檢驗儀器匯總說明

1、檢驗儀器匯總說明第1頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四什么是檢驗醫(yī)學(xué)定義：是指對臨床標(biāo)本進(jìn)行正確的收集和測定，并作出正確的解釋和應(yīng)用。 是運用基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)理論和技術(shù)為臨床醫(yī)學(xué)服務(wù)的學(xué)科。第2頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四近年來，由于臨床醫(yī)學(xué)的飛速發(fā)展，診斷、治療、監(jiān)測、預(yù)后和醫(yī)學(xué)研究對檢驗的需求迅速增多，醫(yī)學(xué)檢驗方法亦隨之迅速增多，醫(yī)學(xué)檢驗的各種檢測結(jié)果對疾病的診斷、治療、預(yù)后判斷和健康評價正起著越來越重要的作用。隨著新型電子、計算機(jī)、生物信息、激光、精密儀器制造等先進(jìn)技術(shù)的迅猛發(fā)展和應(yīng)用，臨床檢驗儀器的更新?lián)Q代也日新月異。因此，從事臨床醫(yī)學(xué)檢驗

2、專業(yè)的人員，了解現(xiàn)代臨床檢驗儀器的原理、使用和維修，越發(fā)顯得重要。第3頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四檢驗醫(yī)學(xué)近代物理學(xué)生物化學(xué)分子生物學(xué)儀器材料學(xué)計算機(jī)電子技術(shù)激光色譜、質(zhì)譜熒光第4頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四古代:感官檢查（如：尿液中世紀(jì)）17世紀(jì):荷蘭Leeuwenhoek發(fā)明顯微鏡 一、臨床檢驗基礎(chǔ)的現(xiàn)狀和特點第5頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四20世紀(jì)末以來:自然科學(xué)基礎(chǔ)學(xué)科與醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)學(xué)科結(jié)合電腦化、自動化、微量化21世紀(jì)：現(xiàn)代信息網(wǎng)絡(luò)技術(shù)（遠(yuǎn)程診斷）與系統(tǒng)生物工程（包括分子生物學(xué)）、臨床醫(yī)學(xué)結(jié)合。第6

3、頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四最常用的臨床檢驗，借助先進(jìn)的檢測技術(shù)，對來自離體的血液、尿液、糞便以及分泌物和排泄物等標(biāo)本進(jìn)行理學(xué)、化學(xué)、病原學(xué)和顯微鏡形態(tài)學(xué)的檢查，以簡便、快速的檢測結(jié)果，基本滿足臨床醫(yī)學(xué)檢驗篩檢疾病的需求。第7頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四臨床檢驗現(xiàn)代特征：1從手工 自動化、電腦化檢測 第8頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四 2 （point of care test， POCT） 床邊檢測3試劑批量、配套、專業(yè)和多樣化 第9頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四4. 檢驗方法

4、標(biāo)準(zhǔn)化如：1966年，成立國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會（International Committee for Standardization of hematology , ICSH，源自1963年歐洲血液學(xué)協(xié)會標(biāo)準(zhǔn)化委員會） 5全面質(zhì)量保證 檢驗分析前：標(biāo)本的采集、儲存和轉(zhuǎn)運過程尤為重要?，F(xiàn)認(rèn)為，管理好這兩個環(huán)節(jié)，可降低70%的檢驗差錯率。第10頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四 二、臨床檢驗基礎(chǔ)的應(yīng)用目的 1為疾病診斷和鑒別診斷提供實驗室檢測客觀依據(jù) 2.為疾病療效監(jiān)測和預(yù)后判斷提供動態(tài)變化依據(jù) 3.為預(yù)防疾病提供檢測依據(jù) 4.為科學(xué)研究提供醫(yī)學(xué)檢驗基本數(shù)據(jù)、基本檢驗方

5、法和操作技能。 第11頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四三 主要內(nèi)容血液分析技術(shù)與相關(guān)儀器流式細(xì)胞技術(shù)與流式細(xì)胞儀光譜分析技術(shù)及相關(guān)儀器電化學(xué)分析技術(shù)和臨床相關(guān)儀器自動生化分析技術(shù)和相關(guān)儀器尿液分析技術(shù)和相關(guān)儀器 第12頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四庫爾特原理血細(xì)胞分析儀：指對一定體積全血內(nèi)血細(xì)胞異質(zhì)性進(jìn)行自動分析的臨床常規(guī)檢驗儀器。計數(shù)原理是根據(jù)血細(xì)胞的不良導(dǎo)電性和產(chǎn)生電阻抗原理來計數(shù)血液中的細(xì)胞，也就是電阻式血細(xì)胞計數(shù)原理，這種原理現(xiàn)在已經(jīng)成為血細(xì)胞計數(shù)和分析中最為經(jīng)典的原理。第13頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期

6、四變阻脈沖法血細(xì)胞計數(shù)原理第14頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四小孔管換能器將待測血液涌潔凈的電解液充分稀釋，使血細(xì)胞在電解液中成為游散狀態(tài)，在施以負(fù)壓，單個血細(xì)胞流過小孔，電解液電阻瞬間變大，經(jīng)電路處理形成一定的電壓值，進(jìn)行計數(shù)。第15頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四不同細(xì)胞引起的電壓變化第16頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四血細(xì)胞的分類計數(shù)體積不同，產(chǎn)生的脈沖幅度也不同；白細(xì)胞最大，紅細(xì)胞次之，血小板最小。根據(jù)閾值選擇，進(jìn)行不同細(xì)胞的計數(shù)。第17頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四紅細(xì)胞計數(shù)

7、：正常人體外周血紅細(xì)胞的數(shù)目為白細(xì)胞的1000倍左右，當(dāng)閾值電壓選在U1時，白細(xì)胞產(chǎn)生的脈沖可完全忽略，紅、白細(xì)胞數(shù)可視為紅細(xì)胞數(shù)。第18頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四紅細(xì)胞的計數(shù)第19頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四血小板計數(shù)：將閾值電壓選在U2時，可以去掉干擾計數(shù)，并計出紅、白細(xì)胞和血小板的總數(shù)。最后從總數(shù)中減去紅、白細(xì)胞數(shù)，即為血小板數(shù)。 第20頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四血小板的計數(shù)第21頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四白細(xì)胞計數(shù)：在計數(shù)白細(xì)胞時，先在稀釋血液中加入一種溶血劑，

8、使紅細(xì)胞溶解破碎，其碎片體積分散到不影響白細(xì)胞計數(shù)的程度，紅細(xì)胞破碎后，將閾值電壓選在Ul，再對剩下的白細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)，便可以求得白細(xì)胞數(shù)。第22頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四血液分析技術(shù)與相關(guān)儀器VCS技術(shù)中V、C、S各代表什么意思： V代表體積，采用電阻抗進(jìn)行血細(xì)胞計數(shù)和體積測量； C代表電導(dǎo)，依據(jù)細(xì)胞可影響高頻電流傳導(dǎo)的特性，采用高頻電磁探針測量細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，細(xì)胞內(nèi)核漿比例，質(zhì)粒的大小和密度，從而區(qū)別體積完全相同而性質(zhì)不同的兩個細(xì)胞； S代表光散射，對細(xì)胞顆粒的構(gòu)型和顆粒質(zhì)量有較強(qiáng)的鑒別能力，通過測定單個細(xì)胞的散射光強(qiáng)度把粒細(xì)胞分開。第23頁，共82頁，2022

9、年，5月20日，23點21分，星期四容量、電導(dǎo)、光散射法（VCS） 首先標(biāo)本內(nèi)加入只作用紅細(xì)胞的溶血劑使紅細(xì)胞溶解，然后加入抗溶血劑起中和前溶血劑的作用，使白細(xì)胞表面、胞質(zhì)及細(xì)胞大小等特征仍然保持與體內(nèi)相同的狀態(tài)。根據(jù)流體力學(xué)的原理使用鞘流技術(shù)，使溶血后制體內(nèi)剩余的白細(xì)胞單個通過檢測器，接受VCS三種技術(shù)的同時檢測 第24頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四血液分析技術(shù)與相關(guān)儀器血液凝固分析儀：采用一定的分析技術(shù)，對血栓與止血有關(guān)成分進(jìn)行自動檢測的臨床常規(guī)檢驗儀器。血凝儀凝固法原理：是通過檢測血漿在凝血激活劑作用下一系列物理量（光、電、超聲、機(jī)械運動等）的變化，再由計算機(jī)

10、分析所得數(shù)據(jù)并將之換算成最終結(jié)果的方法，故也稱生物物理法。第25頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四血液從溶膠狀態(tài)變?yōu)槟z狀態(tài)的現(xiàn)象，是止血功能的重要組成部分，由多種因子參與，參與的因子稱為凝血因子。血凝最后形成纖維蛋白。正常血液中，有使纖維蛋白溶解的物質(zhì)，又存在抗凝因子，故正常血液不會自己凝固。異常-凝血因子不足，可致出血，反之，可致血管內(nèi)凝血第26頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四生物學(xué)方法 將凝血因子激活劑加入到待檢血漿中，使血漿發(fā)生體外凝固，凝血儀連續(xù)記錄血漿凝固過程中的一系列變化(如光、電、機(jī)械運動等)，并將這些變化信號轉(zhuǎn)變成數(shù)據(jù)，用計算

11、機(jī)收集、處理數(shù)據(jù)后得出檢測結(jié)果。 第27頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四血液流變學(xué) 研究血液及其組成成分的流動與變形規(guī)律,是生物流變學(xué)的一個分支。 研究對象包括：全血類指標(biāo)：如血液黏度、血液的觸變性、黏彈性、紅細(xì)胞壓積等；紅細(xì)胞類指標(biāo)：如紅細(xì)胞聚集性、紅細(xì)胞變形性、紅細(xì)胞膜的微黏度、紅細(xì)胞電泳等；血小板類指標(biāo)：如血小板聚集性、血小板黏附性、血栓彈力圖、體外血栓的形成與測定等；血漿類指標(biāo)：如血漿黏度、血漿纖維蛋白原等 第28頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四血液黏度黏度是血液的重要力學(xué)性質(zhì)，也是血液流變學(xué)研究的重要內(nèi)容之一，血液黏度對于機(jī)體的生理

12、和病理變化均具有重要意義。第29頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四 血液黏度的測定原理一般情況下在體外測定血液和血漿的黏度。全血黏度主要取決于紅細(xì)胞數(shù)量的多少，血漿黏度主要取決于血漿蛋白。血液的黏度在體內(nèi)并不是一個物理常數(shù)，在大血管和微血管中血液的表觀黏度不一樣。目前測量全血黏度一般均使用回轉(zhuǎn)式黏度計，評價全血黏度使用表觀黏度的概念，以同一切變率下的表觀黏度作為不同樣本之間互相比較的指標(biāo)。 第30頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四毛細(xì)管黏度計的測量原理依據(jù)泊肅葉定律：流量與管道兩端的壓力差、管道半徑成正比，并與管道長度和流體黏度成反比。管道半徑R

13、、長度L、壓力都可以在實驗條件下恒定，那么流量Q就只與黏度有關(guān)，而如果我們恒定流量Q，那么黏度就與時間t成正相關(guān)。利用一已知黏度的流體做對照就可以測出血液的黏度。第31頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四 毛細(xì)管黏度計的測量原理實際測量時，讓水和血液分別通過同樣長度、同樣管徑的玻璃管，分別測量水和血液通過時所用的時間Tw和Tb，已知水的黏度W，則血液黏度可按下式計算出來。b =（Tb/Tw）*w 第32頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四回轉(zhuǎn)式黏度計的測量原理將血液置于一個切變率已知的切變場中，測量一定剪切率下所產(chǎn)生的切應(yīng)力大小，然后按下式計算血液的

14、表觀黏度=/第33頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四錐板式黏度計的工作原理圖 由一圓平板和一同軸圓錐組成，待測的液體放在圓錐和圓板間隙內(nèi)。一般固定圓板，圓錐以已知角速度旋轉(zhuǎn)，通過測量液體加在圓錐上的扭力矩?fù)Q算成液體的黏度。 第34頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四 錐板式黏度計第35頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四流式細(xì)胞技術(shù)與流式細(xì)胞儀第36頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四光譜分析技術(shù)及相關(guān)儀器光譜分析方法（Spectrometry）是基于電磁輻射與物質(zhì)相互作用產(chǎn)生的特征光譜波長與強(qiáng)度進(jìn)行物質(zhì)

15、分析的方法。它涉及物質(zhì)的能量狀態(tài)、狀態(tài)躍遷以及躍遷強(qiáng)度等方面。通過物質(zhì)的組成、結(jié)構(gòu)及內(nèi)部運動規(guī)律的研究，可以解釋光譜學(xué)的規(guī)律；通過光譜學(xué)規(guī)律的研究，可以揭示物質(zhì)的組成、結(jié)構(gòu)及內(nèi)部運動的規(guī)律。光譜分析方法包括各種吸收光譜分析和發(fā)射光譜分析法以及散射光譜（拉曼散射譜）分析法。第37頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四透射光譜法透射光譜法就是把待測樣品置于作用光與檢測器之間，檢測器所檢測到的分析光是作用光通過樣品體與樣品分子相互作用后的光，若樣品是透明的真溶液，則分析光在樣品中經(jīng)過的路程一定，透射光的強(qiáng)度與樣品組分濃度由比耳定律決定。 第38頁，共82頁，2022年，5月20日

16、，23點21分，星期四反射光譜法反射光譜分析時，檢測器與光源置于待測樣品的同一側(cè)，檢測器檢測到的分析光是光源發(fā)出的作用光投射到物體后，以各種方式反射回來的光。物體對光的反射分為規(guī)則反射光（鏡面反射）與漫反射。規(guī)則反射光指在物體表面按入射角等于反射角的反射定律發(fā)生的反射。漫反射是光投向漫反射體（顆?；蚍勰┖螅谖矬w表面或內(nèi)部發(fā)生的方向不定的反射。第39頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四定性分析近紅外光譜定性分析利用模式識別與聚類的一些算法，主要用于鑒定。在模式識別運算時需要有一組用于計算機(jī)“學(xué)習(xí)”的樣品集，通過計算機(jī)運算，得出學(xué)習(xí)樣品在數(shù)學(xué)空間的范圍，對未知樣品運算后，

17、若也在此范圍內(nèi)，則該樣品屬于學(xué)習(xí)樣品集類型，反之則否定。聚類運算時不需學(xué)習(xí)樣品集，它通過待分析樣品的光譜特征，根據(jù)光譜近似程度進(jìn)行分類。 第40頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四定量分析近紅外光譜分析與其它吸收光譜按照比耳定律作定量分析類似。作常規(guī)光譜定量分析時，需要建立光譜參數(shù)與樣品含量間的關(guān)系（標(biāo)準(zhǔn)曲線）。但對復(fù)雜樣品作近紅外光譜定量分析時，為了解決近紅外譜區(qū)重疊與譜圖測定不穩(wěn)定的問題，必須充分應(yīng)用全光譜的信息。 第41頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四光譜分析儀器紫外可見光光譜儀近紅外光譜儀紅外光譜儀第42頁，共82頁，2022年，5月20

18、日，23點21分，星期四電化學(xué)分析技術(shù)及其臨床儀器電化學(xué)分析法：利用溶液電化學(xué)性質(zhì)將被測物質(zhì)的濃度轉(zhuǎn)變成電學(xué)參數(shù)而進(jìn)行檢測的方法。2. 離子選擇性電極：用特殊敏感膜制成的、對溶液中特定離子具有選擇性響應(yīng)的電極。3. 電解質(zhì)分析儀：通常采用離子選擇性電極（ISE）測定生物樣品中離子濃度的儀器。4. 血氣分析儀：利用電極對人全血中的酸堿度（pH）、二氧化碳分壓（PCO2）和氧分壓（PO2）進(jìn)行測定的儀器。第43頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四pH電極電極對被測樣本的反應(yīng)，會在玻璃薄膜的內(nèi)部與外部之間產(chǎn)生一個直流電壓，該電壓與內(nèi)部緩沖液和樣本的PH值差成正比，是由玻璃的金屬

19、離子與液體的氫離子H之間在膜面上的交換所產(chǎn)生的，該離子交換由液體中的H濃度所控制。 第44頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四二氧化碳分壓(PCO2)電極PCO2電極是一種氣敏電極。在電極的前端有一層半透膜。半透膜只允許某種特定的氣體通過，而阻止其他的氣體和離子通過。第45頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四PCO2電極工作原理圖 第46頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四CO2H2OH2CO3HHCO3 電極套中是一對測量 pH值的玻璃和參比電極。它們能將 pH值的變化測量出來。這樣，測得的pH值便間接地反應(yīng)了溶液中PCO2的

20、高低。 PH-logPCO2第47頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四氧分壓電極(PO2電極) 氧分壓電極也是一種氣敏電極。氧的測量是基于電解氧的原理而實現(xiàn)的。第48頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四在氧電極的陰極和陽極之間加有0.7V左右的極化電壓。在極化電壓的作用下，進(jìn)入到電極套中的氧被電解。電極上所產(chǎn)生的反應(yīng)為: 陽極反應(yīng)：O2十2H2O十4e4OH 陰極反應(yīng)：4Ag4Ag一4e 此電解電流的大小正比于 PO2的高低。這樣，通過氧電極的轉(zhuǎn)換，PO2的高低便轉(zhuǎn)換成了電流的大小。第49頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四血氣

21、分析儀的工作原理如圖所示 第50頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四電解質(zhì)的工作原理圖 第51頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四自動生化分析技術(shù)和相關(guān)儀器生化分析儀通過對血液和其他體液的分析來測定各種生化指標(biāo)：如血紅蛋白、膽固醇、肌肝、轉(zhuǎn)氨酶、葡萄糖等，是臨床診斷常用的重要儀器之一。自動生化分析儀：是將生物化學(xué)分析過程中的取樣、加試劑、去干擾、混合、保溫反應(yīng)、自動檢測、結(jié)果計算、數(shù)據(jù)處理和打印報告，以及實驗后的清洗等步驟自動化的儀器。 第52頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四生化分析的光學(xué)測定原理許多化學(xué)物質(zhì)具有顏色，有些無

22、色的化合物也可以和顯色劑作用，生成有色物質(zhì)。當(dāng)有色溶液的濃度改變時，顏色的深淺也隨著改變。濃度越大，顏色越深；濃度越小，顏色越淺。因此，可通過比較溶液顏色深淺的方法來確定有色溶液的濃度，對溶液中所含的物質(zhì)進(jìn)行定量分析。生化分析即利用光電比色法分析標(biāo)本中的各生化指標(biāo)。第53頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四物質(zhì)的顏色與光的吸收、透過、反射有關(guān)。透明物質(zhì)的顏色是其透過光波的顏色，不透明物質(zhì)的顏色是其反射光波的顏色。有色溶液對光的吸收是有選擇性的。各溶液呈現(xiàn)不同的顏色，是因為溶液中的有色質(zhì)點選擇性地吸收某種顏色的光所致。實踐證明，溶液所呈現(xiàn)的顏色是它的主要吸收光的互補色。 第

23、54頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四由于有色物質(zhì)對光的吸收具有選擇性，因此，在進(jìn)行比色測定時，只能用光波中能被有色溶液吸收的那部分光線，即應(yīng)用單色光進(jìn)行比色測定。而不被有色溶液吸收的光線，則應(yīng)設(shè)法在未透過有色溶液之前或之后將其消除掉。濾光片就起這個作用。選擇濾光片的原則應(yīng)是：濾光片的顏色應(yīng)與待測溶液的顏色為互補色。第55頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四LambertBeer定律（一）LambertBeer定律時討論溶液吸光度同溶液濃度和溶液層厚度之間關(guān)系的基本定律，該定律是分光分析的理論基礎(chǔ)。表達(dá)式為：AKLC式中A為吸光度；K為比例常數(shù)，稱

24、為吸光系數(shù)；L為溶液層厚度，稱為光徑；C為溶液濃度。第56頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四LambertBeer定律（二）LambertBeer定律適用于可見光、紫外光、紅外光和均勻非散射的液體根據(jù)LambertBeer定律，當(dāng)液層厚度為1cm，濃度單位為1mol/L時，吸光系數(shù)K稱為摩爾吸光系數(shù)。 的意義是：當(dāng)液層厚度為1cm，物質(zhì)濃度為1mol/L時在特定波長下的吸光度值。 是物質(zhì)的特征性常數(shù)第57頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四LambertBeer定律（三）在固定條件（入射光波長、溫度等）下，特定物質(zhì)的不變，這是分光光度法對物質(zhì)進(jìn)行定

25、性的基礎(chǔ)。通過對已知濃度的溶液的測定其吸光度，可求得某物質(zhì)。第58頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四光電比色計的基本結(jié)構(gòu) 一般的光電比色計由光源、濾光片、比色皿、光電檢測器、放大和顯示等部分組成 第59頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四尿液分析及其尿液分析儀器尿液分析儀的檢測原理是什么？把試劑帶浸入尿液中后，除了空白塊外，其余的試劑塊都因和尿液發(fā)生了化學(xué)反應(yīng)而產(chǎn)生了顏色的變化。試劑塊的顏色深淺與光的吸收和反射程度有關(guān)，顏色越深，相應(yīng)某種成分濃度越高，吸收光量值越大，反射光量值越小，反射率也越小。反之，反射率越大。即顏色的深淺與光的反射率成比例關(guān)系

26、，而顏色的深淺又與尿液中各種成分的濃度成比例關(guān)系。所以只要測得光的反射率即可以求得尿液中各種成分的濃度第60頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四尿液分析儀結(jié)構(gòu)示意圖第61頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四常用的臨床免疫學(xué)檢測技術(shù)第62頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四一、免疫濁度法基本原理 免疫濁度法是可溶性抗原、抗體在液相中特異結(jié)合，產(chǎn)生一定大小的復(fù)合物，形成光的折射或吸收，測定這種折射或吸收后的透射光或散射光作為計算單位。第63頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四二、免疫濁度法分類（一）透射光免疫濁

27、度法透射光免疫濁度法是個極簡便的方法，測定方式是測定入射光因反射、吸收或散射后的衰減，讀數(shù)以吸收光單位（A）或OD表示，這種A值反映了入射光和透射光的比率。第64頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四（二）散射比濁法 散射比濁法應(yīng)用越來越多，且有替代其他免疫定量法的趨勢。散射比濁的原理是根據(jù)雷利(Rayleigh)公式提出的，當(dāng)復(fù)合物較小時（3*10）呈全透射，透射與散射相當(dāng)。當(dāng)復(fù)合物大于入射光波的1/20時，形成不對稱前向散射，在90以前的角度測量散射光皆取得最佳效果，散射光的量代表復(fù)合物的量。第65頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四1、終點散射比

28、濁法終點法是將抗原抗體混合后，待其反應(yīng)趨于平穩(wěn)、直到反應(yīng)終末時測定結(jié)果。2、速率散射比濁法 所謂速率，是在某單位時間內(nèi)形成大于3*10以上的復(fù)合物量（不是積累數(shù)），當(dāng)儀器測定到某一時間單位內(nèi)形成的速率下降時，即出現(xiàn)速率峰，該峰值的高低，即代表抗原的量。第66頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四（三）粒子強(qiáng)化免疫濁度測定法 粒子強(qiáng)化免疫濁度測定法的基本原理是，選擇一種大小適中，均勻一致的膠乳顆粒吸附或交聯(lián)抗體后，當(dāng)遇到相應(yīng)抗原時，則發(fā)生聚集，單個膠乳顆粒在入射光波長之內(nèi)，光線可透過。當(dāng)兩個膠乳顆粒凝聚時，則使透射光減少，這種減少的程度與膠乳凝集成正比，當(dāng)然也與抗原量成正比。

29、第67頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四固相酶免疫測定技術(shù)酶是一種能催化化學(xué)反應(yīng)的特殊蛋白質(zhì)，其催化效力超過目前所有的人造催化劑，一般可使反應(yīng)加速1081010倍.酶具有高度的專一性，即每一種酶只催化一種或一組密切相關(guān)的化學(xué)反應(yīng). 第68頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四一、固相酶免疫測定的原理和類型EIA是將酶催化的放大作用與抗原、抗體的免疫反應(yīng)相結(jié)合的一種微量分析技術(shù)。酶標(biāo)記抗體或抗原后，既不影響抗體或抗原的免疫反應(yīng)特異性；也不改變酶本身的催化活性，即在相應(yīng)的反應(yīng)底物參與下，標(biāo)記的酶可以使底物基質(zhì)水解而呈色、或使供氫體由無色的還原型轉(zhuǎn)變?yōu)橛猩?/p>

30、的氧化型。呈色反應(yīng)顯示了反應(yīng)體系中酶、也就是被標(biāo)記的抗體(或抗原)的存在，從而證明發(fā)生了相應(yīng)的免疫學(xué)反應(yīng)。 第69頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四（二）ELISA反應(yīng)的類型：1、雙抗體夾心法 檢測抗原最常用的方法，操作步驟如下：（1）將特異性抗體與固相載體聯(lián)結(jié)，形成固相抗體。洗滌除去未結(jié)合抗體及雜質(zhì)。（2）加受檢標(biāo)本，與固相抗體接觸反應(yīng)一段時間，讓標(biāo)本中的抗原與固相抗體結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。第70頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四（3）加酶標(biāo)抗體。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。徹底洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此

31、時，固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢抗原的量相關(guān)。（4）加底物顯色。夾心式復(fù)合物中的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進(jìn)行該抗原的定性或定量。第71頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四 2、間接法測抗體 間接法是檢測抗體最常用的方法，其原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體以檢測已與固相抗原結(jié)合的受檢抗體，故稱為間接法。操作步驟如下：(1) 將特異性抗原與固相載體聯(lián)結(jié)，形成固相抗原。洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。第72頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四(2) 加稀釋的受檢血清。血清中的特異性抗體與固相抗原結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物，經(jīng)洗滌后，固相載體上只

32、留下特異性抗體。其他免疫球蛋白及血清中的雜質(zhì)由于不能與固相抗原結(jié)合，在洗滌過程中被洗去。(3) 加酶標(biāo)抗免疫球蛋白（酶標(biāo)抗抗體，一般為酶標(biāo)抗人IgG )。它與固相復(fù)合物中的抗體相結(jié)合，從而使該抗體間接地標(biāo)記上酶。清洗后，固相載體上的酶量與特異性抗體的量相關(guān)。第73頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四(4) 加底物顯色。顏色深度與標(biāo)本中受檢抗體量相關(guān)。本法主要用于對病原體抗體的檢測而進(jìn)行傳染病的診斷。本法的主要缺點為受檢標(biāo)本須經(jīng)稀釋（1:50-1:20）的后才能進(jìn)行測定，否則血清中高濃度的非特異性IgG和其他干擾物質(zhì)會引起陰性本底過高，影響結(jié)果的判斷。第74頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四3、雙抗原夾心法 反應(yīng)模式與雙抗體夾心法類似。用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶結(jié)合物，以檢測相應(yīng)的抗體。同屬抗體檢測，與間接法不同之處為以酶標(biāo)抗原代替酶標(biāo)抗抗體。在間接法不適用時（例如包被抗原中的雜質(zhì)可與酶標(biāo)記的抗入IgG反應(yīng)），可試用此法。此法中受檢標(biāo)本不需稀釋，可直接用于測定，因此其敏感度相對高于間接法。在臨床檢驗中，抗HBs的ELISA常采用本法。第75頁，共82頁，2022年，5月20日，23點21分，星期四4、競爭法測抗體 當(dāng)相應(yīng)抗原材料中含有與抗入IgG反應(yīng)的物質(zhì)，而且不易得到足夠的純化抗原進(jìn)行包被時