附子中新烏頭堿的含量測定

1、附子中新烏頭堿的含量測定【摘要】目的建立以高效液相色譜法測定附子中新烏頭堿含量的方法。方法采用elhr-18色譜柱(5,4.6250)，以甲醇水三乙胺75250.033為流動相，流速為1.0lin-1，檢測波長為233n，柱溫為30。結(jié)果新烏頭堿在0.04640.3248g范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，r=0.9999；平均回收率為100.7%，RSD=2.19%。結(jié)論該方法操作簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于附子中新烏頭堿的含量測定。【關(guān)鍵詞】附子；新烏頭堿；高效液相色譜法附子為毛茛科植物烏頭AnituarihaeliDebx.子根的加工品，具有回陽救逆、補(bǔ)火助陽、逐風(fēng)寒濕邪的成效1。附子的主要成分是烏

2、頭類生物堿，可分為單酯類、雙酯類和胺基醇類生物堿。其中以雙酯型類生物堿如烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿成分毒性較大，但又同時是附子的藥性成分。歷代醫(yī)家都非常重視附子的毒性及其用量2。為保證用藥的平安性，本文在參考有關(guān)文獻(xiàn)的根底上3，4，對附子生品中的新烏頭堿進(jìn)展含量測定，希望可以為其在質(zhì)量控制方面提供一定的根據(jù)。1儀器與試藥1.1儀器島津L-20A高效液相色譜儀,HS10260D超聲洗潔器，XS205電子天平十萬分之一，JT1003電子天平千分之一。1.2試藥新烏頭堿對照品中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號：110799202204；甲醇為色譜純；三乙胺、乙醚為分析純；鹽酸；氨水；純潔水。

3、2方法與結(jié)果2.1色譜條件色譜柱：elhr-18(5，4.6250)；流動相為甲醇-水-三乙胺75250.033；流速：1.0lin-1；檢測波長：233n；柱溫：30。進(jìn)樣量：5l。在該色譜條件下，新烏頭堿與雜峰別離良好。結(jié)果見圖12。2.2溶液的配制2.2.1對照品溶液的制備精細(xì)稱取新烏頭堿對照品適量，配制成0.116gl-1的對照品溶液，再精細(xì)汲取此對照品溶液，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0，2.4，2.8l分別定容于5l容量瓶中。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.2.2樣品溶液的制備精細(xì)稱取生附子粉末40目約1.4g，置于具塞三角錐形瓶中，參加濃氨水2l，浸潤0.5h,再加75l乙醚搖

4、勻，放置過夜，超聲功率500，工作頻率40kHz提取15in,過濾，再以25l乙醚分次洗滌藥渣，過濾，合并濾液和洗液，45水浴揮干，0.037鹽酸甲醇溶液溶解殘渣，并定容至25l，搖勻，臨用前用0.45微孔濾膜濾過，即得供試樣品溶液。2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制勸2.2.1項下制得的對照品溶液，均進(jìn)樣5l，在233n處檢測，以峰面積值A(chǔ)對進(jìn)樣量進(jìn)展線形回歸，得回歸方程為：A=8625582-142.3115，r0.9999n=7，結(jié)果說明,在0.04640.3248g范圍內(nèi)新烏頭堿峰面積與進(jìn)樣量呈良好的線性關(guān)系。2.4精細(xì)度實(shí)驗精細(xì)汲取同一供試樣品溶液5l注入高效液相色譜儀,重復(fù)進(jìn)樣6次，測得新烏頭堿

5、的峰面積，RSD=1.52。結(jié)果說明儀器精細(xì)度良好。2.5穩(wěn)定性實(shí)驗精細(xì)汲取放置0，2，4，6，8h的樣品溶液5l分別注入高效液相色譜儀，測得相應(yīng)的峰面積，RSD=2.19。結(jié)果說明，供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定性良好。2.6重復(fù)性實(shí)驗精細(xì)稱取同一藥材6份按“2.2.2項下供試品的制備方法制備，分別汲取上述樣品溶液5l注入高效液相色譜儀，測其峰面積并計算含量，RSD=2.06。2.7加樣回收率實(shí)驗精細(xì)稱取含量樣品約0.7g9份，分別精細(xì)參加新烏頭堿對照品溶液適量使其中新烏頭堿含量為樣品中新烏頭堿含量的80%3份、100%3份、120%3份。按“2.2.2項制備，按上述色譜條件測定，并計算新烏頭堿含量

6、及RSD值。結(jié)果見表1。表1回收率實(shí)驗結(jié)果略2.8樣品含量測定對生附子、白附片、黑附子3種藥材分別按“樣品溶液的制備方法處理，依法測定。結(jié)果見表2。表2樣品含量測定結(jié)果略3討論通過對3種不同炮制方法所制成的附子中新烏頭堿的含量測定可知，不同炮制方法的附子中新烏頭堿的含量差異較大，其中生附子中新烏頭堿的含量較高。本實(shí)驗中曾進(jìn)展了流動相系統(tǒng)的優(yōu)化研究，比擬了乙腈0.03乙二胺4654，乙腈0.03乙二胺4060，乙腈0.03乙二胺4258，乙腈0.2冰醋酸三乙胺調(diào)pH6.253763，甲醇水三乙胺70300.1，甲醇水三乙胺70300.04，甲醇水三乙胺90100.04，甲醇水三乙胺80200.0

7、8，甲醇水三乙胺75250.1，甲醇水三乙胺72280.037，甲醇水三乙胺74260.035，甲醇水三乙胺75250.033等流動相系統(tǒng)的出峰效果，以最后一種對新烏頭堿的檢測效果最正確，在此色譜條件下，新烏頭堿與雜峰別離良好、峰形亦佳，應(yīng)選用此流動相。在樣品的提取方法上，我們對直接超聲提取及放置過夜后超聲提取兩種提取方法的提取效果進(jìn)展了比照研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)放置過夜后超聲提取對新烏頭堿的提取率最高，且通過加樣回收率實(shí)驗說明放置過夜后超聲提取方法對新烏頭堿的提取可靠，同時，發(fā)現(xiàn)超聲提取時間對新烏頭堿的含量有顯著影響。以超聲15in的提取率最高再增加提取時間其含量無明顯升高，應(yīng)選15in。在定容溶劑

8、的考察上，我們分別對二氯甲烷和鹽酸甲醇溶液的效果進(jìn)展了比照研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)用鹽酸甲醇溶液定容時供試液的穩(wěn)定性較好。對于鹽酸甲醇溶液的濃度，查文獻(xiàn)資料及試驗驗證后，采用0.037。采用高效液相色譜法測定附子中新烏頭堿的含量此方法具有簡便、可靠、重現(xiàn)性較好的優(yōu)點(diǎn)。但由于采用手動進(jìn)樣器，且無在線脫氣系統(tǒng),其結(jié)果容易受流動相、空氣濕度、溫度、操作人等諸多因素影響。因此應(yīng)注意高效液相色譜的標(biāo)準(zhǔn)化操作,保證實(shí)驗測定的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。【參考文獻(xiàn)】1國家藥典委員會.中國藥典，I部S.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2022：132.2江京莉，周遠(yuǎn)鵬.附子的藥理作用和毒性J.中成藥，1991，1312：37.3王瑞，劉芳，孫毅坤，等.不同附子炮制品中烏頭堿、新烏