析，以相關(guān)系數(shù)中位數(shù)代表其相似度，得10批生品的相似度分別為：0.982、0.986、0.996、0.995、0.997、0.981、0.989、0.990、0.991、0.981。10批醋制品的相似度分別為：0.991、0.975、0.984、0.990、0.991、0.989、0.991、0.987、0.994、0.986。結(jié)果生品及醋制品的相似度均在97%以上。3討論圖110批甘遂生品飲片指紋圖譜略Fig.1Fingerprintsf10bathesfEuphriaKansui圖210批醋制甘遂飲片指紋圖譜略Fig.2Fingerprintsf10bathedEuph

7、riaKansuipressedbyvinegar圖3甘遂藥材參照指紋圖譜略Fig.3FingerprintsfEuphriaKansuifrntrl3.2選擇內(nèi)標物時，比擬了pulegne、AlislA、B，leanli等幾種萜類物質(zhì)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)pulegne既和甘遂各成分能到達較好別離，且與甘遂兩者供試液混合后均無化學成分變化。3.3實驗結(jié)果說明，10個批次的甘遂飲片指紋圖譜中主要峰群的整體圖貌根本一致，但各成分含量的相比照值有所不同，炮制前后指紋圖譜有所變化，各成分含量升降不一，其中炮制后2種成分含量增加約40%左右，1種成分含量減少達70%，但成分的定性尚待進一步研究。3.4本文采用HPL色譜法，初步建立了甘遂及醋甘遂的醇提液指紋圖譜分析方法