肺癌組織凋亡相關(guān)基因的表達(dá)意義

1、肺癌組織凋亡相關(guān)基因的表達(dá)意義【關(guān)鍵詞】肺腫瘤；癌基因；TUNEL；免疫組織化學(xué)；基因表達(dá)【Abstrat】AI:TdisusstheexpressinsftheapptsisrelatedngenesFas,Bl2,Baxandp53inlunganertissuesandthEirsignifiane,inrdertprvidethetheretialbasisfrtheleularbilgialstudy.ETHDS：Theexpressinsfp53,Bl2,BaxandFasprteinsin57asesflunganereredetetedbytheiunhistheialtehn

2、iqueandTUNEL.RESULTS：TheexpressinratesfBl2,p53,Bax,Fasprteinsinlunganertissuesere33%,69%,70%and28%,respetively,andtheexpressinratefeahapptsisrelatedngeneasdifferentinlunganertissuesfthedifferentpathlgitypes.ThereasndefiniterelatinshipbeteenthelyphndeetastasisandtheapptsisrelatedngenesP0.05.iththeris

3、ingfthepathlgistagingfthetur,theexpressinsfp53andFasprteinsinreased,hiletheexpressinfBl2dereased.ThereseeedtbendefiniterelatinshipbeteentheexpressinfBaxprteinandthepathlgialstagingP0.05.NLUSIN：Therearetheapptsisrelatedngeneexpressinsinlunganertissues,andtheirexpressindegreeisrelatediththeirpathlgial

4、types.Theverexpressinsfp53andFasprteinsaybeassiatediththebadprgnsisflunganer.【Keyrds】lungneplass;ngenes;TUNEL;iunhistheistry;geneexpressin【摘要】目的：討論肺癌組織中凋亡相關(guān)基因Fas，Bax，p53，Bl2蛋白的表達(dá)意義，為進(jìn)展肺癌的分子生物學(xué)研究提供理論根據(jù).方法：應(yīng)用原位末端DNA片段標(biāo)記法TUNEL，結(jié)合免疫組化技術(shù)對(duì)57例肺癌切除標(biāo)本進(jìn)展Fas，Bax，p53及Bl2蛋白檢測(cè).結(jié)果：在肺癌組織中凋亡相關(guān)基因陽(yáng)性率分別為：Fas28%，Bax70%，

5、p5369%，Bl233%，各基因在肺癌不同病理類(lèi)型中表達(dá)率亦不同，且肺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與調(diào)亡相關(guān)基因表達(dá)無(wú)明顯關(guān)系P0.05.其中，p53，F(xiàn)as隨肺癌病理分期的升高而增加，Bl2那么隨病理分期的升高而減少，而B(niǎo)ax那么與病理分期無(wú)明顯關(guān)系(P0.05).結(jié)論：肺癌組織有調(diào)亡相關(guān)基因表達(dá)，其表達(dá)程度與肺癌的病理類(lèi)型有關(guān)，p53,Fas表達(dá)可能與不良預(yù)后有關(guān).【關(guān)鍵詞】肺腫瘤；癌基因；TUNEL；免疫組織化學(xué)；基因表達(dá)肺癌的發(fā)病率逐年升高，從分子程度進(jìn)一步說(shuō)明肺癌的發(fā)生和開(kāi)展，對(duì)其防治具有一定的意義.Fas，Bax，p53及Bl2均為凋亡相關(guān)基因，在肺癌組織中的表達(dá)情況報(bào)道尚少.我們應(yīng)用原位末端

6、DNA片段標(biāo)記法TUNEL，結(jié)合免疫組化技術(shù)，檢測(cè)了57例肺癌石蠟包埋組織中Fas，Bax，p53，Bl2蛋白的表達(dá)情況，討論其彼此之間的關(guān)系及其與臨床分期、預(yù)后的關(guān)系，為進(jìn)一步進(jìn)展肺癌的凋亡研究提供理論根據(jù).1材料和方法1.1材料第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院胸外科手術(shù)切除標(biāo)本57男43，女14例，年齡367353.41.8歲.其中小細(xì)胞肺癌14例，腺癌21例低分化腺癌11例，高分化腺癌10例，鱗癌22例低分化鱗癌10例，高分化鱗癌12例.根據(jù)手術(shù)病理診斷按國(guó)際抗癌聯(lián)盟分期：期5例，期13例，a期17例，b期12例，期10例.SAB試劑盒購(gòu)自廣州華美公司，兔抗Fas多克隆抗體，鼠抗Bl2Ab，兔抗Ba

7、x多克隆抗體及p53Ab均購(gòu)自Dka公司，TUNEL試劑盒購(gòu)自Siga公司.常規(guī)100g/L甲醛固定，石蠟包埋，選取典型病變蠟塊作為研究對(duì)象.肺癌組織學(xué)類(lèi)型按H標(biāo)準(zhǔn)分類(lèi)1.1.2方法Fas，Bl2，Bax，p53蛋白的表達(dá)均采用肺癌組織石蠟切片免疫組化染色SAB法2.TUNEL染色按試劑盒說(shuō)明操作.光鏡下從染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞比例兩方面評(píng)價(jià)染色結(jié)果.標(biāo)本無(wú)陽(yáng)性反響細(xì)胞，或背景同空白對(duì)照為陰性(-)，標(biāo)本陽(yáng)性細(xì)胞呈淡棕黃色或深棕色.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：統(tǒng)計(jì)陽(yáng)性標(biāo)本例數(shù)，計(jì)數(shù)陽(yáng)性率，率的比擬用2檢驗(yàn)，P0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異.2結(jié)果肺癌組織Fas表達(dá)陽(yáng)性28%(圖1A)，其中鱗癌43%陽(yáng)性，腺癌21%陽(yáng)性，

8、小細(xì)胞肺癌21%陽(yáng)性.肺癌Bl233%陽(yáng)性表達(dá)(圖1B)，其中小細(xì)胞肺癌71%，腺癌21%，鱗癌23%.小細(xì)胞肺癌Bl2陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于腺癌和鱗癌(P0.01)，而小細(xì)胞肺癌的凋亡細(xì)胞數(shù)(3.70.7)僅僅略低于腺癌的(4.70.6)和鱗癌的(4.30.8).肺癌Bax陽(yáng)性70%(圖1)，Bax在各型肺癌中均呈現(xiàn)高表達(dá)率，雖然表達(dá)程度有所差異，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.癌旁組織中也有Bax的陽(yáng)性表達(dá).低Bl2/Bax的組織中凋亡率高于Bl2/Bax較高的組織(P0.05).肺癌p53陽(yáng)性69%(圖1D)，其中，鱗癌68%，腺癌67%，小細(xì)胞肺癌64%，在小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌中，p53陽(yáng)性組凋亡細(xì)胞

9、略低于p53陰性組，但兩者之間均無(wú)顯著性差異.肺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與Fas，Bl2，Bax，p53表達(dá)無(wú)明顯關(guān)系(P0.05)，在肺鱗癌和腺癌中，p53蛋白過(guò)度表達(dá)隨病理分期的升高而增加；Bl2過(guò)度表達(dá)那么正相反，隨病理分期的升高而降低，F(xiàn)as過(guò)度表達(dá)亦隨病理分期的升高而增加，而B(niǎo)ax表達(dá)與病理分期無(wú)明顯關(guān)系(P0.05，表1).TUNEL原位末端標(biāo)記熒光法見(jiàn)肺癌組織內(nèi)散在點(diǎn)狀熒光圖2，顯示散在分布的凋亡細(xì)胞.未出現(xiàn)凋亡的細(xì)胞熒光呈陰性.3討論細(xì)胞癌變是一個(gè)多因子、多步驟的復(fù)雜生物學(xué)過(guò)程，與癌基因激活和抑癌基因的失活親密相關(guān).隨著肺癌生物學(xué)研究的進(jìn)展，基因診斷將為早期的肺癌診斷提供理論根據(jù)和實(shí)驗(yàn)手

10、段.TUNEL法是目前國(guó)際公認(rèn)的檢測(cè)凋亡細(xì)胞的比擬敏感的新技術(shù)，該法將分子生物學(xué)與免疫組織化學(xué)相結(jié)合，通過(guò)標(biāo)記單鏈DNA片段而在組織切片或細(xì)胞涂片上顯示凋亡細(xì)胞.較單純形態(tài)學(xué)觀察，敏感性及特異性均高，且能準(zhǔn)確地對(duì)凋亡細(xì)胞作定量研究.我們用此種方法研究了各種肺癌中凋亡細(xì)胞的情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)TUNEL染色后，凋亡細(xì)胞呈熒光陽(yáng)性，非凋亡細(xì)胞呈熒光陰性，在熒光顯微鏡下觀察圖像明晰.A：p53SAB100;B:BaxSAB100;:FasSAB100;D:Bl2SAB200.圖1肺癌組織基因表達(dá)表1肺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和病理分期與Fas，Bl2，Bax，p53表達(dá)的關(guān)系本組p53，F(xiàn)as，Bax,Bl2蛋白各自

11、在各種肺癌中均有不同程度的表達(dá)，提示了肺癌的發(fā)生涉及多基因的激活和失活.p53過(guò)度表達(dá)與鱗癌、腺癌和小細(xì)胞癌的分化程度有關(guān)，分化越差，陽(yáng)性率越高，與國(guó)內(nèi)外報(bào)道一致3-5.NSL(9/43)中Bl2蛋白陽(yáng)性過(guò)度表達(dá)率遠(yuǎn)較SL(10/14)低，這可能與它們不同的生物學(xué)屬性有關(guān)此外，Bl2表達(dá)與肺癌的組織分化程度有關(guān)，隨著分化程度的進(jìn)步，過(guò)度表達(dá)率增高(P0.05),這與分化程度低者多伴有壞死等有關(guān).Fas過(guò)度表達(dá)在肺鱗癌中較高9/22(43%)，顯著高于肺腺癌和小細(xì)胞癌，提示Fas系統(tǒng)在鱗癌和其他肺癌的發(fā)生中可能起著不同的作用，F(xiàn)as系統(tǒng)可能是介導(dǎo)鱗癌細(xì)胞凋亡的主要途徑.Bax蛋白的過(guò)度表達(dá)在各種

12、肺癌組織中無(wú)明顯差異.目前認(rèn)為肺腫瘤的發(fā)生是正常細(xì)胞多重?fù)p傷的復(fù)雜過(guò)程，且往往形成兩種或兩種以上腫瘤基因激活的結(jié)果.我們的實(shí)驗(yàn)大多數(shù)病例有一種以上蛋白表達(dá)，含有兩種以上蛋白表達(dá)病例數(shù)為38例.p53與Bl2表達(dá)在肺癌分化程度中呈負(fù)相關(guān).肺癌分化程度越低，p53過(guò)度表達(dá)率越高，而B(niǎo)l2過(guò)度表達(dá)率越低；肺癌的分化程度越高，p53蛋白過(guò)度表達(dá)率越低而B(niǎo)l2過(guò)度表達(dá)率越高，說(shuō)明肺癌細(xì)胞凋亡調(diào)控是通過(guò)p53基因突變而對(duì)Bl2蛋白產(chǎn)生負(fù)調(diào)節(jié)所致.隨著腫瘤分子生物學(xué)的開(kāi)展，通過(guò)檢測(cè)腫瘤中的癌基因的表達(dá)來(lái)診斷及判斷預(yù)后的方法也逐漸被人們所認(rèn)識(shí)，這也為進(jìn)展肺癌的凋亡研究提供理論根據(jù).【參考文獻(xiàn)】1孟宇宏，李維華.肺和胸膜腫瘤的組織學(xué)分類(lèi)J.診斷病理學(xué)雜志，2000,72:156-157.2王文勇，李玉松，趙一嶺，等.SP，AB，SAB和EnVisin法敏感性的比擬J.第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2022，257：封2.3孫燕妮，李強(qiáng)，劉忠令，等.野生型p53基因轉(zhuǎn)染對(duì)人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549VEGF表達(dá)和腫瘤生長(zhǎng)的影響J.第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2022，2515：1389-1393.4紀(jì)