流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期操作步驟_第1頁
流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期操作步驟_第2頁
流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期操作步驟_第3頁
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流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期操作步驟_第5頁
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/10將細(xì)胞懸液移入15ml離心管中I2000rpm離心5min,PBS吸除I用PBS清洗細(xì)胞2次2000rpm,離心5min收集細(xì)胞I用400ullXBindingBuffer懸浮細(xì)胞(濃度大約為1X106cells/ml)I在細(xì)胞懸液中參加5ulAnnexinV-EGFP,輕輕混勻后于2-8C避光條件下孵育15minI參加10ulPI后輕輕混勻,于2-8C避光條件下孵育5minI在1h用流式細(xì)胞儀檢測流式細(xì)胞儀激發(fā)光波長采用Ex.二488nm雙波長激發(fā),Em.二510nm檢測EGFP熒光(FL1channel)和575nm的發(fā)射波長檢測PI。細(xì)胞應(yīng)可分成三個亞群:活細(xì)胞僅有很低的熒光強(qiáng)度,凋亡細(xì)胞有較強(qiáng)的綠色熒光,壞死細(xì)胞包括極晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色熒光雙重染色。圖2-5-2細(xì)胞凋亡的AnnexinV-FITCZPI檢測法在流式細(xì)胞術(shù)雙參數(shù)散點(diǎn)圖上左下象限顯示活細(xì)胞,為AnnexinV/PI-;右上象限是非活細(xì)胞,即壞死細(xì)胞為AnnexinV+/PI+;而右下象限為凋亡細(xì)胞,顯現(xiàn)AnnexinV+/PI-。

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