試驗方法總結：動物模型部分

1、實驗方法總結：動物模型部分 TOC o 1-5 h z 1、研究腫瘤細胞增殖 12、研究腫瘤細胞轉移 2體外（浸潤模型） 2體內（轉移模型） 23、研究腫瘤細胞耐藥 4耐藥細胞株的建立 4裸鼠移植瘤耐藥模型的建立 5從月中瘤起源分，月中瘤動物模型的分類如下:從研究目的來分，可以從增殖、轉移、耐藥三個角度來分析：1、研究月中瘤細胞增殖細胞準備：GeneA敲減慢病毒感染細胞擴增至需要的細胞量。分為：空白對照 組、陰性對照組、實驗組。取Balb/c裸鼠，雄性，6周齡，每組10只，適應一周后進行月中瘤細胞注射XXX細胞消化離心后制成單細胞懸液，計數(shù)后取適量的細胞用PBS懸浮，在Balb/c裸鼠側腹部皮

2、下接種。每只接種 2 x 106個細胞，注射體積為100山。此后，每隔5天測量注射部位月中瘤的體積。30天后裸鼠小鼠腹腔注射80 mg/kg 戊巴比妥鈉，小鼠麻醉后置藍色背景布上拍照（側臥位，接種部位朝上），小鼠 頸椎脫臼處死，取出月中瘤稱重，將月中瘤置藍色背景布上拍照，月中瘤一分為二，一 份4%多聚甲醛固定，待后續(xù)病理分析，一份-80C凍存。2、研究月中瘤細胞轉移月中瘤轉移的模型包括兩大類：體外（浸潤模型）和體內（轉移模型）。體外（浸潤模 型）：了解月中瘤細胞對周圍相連組織的侵潤性。體內模型主要研究月中瘤細胞的轉 移性即月中瘤細胞在遠端組織形成病灶的能力。體外（浸潤模型）例：浸潤型腦膠質瘤動

3、物模型的建立方法：取若干只Balb/c免疫缺陷裸鼠，將分離和鑒定并轉染攜帶綠色熒光蛋白 的腦膠質瘤干細胞立體定向法行小鼠顱內接種，每組10只。小鼠麻醉后頭部正中切口，剝離骨膜后鉆孔（坐標是冠狀縫后0.5 cm ,矢狀縫右側2.5 cm）。取2 山膠質瘤干細胞以1 x 104 cells /只小鼠的劑量，經微量注射器緩慢注射入鼠腦紋狀體內（深度是2.53 mm）。在確定的時間點處死一部分動物進行熒光（立 體熒光顯微鏡下）病理證實和比較，同時檢查腦膠質瘤干細胞的體內生長特征以 及干細胞標志物等。體內（轉移模型） 例：肩胛部皮下接種的方法建立裸鼠乳腺癌移植瘤模型， 目的：觀察壯骨鎮(zhèn)痛膠 囊對裸鼠乳腺

4、癌移植瘤模型 骨轉移相關指標整聯(lián)蛋白a V03 （ITG-aV03）及骨唾 液酸蛋白（BSP）表達的影響。方法：取處于對數(shù)生長期的 乳腺癌細胞MDA-MB-231 ,用0.25%胰蛋白酶消化 制成單細胞懸液，收集細胞，細胞計數(shù)板法計數(shù)，調節(jié)細胞濃度為2Xl07j/mL, 按0.2 mL/只接種于裸鼠右前肢肩胛上區(qū)，接種部位可以見一皮丘，質軟， 2天 后，皮丘基本吸收，10天后接種部位可觸及米粒大結節(jié)，質硬，即乳腺癌移植 瘤組織。檢測壯骨鎮(zhèn)痛膠囊 對移植瘤組織中IGT-av陽和BSP表達的影響。例：原位移植建立人 腎透明細胞腺癌 裸鼠轉移模型，觀察月中瘤病理學特征。方法：收集體外培養(yǎng)的對數(shù)生長期

5、 786-0細胞（人腎透明細胞腺癌細胞），進行 裸鼠皮下注射，待皮下移植瘤長至直徑為 1.5cm左右時取出，以相同方法進行 鼠間傳代（每代2只），34代后取出移植瘤，剪成1mm 3大小進行腎包膜下 原位接種，獲人月中瘤裸鼠轉移模型，即外科原位移植（ Surgical Orthotopic Implantation , SOI）模型，裸鼠垂死時脫頸處死，取出肺臟轉移灶體外培養(yǎng)， 胰酶消化傳代45次后即獲得較純的月中瘤細胞，命名為 786-0-LM1。同時采用 786-0細胞懸液進行腎包膜下原位注射，建立細胞原位注射模型。腫癌的常見轉移部位膀胱癌淋巴結.腎、泌尿生si系統(tǒng)、腹膜腦腫瘤腦膜乳腺俎骨.

6、肺.肝.淋巴結.腦.骨髓皂頸癟骨.肺.肝.淋巴結.腎、泌尿生殖系統(tǒng)結腸癌肺.肝,淋巴結.腎*泌尿生殖系統(tǒng)食管瘍淋巴結.骨 肺.肝.腎上膘頭頸部腫痛肺.皮膚、淋巴結肝痛骨.肺、淋巴結腎癌骨.肺.肝.淋巴結.隨白血病/淋巴痛 骨、骨髓，皮膚.肺，淋巴結.腦肺眼胃.骨髓.肝.淋巴結.腦.腎.泌尿生殖系統(tǒng)黑色素瘤骨.肺.肝,淋巴結、骨髓.皮膚、腦卵巢癌肺.肝.淋巴結.腸、旗膜胰腺癌肺,肝.腸、淋巴結前列腺癌骨.骨髓、肺、肝.淋巴結肉痛肺.肝.淋巴結胃癌骨.肺.肝.淋巴結塞丸癟骨.肺.肝.淋巴結甲狀腺癌骨.肺.淋巴結子宮癌骨3、研究月中瘤細胞耐藥耐藥細胞株的建立本實驗以紫杉醇為誘導藥，以人食管鱗癌細胞系

7、EC109為誘導對象，采用高劑量間歇誘導結合時間遞增的方法建立耐藥細胞株。終濃度為0.625 回/ml的紫 杉醇（此濃度是紫杉醇對EC109細胞IC50的12.5倍）作用于對數(shù)生長期的EC109兩個小時，之后棄含藥培養(yǎng)基，用 4 CPBS洗三次，0.25%胰蛋白酶消化處理，800r/min離心4min收集細胞，加培養(yǎng)基重懸，重新接種于培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng)；24小時后可見大量細胞死亡，不斷去除凋亡細胞，擴增活細胞，至生 長狀態(tài)良好，達到70%80%飽和時，傳代培養(yǎng)3代；重復上述操作兩次，即EC109細胞在此階段共被藥物作用 3次，得到細胞 EC109/Taxol。MTT實驗 測定親本細胞與耐藥細胞對多種細胞毒類化合物的敏感性。裸鼠移植瘤耐藥模型的建立無菌條件下收集親本株 EC109和 耐藥株EC109/Taxol細胞，用無菌生