PCR技術(shù)與遺傳病的產(chǎn)前診斷

1、PCR技術(shù)與遺傳病產(chǎn)前診斷1PCR在遺傳病產(chǎn)前診斷中的地位PCR在遺傳病產(chǎn)前診斷的應(yīng)用2PCR在遺傳病產(chǎn)前診斷中的地位PCR技術(shù)能在短時(shí)間內(nèi)將靶DNA擴(kuò)增百萬倍，操作簡(jiǎn)便，省時(shí)，準(zhǔn)確。它不僅能直檢突變基因，而且可與其它技術(shù)結(jié)合，使其診斷的準(zhǔn)確性幾乎達(dá)100%.因而它已成為目前遺傳病產(chǎn)前診斷的主要手段.3產(chǎn)前基因診斷胎兒標(biāo)本的來源由于PCR技術(shù)本身的特點(diǎn)，即可在短時(shí)間內(nèi)將微量的DNA擴(kuò)增數(shù)百萬倍，因此它適應(yīng)于各種來源的DNA標(biāo)本.(1)羊水穿刺，在如15周后可經(jīng)母親脆壁穿刺獲羊水，其內(nèi)含有大量的胎兒脫細(xì)胞5-10ml羊水即可獲得足夠量的PCR分析DNA樣品.(2)絨毛采樣，在如早期(9-12周)

2、經(jīng)陰道在B超引導(dǎo)采取絨毛樣品，它含有豐富的DNA.4(3)胎兒血液采集:有簡(jiǎn)條途徑:胎兒臍靜脈穿刺，胎兒鎖采集.(4)胎兒活檢:可用穿刺取樣，亦可經(jīng)胎兒鏡取樣.可在始17-19周進(jìn)行5（一）PCR技術(shù)直接診斷遺傳病（1）、對(duì)于由基因缺失突變引起的遺傳病可利用缺失區(qū)域的DNA序列引物直接擴(kuò)增該區(qū)域，看有無特異性的擴(kuò)增產(chǎn)物6型地中海貧血是一組遺傳性溶血性貧血疾病。由于遺傳的型珠蛋白基因簇致使血紅蛋白中珠蛋白鏈合成缺如或不足所導(dǎo)致的貧血或病理狀態(tài)。（其中缺失的基因包括1、2、1 和部分基因。）7通過孕15 周的羊膜穿刺或孕7 10 周的絨毛取樣獲得胎兒細(xì)胞,提取DNA進(jìn)行檢測(cè)用P C R法擴(kuò)增2和1

3、 之間區(qū)域, 長(zhǎng)13 6 b P。 也在同一個(gè)標(biāo)本同時(shí)擴(kuò)增珠蛋白基因作為對(duì)照，長(zhǎng)110bp P C R 后電泳檢測(cè)。8純合子病人電泳結(jié)果只顯示一條110b p 的珠蛋白基因片段。正常個(gè)體則同時(shí)顯示1 1 0b p 的珠蛋白基因片段和1 3 6 b p的a 珠蛋白基因片段。根據(jù)特異擴(kuò)增帶的有無即可作出判斷。結(jié)果：2022/9/159（2）對(duì)基因的重排來說，當(dāng)點(diǎn)突變影響到限制性內(nèi)切酶切點(diǎn)時(shí)，將擴(kuò)增產(chǎn)物用適當(dāng)?shù)膬?nèi)切酶切割，然后據(jù)電泳圖譜復(fù)制判斷有無內(nèi)切酶切點(diǎn)的改變10鐮狀細(xì)胞性貧血分子基礎(chǔ)是珠蛋白基因第6 密碼子G A G G T G 即A T的轉(zhuǎn)變11以P C R 法擴(kuò)增-珠蛋白基因中一個(gè)294bp片段。擴(kuò)增產(chǎn)物以限制性內(nèi)切酶OxaNI消化（內(nèi)切酶OxaNI的作用位點(diǎn)為GAG)。產(chǎn)物經(jīng)E B染色或銀染、電泳12正常個(gè)體產(chǎn)生191bp和103bp兩個(gè)片段。純合子患者則只有一個(gè)未被酶解的294bp 的片段。雜合子