牛結(jié)核病防治技術(shù)規(guī)范

1、牛結(jié)核病防治技術(shù)規(guī)范發(fā)布日期：2007年5月14日 來源：中國獸藥信息網(wǎng) 作者： 牛結(jié)核?。˙ovine Tuberculosis）主要是由牛型結(jié)核分枝桿菌（Mycobacterium bovis）引起的一種人獸共患的慢性傳染病。世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為B類動物疫病，我國將其列為二類動物疫病。 為了預(yù)防、控制和凈化牛結(jié)核病，根據(jù)中華人民共和國動物防疫法及有關(guān)的法律法規(guī)，特制定本規(guī)范。1 適用范圍本規(guī)范規(guī)定了牛結(jié)核病的診斷、疫情報告、疫情處理、防治措施、控制和凈化標(biāo)準(zhǔn)。 本規(guī)范適用于中華人民共和國境內(nèi)一切從事牛的飼養(yǎng)、經(jīng)營和牛產(chǎn)品的生產(chǎn)、經(jīng)營，以及從事動物防疫活動的單位和個人。2 診斷

2、本病依據(jù)流行病學(xué)、臨床癥狀、病理變化可做出初步診斷。確診需進(jìn)一步做病原分離鑒定或免疫學(xué)診斷。2.1 流行特點本病奶牛最易感，其次為水牛、黃牛、牦牛。人也可感染。結(jié)核病病牛是本病的主要傳染源。牛型結(jié)核分枝桿菌隨鼻汁、痰液、糞便和乳汁等排出體外，健康?？赏ㄟ^被污染的空氣、飼料、飲水等經(jīng)呼吸道、消化道等途徑感染。2.2 臨床癥狀： 潛伏期一般為1045天，有的可長達(dá)數(shù)月或數(shù)年。 通常呈慢性經(jīng)過。臨床以肺結(jié)核、乳房結(jié)核和腸結(jié)核最為常見。肺結(jié)核：以長期頑固性干咳為特征，且以清晨最為明顯?；夹笕菀灼?，逐漸消瘦，病情嚴(yán)重者可見呼吸困難。乳房結(jié)核：一般先是乳房淋巴結(jié)腫大，繼而后方乳腺區(qū)發(fā)生局限性或彌漫性硬結(jié)

3、，硬結(jié)無熱無痛，表面凹凸不平。泌乳量下降，乳汁變稀，嚴(yán)重時乳腺萎縮，泌乳停止。 腸結(jié)核：消瘦,持續(xù)下痢與便秘交替出現(xiàn)，糞便常帶血或膿汁。 2.3 病理變化： 在肺臟、乳房和胃腸粘膜等處形成特異性白色或黃白色結(jié)節(jié)。結(jié)節(jié)大小不一，切面干酪樣壞死或鈣化，有時壞死組織溶解和軟化，排出后形成空洞。胸膜和肺膜可發(fā)生密集的結(jié)核結(jié)節(jié)，形如珍珠狀。2.4 實驗室診斷 2.4.1 病原分離鑒定 采集病牛的病灶、痰、尿、糞便、乳及其它分泌物樣品，作抹片或集菌處理（見附件）后抹片，用抗酸染色法染色鏡檢，并進(jìn)行病原分離培養(yǎng)和動物接種等試驗。2.4.2 免疫學(xué)試驗牛型結(jié)核分枝桿菌PPD（提純蛋白衍生物）皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗（

4、即牛提純結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗）（見GB/T 18646）。2.5 結(jié)果判定 凡分離出牛型結(jié)核分枝桿菌或牛型結(jié)核分枝桿菌PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗陽性的牛，均判為結(jié)核病牛。3 疫情報告 3.1 任何單位和個人發(fā)現(xiàn)患有本病或者疑似本病的動物，都應(yīng)當(dāng)及時向當(dāng)?shù)貏游锓酪弑O(jiān)督機(jī)構(gòu)報告。 3.2 動物防疫監(jiān)督機(jī)構(gòu)接到疫情報告后，立即按動物疫情報告管理辦法及有關(guān)規(guī)定及時上報。 4 疫情處理 4.1 發(fā)現(xiàn)疑似結(jié)核病病畜后，畜主應(yīng)立即將其隔離，并限制其移動。當(dāng)?shù)貏游锓酪弑O(jiān)督機(jī)構(gòu)要及時派員到現(xiàn)場進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查、臨床癥狀檢查、病理解剖、病料采集、實驗室診斷等工作，根據(jù)診斷結(jié)果采取相應(yīng)措施。 4.2 確診牛結(jié)核病患

5、畜后，必須按下列要求處理： 4.2.1 撲殺病牛和陽性牛 4.2.2 劃定疫點、疫區(qū)、受威脅區(qū) 疫點 指病畜所在的棟舍、戶或其它有關(guān)屠宰場（點）、經(jīng)營單位。 疫區(qū) 指病畜所在的飼養(yǎng)場、自然村的范圍區(qū)域。在疫區(qū)劃分時注意考慮當(dāng)?shù)氐娘曫B(yǎng)環(huán)境和天然屏障（如河流、山脈等）。受威脅區(qū)指與疫區(qū)相毗鄰的飼養(yǎng)場、自然村的范圍區(qū)域。 4.2.3 隔離、封鎖 零星散發(fā)時，可采用圈養(yǎng)和固定草場放牧方式,對病畜的同群畜實施隔離。隔離所用草場，應(yīng)遠(yuǎn)離交通要道、居民點或人畜密集的地區(qū)，場地周圍最好有自然屏障或人工柵欄。當(dāng)一個自然村、飼養(yǎng)場結(jié)核病陽性率在3以上或病牛10頭以上時，應(yīng)對疫區(qū)實施封鎖，禁止病牛和疑似病牛、易感動

6、物及其產(chǎn)品調(diào)出;對易感動物實行圈養(yǎng)或指定地點飼養(yǎng)，役用動物限制在疫區(qū)內(nèi)使役。 4.2.4 無害化處理 病死和撲殺的病畜，要按照GB16548-1996畜禽病害肉尸及其產(chǎn)品無害化處理規(guī)程進(jìn)行無害化處理。 4.2.5 緊急監(jiān)測 用牛型結(jié)核分枝桿菌PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗對疫區(qū)和受威脅區(qū)的全部牛進(jìn)行緊急監(jiān)測。4.2.6 消毒 對病畜和陽性畜污染的場所、用具、物品進(jìn)行嚴(yán)格消毒。 飼養(yǎng)場的金屬設(shè)施、設(shè)備可采取火焰、熏蒸等方式消毒；養(yǎng)畜場的圈舍、場地、車輛等，可選用2%燒堿等有效消毒藥消毒；飼養(yǎng)場的飼料、墊料可采取深埋發(fā)酵處理或焚燒處理；糞便采取堆積密封發(fā)酵方式，以及其它相應(yīng)的有效消毒方式。4.2.7 封鎖

7、的解除 封鎖的疫區(qū)內(nèi)最后一頭病畜及陽性畜被撲殺，經(jīng)無害化處理后，對疫區(qū)內(nèi)監(jiān)測45天以上，沒有發(fā)現(xiàn)新病例；對所污染場所、設(shè)施設(shè)備和受污染的其它物品進(jìn)行徹底消毒，經(jīng)當(dāng)?shù)貏游锓酪弑O(jiān)督機(jī)構(gòu)檢驗合格后，由原發(fā)布封鎖令的機(jī)關(guān)解除封鎖。 5 預(yù)防與控制 采取以“監(jiān)測、檢疫、撲殺和消毒”相結(jié)合的綜合性防治措施。 5.1 監(jiān)測 監(jiān)測對象：牛 監(jiān)測比例為：種牛、奶牛100%，規(guī)模場肉牛10%，其它牛5%，疑似病牛100%。如在牛結(jié)核病凈化群中（包括犢牛群）檢出陽性牛時，應(yīng)及時撲殺陽性牛，其它牛按假定健康群處理。成年牛凈化群每年春秋兩季用牛型結(jié)核分枝桿菌PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗各進(jìn)行一次監(jiān)測。初生犢牛，應(yīng)于20日齡時

8、進(jìn)行第一次監(jiān)測。 所有的種牛、奶牛每年必須進(jìn)行兩次監(jiān)測。并按規(guī)定使用和填寫監(jiān)測結(jié)果報告，及時上報。 5.2 種牛、奶牛調(diào)運的檢疫 異地引進(jìn)的種牛、奶牛，必須來自于非疫區(qū)。 調(diào)出前，在裝運前30天內(nèi)，須經(jīng)當(dāng)?shù)貏游锓酪弑O(jiān)督機(jī)構(gòu)實施檢疫，檢疫合格，并出具有效檢疫證明后，方可起運。調(diào)入的種牛、奶牛，必須隔離觀察45天以上，且經(jīng)牛型結(jié)核分枝桿菌PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗檢查陰性者，方可混群飼養(yǎng)。5.3 工作人員牛場工作人員，每年要定期進(jìn)行健康檢查。發(fā)現(xiàn)有患結(jié)核病的應(yīng)及時調(diào)離崗位，隔離治療。工作人員的工作服、用具要保持清潔，不得帶出牛場。 5.4 飼養(yǎng)環(huán)境 牛飼養(yǎng)場生產(chǎn)區(qū)應(yīng)與生活區(qū)隔離，奶牛場內(nèi)不應(yīng)飼養(yǎng)貓、狗

9、、豬、雞、鴨等動物，并應(yīng)禁止其它動物出入。消滅鼠、蠅等傳播媒介。5.5 防疫監(jiān)督動物防疫監(jiān)督機(jī)構(gòu)要對轄區(qū)內(nèi)奶牛場、種牛場登記造冊，并建立檔案；布病結(jié)核病監(jiān)測合格是奶牛場、種牛場動物防疫合格證發(fā)放或年度審驗的必備條件。鮮奶收購點（站）必須憑動物防疫合格證對奶牛場（戶）收購鮮奶。5.6 凈化措施被確診為結(jié)核病牛的牛群（場）為牛結(jié)核病污染群（場），應(yīng)全部實施牛結(jié)核病凈化。5.6.1 牛結(jié)核病凈化群（場）的建立5.6.1.1 污染牛群的處理：應(yīng)用牛型結(jié)核分枝桿菌PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗對該牛群進(jìn)行反復(fù)監(jiān)測，每次間隔3個月，發(fā)現(xiàn)陽性牛及時撲殺，并按照4 規(guī)定處理。 5.6.1.2 假定健康牛群的處理：經(jīng)撲

10、殺病牛及陽性牛后的牛群為假定健康牛群。用牛型結(jié)核分枝桿菌PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗進(jìn)行反復(fù)監(jiān)測，每次監(jiān)測間隔90天，發(fā)現(xiàn)陽性牛及時撲殺。犢牛應(yīng)于20日齡時進(jìn)行第一次監(jiān)測，100120日齡時，進(jìn)行第二次監(jiān)測。凡連續(xù)兩次以上監(jiān)測結(jié)果均為陰性者，可認(rèn)為是牛結(jié)核病凈化群。凡牛型結(jié)核分枝桿菌PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗疑似反應(yīng)者，于3045日后進(jìn)行復(fù)檢，復(fù)檢結(jié)果為陽性，則按陽性牛處理; 若仍呈疑似反應(yīng)則間隔3045天再復(fù)檢一次，結(jié)果仍為可疑反應(yīng)者，視同陽性牛處理。5.6.2 隔離疑似結(jié)核病?；蚺Ｐ徒Y(jié)核分枝桿菌PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗可疑畜須隔離復(fù)檢。隔離牛舍處在下風(fēng)口，并與健康牛舍相隔50米以上。5.6.3 消毒5

11、.6.3.1 臨時消毒：奶牛群中檢出并剔出結(jié)核病牛后，牛舍、用具及運動場所等按照4.2.6規(guī)定進(jìn)行緊急處理。5.6.3.2 定期消毒：養(yǎng)牛場每年應(yīng)進(jìn)行24次大消毒，消毒方法同臨時消毒。5.6.3.3 經(jīng)常性消毒：飼養(yǎng)場及牛舍出入口處，應(yīng)設(shè)置消毒池，內(nèi)置有效消毒劑，如35%來蘇爾溶液或20石灰乳等。消毒藥要定期更換，以保證一定的藥效。牛舍內(nèi)的一切用具應(yīng)定期消毒;產(chǎn)房每周進(jìn)行一次大消毒，分娩室在臨產(chǎn)牛生產(chǎn)前及分娩后各進(jìn)行一次消毒。6 控制、凈化標(biāo)準(zhǔn)6.1 縣（市、區(qū)）凈化標(biāo)準(zhǔn)縣（市、區(qū)）凈化標(biāo)準(zhǔn)必須具備以下三個條件：6.1.1 全縣（市、區(qū)）范圍內(nèi)連續(xù)兩年按種牛、奶牛100%、規(guī)模場的肉牛10%、

12、其它牛5%的比例進(jìn)行監(jiān)測，每年牛型結(jié)核分枝桿菌PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗陽性率在0.05%以下。6.1.2 檢出的結(jié)核陽性牛全部就地?fù)錃?，并作無害化處理。6.2 市（地、盟）凈化標(biāo)準(zhǔn)全市（地、盟）所有縣（市、區(qū)）達(dá)到凈化標(biāo)準(zhǔn)。6.3 ?。▍^(qū)、市）凈化標(biāo)準(zhǔn)全?。▍^(qū)、市）所有縣（市、區(qū)）達(dá)到凈化標(biāo)準(zhǔn)。6.4 全國凈化標(biāo)準(zhǔn)全國所有?。▍^(qū)、市）均達(dá)到凈化標(biāo)準(zhǔn)。附件:樣 品 集 菌 方 法痰液或乳汁等樣品，由于含菌量較少，如直接涂片鏡檢往往是陰性結(jié)果。此外，在培養(yǎng)或作動物試驗時，常因污染雜菌生長較快，使病原結(jié)核分枝桿菌被抑制。下列幾種濃縮方法可使檢驗標(biāo)本中蛋白質(zhì)溶解、殺滅污染雜菌，而結(jié)核分枝桿菌因有蠟質(zhì)外膜

13、而不死亡，從而得到濃縮。1 硫酸消化法用46硫酸溶液將痰、尿、糞或病灶組織等按1:5的比例混合，然后置37培養(yǎng)箱中作用12小時，經(jīng)30004000rp/m離心30分鐘，棄上清液，取沉淀物涂片鏡檢、培養(yǎng)和接種動物。也可用硫酸消化濃縮后，在沉淀物中加入3氫氧化鈉中和，然后抹片鏡檢、培養(yǎng)和接種動物。2 氫氧化鈉消化法2.1 取氫氧化鈉40g，鉀明礬2g，溴麝香草酚蘭20mg（預(yù)先用60酒精配制成0.4濃度，應(yīng)用時按比例加入），蒸餾水1000mL混合，即為氫氧化鈉消化液。2.2 四種操作方法2.2.1 將被檢的痰、尿、糞便或病灶組織用氫氧化鈉消化液按1:5的比例稀釋混勻后，37作用23小時，然后無菌滴

14、加510鹽酸溶液進(jìn)行中和，將pH值調(diào)到6.8左右（此時顯淡黃綠色），以30004000rp/m離心1520分鐘，棄上清液，取沉淀物涂片鏡檢、培養(yǎng)和接種動物。2.2.2 在病料中加入等量的4氫氧化鈉溶液，充分振搖510分鐘，然后用3000rp/m離心1520分鐘，棄上清液，加1滴酚紅指示劑于沉淀物中，用2mol/L鹽酸中和至淡紅色，然后取沉淀物涂片鏡檢、培養(yǎng)和接種動物。2.2.3 在痰液或小膿塊中加入等量的1氫氧化鈉溶液，充分振搖15分鐘，然后用3000rp/m離心30分鐘，取沉淀物涂片鏡檢、培養(yǎng)和接種動物。2.2.4 對痰液的消化濃縮也可采用以下較溫和的處理方法：取1mol/L（或4）氫氧化鈉水溶液50mL，0.1mol/L檸檬酸鈉50mL，N乙酰L半胱氨酸0.5g，混合。取痰1份，加上述溶液2份，作用2448小時，以3000rp/m離心15分鐘，取沉淀物涂片鏡檢、培養(yǎng)和接種動物。以上四種方法可任選一種。3