衰老進程中大鼠淋巴細(xì)胞凋亡率的比較研究及淫羊藿總黃酮的干預(yù)

1、朽邁歷程中大鼠淋巴細(xì)胞凋亡率的比力研究及淫羊藿總黃酮的干預(yù)【摘要】目的：比力研究朽邁歷程中各年事段大鼠淋巴細(xì)胞凋亡率的差異及淫羊藿總黃酮ef對老年期細(xì)胞凋亡的干預(yù)作用。要領(lǐng)：選用sd大鼠脾臟分散的淋巴細(xì)胞為研究工具，用流式細(xì)胞要領(lǐng)，比力從出生后3天直到27月齡朽邁歷程中，各代表性年事段的細(xì)胞凋亡率差異，并不雅察ef對老年過分細(xì)胞凋亡的影響作用。效果：剛出生3天組的凋亡率最低，隨著增齡，細(xì)胞凋亡率漸漸升高，僅10月齡組破例，其凋亡率小于4月齡組，27月齡的細(xì)胞凋亡率最高。ef干預(yù)后，27月齡組的細(xì)胞凋亡率顯著落落，介于10月齡與18月齡之間程度，以上差異均有明顯統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05p0.001

2、)。結(jié)論：在朽邁歷程中，大鼠淋巴細(xì)胞的凋亡率隨增齡而漸漸升高，在老年大鼠存在過分凋亡征象，而ef可按捺老年淋巴細(xì)胞過分凋亡。【關(guān)鍵詞】淫羊藿總黃酮流式細(xì)胞細(xì)胞凋亡免疫朽邁parativestudiesftheapptsisratesflyphytesintheprgressfagingandinterventinaleffetfefnagedratskeyrdsepiediukereanunakaittalflavnids；flytetry；apptsis；iunseneense1質(zhì)料與要領(lǐng)1.1藥物與試劑1.2重要儀器1.3動物與分組干凈級康健雄性sd大鼠60只，由復(fù)旦大學(xué)動物科學(xué)部提供，隨

3、機分為3d組出生3天、4組4月齡、10組10月齡、18組18月齡、27組27月齡、27+ef組，每組各10只。自24月齡開始，27+ef組予ef天天按0.06g/kg，融于5l蒸餾水中灌胃，27組賜與等量蒸餾水灌胃，一連3個月。別的各組通例喂養(yǎng)。1.4脾淋巴細(xì)胞制備無菌摘取脾臟，在超凈臺中分散脾臟淋巴細(xì)胞1。1.5脾淋巴細(xì)胞凋亡監(jiān)測接納流式細(xì)胞儀，annexinv凋亡檢測試劑盒監(jiān)測脾臟淋巴細(xì)胞百分率，步調(diào)如下：pbs洗滌細(xì)胞2次，以1bindingbuffer調(diào)解細(xì)胞濃度為1106ells/l；取100l樣品，參加5lannexinv和5lpi；略微混勻細(xì)胞，25暗室孵育15分鐘；每份樣品參加

4、100l11bindingbuffer；流式細(xì)胞儀檢測闡發(fā)annexinv+、pi-的細(xì)胞百分率，得到的效果分為4部門：存活細(xì)胞、殞命細(xì)胞、早期凋亡細(xì)胞、晚期凋亡細(xì)胞，本研究接納細(xì)胞凋亡率是早期凋亡細(xì)胞與晚期凋亡細(xì)胞的總凋亡率之和。1.6統(tǒng)計闡發(fā)接納spss統(tǒng)計軟件闡發(fā)，統(tǒng)計效果以xs表現(xiàn)，計量資料用方差闡發(fā)：方差齊用lsd查驗，方差不齊用tahane查驗；p0.05為有明顯性差異。2效果各年事段大鼠脾淋巴細(xì)胞馬上凋亡百分率比力見表1和圖1。效果表現(xiàn)，在各年事段淋巴細(xì)胞凋亡百分率比力中，剛出生3天組的凋亡率最低，整個趨勢是隨著增齡，細(xì)胞凋亡率漸漸升高，僅10組破例其凋亡率小于4組，27組細(xì)胞凋

5、亡率最高，與以往研究符合。ef干預(yù)后，27組細(xì)胞凋亡率顯著落落，介于10組與18組之間程度。表1各年事段大鼠淋巴細(xì)胞馬上凋亡百分率比力及ef的干預(yù)作用略3討論從胚胎發(fā)育到殞命的整個生命歷程與細(xì)胞凋亡嚴(yán)密相干,因此細(xì)胞凋亡是雙相的，既是機體發(fā)育的正常歷程，也是由于細(xì)胞凋亡過速隨時間推移而形成的退行性變革,病理環(huán)境下細(xì)胞凋亡過緩還大概導(dǎo)致癌變等變革。機體細(xì)胞凋亡與抗凋亡作用彼此和諧，彼此接洽組成信號網(wǎng)絡(luò),終極細(xì)胞是凋亡照舊保存取決于種種信號分子的協(xié)同作用效果。正常免疫體系發(fā)育的了局，既形成了有免疫活性的淋巴細(xì)胞，又產(chǎn)生了對自身抗原的免疫耐受。而其耐受機制的形成，重要靠識別自身抗原的t淋巴細(xì)胞克隆的

6、步伐性細(xì)胞殞命機制的活化。正常t淋巴細(xì)胞在受到入侵抗原刺激后激活，誘導(dǎo)出一系列的免疫應(yīng)答反響。機體為了防范過高的免疫應(yīng)答，或防范這種免疫應(yīng)答無窮制地生長下去，便有細(xì)胞凋亡來操縱激活t細(xì)胞的壽命。生物朽邁歷程中明顯的年事相干性免疫成效的闌珊多數(shù)由于t淋巴細(xì)胞成效停滯所致。隨著增齡，胸腺退化與萎縮，外周淋巴器官中t細(xì)胞總數(shù)明顯淘汰。同時伴有t細(xì)胞和b細(xì)胞亞體數(shù)量標(biāo)淘汰，t細(xì)胞增殖本領(lǐng)減退，活化途徑失控、對凋亡敏感性增高,對許多種刺激應(yīng)答削弱。我們對sd大鼠脾臟分散的淋巴細(xì)胞的馬上凋亡率研究效果表現(xiàn)，在朽邁歷程中，剛出生3天組的細(xì)胞凋亡率最低，隨著增齡，細(xì)胞凋亡率漸漸升高，這與生命發(fā)育朽邁的漸進性變

7、革是根本相切合的。免疫朽邁歷程中t淋巴細(xì)胞凋亡相干信號網(wǎng)絡(luò)中分子表達(dá)的良性平衡，能使大多數(shù)因壓力超負(fù)荷而改變的基因表達(dá)規(guī)復(fù)到正常程度，可以促進老年免疫穩(wěn)態(tài)的重修。但在朽邁的差異階段,表達(dá)變革占主導(dǎo)職位的基因群組是差異的。因此怎樣使細(xì)胞凋亡得以得當(dāng)按捺，使朽邁相干變革得以延緩，終極得到壽命延伸，是每一個朽邁研究者所執(zhí)著尋求的抱負(fù)目的。我們課題組在補腎藥物調(diào)控細(xì)胞凋亡方面已獲得了必然效果，屢次實行均證實補腎復(fù)方及ef可明顯低落老年大鼠的淋巴細(xì)胞凋亡，而且還通過淋巴細(xì)胞基因表達(dá)譜的研究證實ef可以在上調(diào)抗凋亡基因表達(dá)的同時，下調(diào)促凋亡基因的表達(dá)；上調(diào)促增殖基因表達(dá)的同時，下調(diào)抗增殖基因的表達(dá)，從而重塑朽邁歷程中基因表達(dá)的良性平衡，使整合后的基因表達(dá)表現(xiàn)出抗凋亡、重修免疫穩(wěn)態(tài)的生物學(xué)效應(yīng),表現(xiàn)了多基因、多途徑的團體調(diào)治上