靈芪膠囊對直結腸癌 lovo 細胞凋亡相關基因表達的影響

1、靈苗膠囊對直結腸癌10V0細胞凋亡相關基因表達的影響來源： ： 時間：2022-11-10靈芭膠囊源于傳統(tǒng)醫(yī)藥方劑，經(jīng)現(xiàn)代化的加工制成， 方中靈芝等名貴中草藥對于腫瘤的治療具有一定的療效。通過前期研 究，筆者發(fā)現(xiàn)，靈茂膠囊對于消化道腫瘤具有一定的抑制作用。本課 題選取直結腸癌細胞lovo細胞，進一步探討靈茂膠囊對直結腸癌 lovo細胞腫瘤凋亡相關基因表達的作用及機制。1材料與方法1. 1細胞株人源性直結腸癌lovo細胞：由黑龍江省腫瘤醫(yī)院提供。1. 2藥物與試劑靈英膠囊，藥物組成：黃芭、靈芝、莪術、茯苓、人 參、貫眾、山藥、枸杞子、重樓、山慈菇等。該膠囊由本教研室自行 制備，每顆膠囊約含生藥量

2、為L 65g,于4。冰箱存放備用，實驗時 配制成混懸液;5-氟尿嘴唳注射液(天津金耀氨基酸提供，批 號：20220424,國藥準字:H2022959) ；BSA(哈爾濱賽拓科技); 抗 體 Caspase3(H-170)：sc-13-87(Santa 生物公司)；二抗 R bLgG(H+l)/FLTO(中杉,哈爾濱賽拓科技)；-actin(上海翔升 生物科技專業(yè)提供)；顯色液和蛋白Marker(碧云天生物技術 研究所提供)；轉膜液SDS蛋白上樣緩沖液(5)自行配制;TBS緩 沖液；TBST 緩沖液;BSA 封閉液；L 5molL-lTrisHCL(pH8. 8) ； 1. OmolL -lTr

3、isHCL(pH6. 8);1. OmolL-lTrisHCL(pH7. 5)；質量分數(shù) 30%丙 烯酰胺；質量分數(shù)20%Tween20；質量分數(shù)10%SDS；質量分數(shù)10%過硫酸 鐵AP；G250考馬斯亮藍溶液(蛋白定量專用)；單去污劑裂解液(PMSF)； 電泳液緩沖液;轉膜緩沖液。1. 3實驗儀器蛋白質印跡法所用器材由黑龍江省腫瘤醫(yī)院提供；電泳 儀(北京賽百奧科技)；DYY-12及凝膠成像儀(UVPUSA)；紫外 可見光分光光度計(日本島津公司)；PVDF膜和濾紙(選歐爾公司)；離 心管(eppendorf公司)。1. 4實驗方法1. 4.1實驗分組將Wistar大鼠隨機分為5組，每組10

4、只，靈茂膠 囊高劑量組予以靈茂膠囊35. 64g(kgd)1灌胃，靈芭膠囊中劑量組 予以靈茂膠囊17. 82g(kgd)1灌胃，靈英膠囊低劑量組予以靈茂膠 囊8. 91g(kgd)-1灌胃，陽性對照組予以5-氟尿咯哽注射液 0. 027g(kgd)-1灌胃，空白對照組予以等體積生理鹽水灌胃，給藥 7d后取血，別離血清，去除雜質，濾過滅菌，一4寸放置備用。將不 同組別的對數(shù)生長期的lovo細胞培養(yǎng)至細胞貼壁后，分別放入相應 的含藥血清，48h后收集細胞。1. 4. 2提取蛋白收集細胞：將不同組別的細胞用胰蛋白酶進行消 化，用質量分數(shù)0.996氯化鈉注射液洗3遍，PBS4(10min),轉到 EP

5、管中，4000rminl離心5min(離心半徑8cm),倒棄上清液,重復 洗滌3遍。細胞裂解：每管細胞加入裂解液200L,與細胞充分混勻。 溫度4T,每間隔15min渦旋1次，使得細胞得以充分裂解，將裂解 后的細胞離心(12000rmin l, 4,離心半徑8cm)提取上清液備用。1. 4. 3檢測蛋白含量應用考馬斯亮藍法檢測蛋白含量，計算蛋白的上樣量。1. 4. 4凍存變形的蛋白樣本放置于61oddingbuffer中，99水浴 中進行渦旋，約5min。冷卻后，凍存，長期存放于一80(冰箱。1. 4. 5蛋白質印跡法流程玻璃板洗凈、晾干備用，放入夾中卡緊, 然后垂直卡在架子上準備灌膠。配制質量分數(shù)10%別離膠，需要以下 材料：質量分數(shù)10%別離膠7磯，去離子水2. 8mL,質量分數(shù)3096丙烯 酰胺 ACR2. 31mL, Tris(pll8. 8)1. 75mL,質量分數(shù) 10%SDS70L,質 量分數(shù)10%過硫酸鉉AP70L。加入TEMED3L后立即搖勻即可灌膠。將 濾紙及PVD膜泡在轉膜液中。論文發(fā)表中國衛(wèi)生產業(yè)雜志投稿咨詢：1