小鼠胚胎成纖維細(xì)胞的分離和培養(yǎng)_第1頁
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小鼠胚胎成纖維細(xì)胞的分離和培養(yǎng)_第3頁
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文檔簡介

1、 (9) 兩套小亂用解劉器械 (包括眼科剪和眼科 ) D葡萄糖酚紅 0.1g 注：此步應(yīng)農(nóng)膠卷暗盒內(nèi)操作，然后于 4C 避光保存。 (4) 75%酒精諂毒后，用普通剪刀和鑲子剪開下腹皮膚，并用兩把彎頭止血鉗夾住切口處的皮朕向頭尾 兩側(cè)李拉即剝發(fā)。 (6) 用眼科住一側(cè)子言，分需子言糸朕，服科彎剪剪斷子言角和子言頸，將整個子言分禽下來 (9) 將子言移入另一盛有 PBS 的平皿中，用服科彎剪沿子言糸朕打開子言，取出帶有於朕的於亂，并用兩把服科錢子剔除於朕，取出於魚 (一般有 12 只)。(10) 將於亂移入另一盛有 PBS 的平皿中，用眼科剪和眼科飲去除於亂的頭、叨肢和內(nèi)臟，得魚歴軀 干。 2.

2、 小亂膽於成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng) (組織塊培養(yǎng)法 ) 粘稠)。 30 秒(可見 組織塊變得較為 勻)。 (9) 培養(yǎng)的頭兩天不要晃動培養(yǎng)瓶，第三夭可以觀痙，可見組織碎塊附著于培養(yǎng)瓶底，周囲細(xì)胞呈放射狀 生長，此時有多種細(xì)胞類型，有的是呈梭形的成纖維細(xì)胞，有的是星圖形的上皮細(xì)胞。如果細(xì)胞己全 部長滿則可諂化傳代，如果未全部長 (4) 疫倒置鏡下觀寨，當(dāng)細(xì)胞雯圓時即可加入 (5) 將培養(yǎng)物全部吸置尖底禽心管內(nèi)，特置 用力吹打整個瓶底 (約 30 或御壁，勿直接沖沖擊底壁的細(xì)胞 )。 培養(yǎng)液終止蔭化，并吹打壁底細(xì)胞 (應(yīng)注意逐瓶操作，避免蔭化肘間過長而使細(xì)胞丟夬 過多)O 靠疫培養(yǎng)瓶的上壁 (6) 計數(shù)并調(diào)整密度：吸出混懸后的細(xì)胞懸液 50ul 用血細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)混合后細(xì)胞懸液的密度，然后將細(xì) 懸液)o 5.飼養(yǎng)層細(xì)胞的凍存和復(fù)蘇實驗 1) 細(xì)胞：鏡松，將處于對數(shù)生長期的小亂軀於成纖維細(xì)胞用于凍存實驗。棄舊培養(yǎng)液，后以 PBS 或新鮮培養(yǎng)液漂冼細(xì) 1) 凍融：從低溫冰箔中取出凍存細(xì)胞

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