腫瘤壞死因子

1、腫瘤壞死因子孫嗣國，馬保安，周勇，范清宇【關(guān)鍵詞】,腫瘤壞死因子stelastfratinandbneresrptininduedbyturnersisfatr【Abstrat】AI:Tinvestigatehetherturnersisfatr(TNF)aninduestelastfratinfrperipheralbldnnulearells(PBs)independentfreeptrativatrfnulearfatrkappaBligand(RANKL).ETHDS:PBsereulturedinthepresenefarphagelnystiulatingfatrSFandTNFi

2、nvitr.RANKLblkingagentRANK:FandneutralizingantiTNFantibdyererespetivelyaddedttheulture.Attheendftheulture,PBsulturednverslipserefixedandstainedfrtartrateresistantaidphsphatase(TRAP),aarkerfstelast.Launaresrptinndentineslies,afuntinalarkerfstelast,asalsbservedusingsanningeletrnirspyandlightirspy.RESU

3、LTS:TNFinduedthefratinfultinuleatedells(Ns)hihereTRAPpsitiveandshedevideneflaunaresrptinpitfratinndentineslies.RANK:FdidntinhibitthispresshileneutralizingantiTNFantibdypletelyblkedbththefratinfNsandlaunaresrptin.NLUSIN:InthepresenefSF,TNFandiretlyinduennulearphagytestelastpreursrstdifferentiateintst

4、elastiellsapableflaunaresrptin.【Keyrds】TNF;stelast;bneresrptin【摘要】目的：驗證腫瘤壞死因子TNF是否可以直接誘外周血單核細(xì)胞PBs分化為具有骨汲取作用的破骨細(xì)胞.要領(lǐng)：小白鼠PBs體外造就中參加TNF和白細(xì)胞介素1IL1及巨噬細(xì)胞克隆集落刺激因子SF；同時，別離參加細(xì)胞核因子B受體活化因子配體(RANKL)的拮抗劑RANK:F和抗TNF中和抗體.對造就終末細(xì)胞作構(gòu)造化學(xué)染色，檢測破骨細(xì)胞特性性標(biāo)記物抗酒石酸磷酸酶TRAP的表達(dá)；并以象牙磨片上蟲蝕樣骨汲取陷窩的形成為指標(biāo)檢測其生物學(xué)活性.效果：PBs體外造就形成大量TRAP陽性的多

5、核細(xì)胞Ns；象牙磨片上見到蟲蝕樣骨汲取陷窩，后者的面積對TNF呈劑量依靠性.RANK:F對此征象無按捺作用，而抗TNF中和抗體可完全阻斷該征象的產(chǎn)生.結(jié)論：TNF可以或許直接誘導(dǎo)PBs分化為具有骨汲取成效的破骨細(xì)胞.【關(guān)鍵詞】腫瘤壞死因子；破骨細(xì)胞；骨汲取0弁言破骨細(xì)胞是由單核巨噬體系的破骨細(xì)胞前體細(xì)胞分化而來的多核細(xì)胞(Ns).多種炎性及非炎性的骨與樞紐的病變，如骨質(zhì)疏松、風(fēng)濕性樞紐炎、無菌性松動等都與破骨細(xì)胞代謝非常有關(guān).比年來的研究表白腫瘤壞死因子(TNF)通過多種方法到場破骨細(xì)胞的分化及生物學(xué)活性的調(diào)控1,2.在本實行中，我們將小白鼠外周血單核細(xì)胞(peripheralbldnnule

6、arells,PBs)及RA246.7細(xì)胞體外造就，并參加TNF及其他因子，驗證TNF是否可以直接誘導(dǎo)破骨細(xì)胞前體細(xì)胞分化為具有骨汲取活性的破骨細(xì)胞.1質(zhì)料和要領(lǐng)1.1質(zhì)料1.2要領(lǐng)TRAP染色：玻璃蓋玻片于氣氛中晾干并用檸檬酸/丙酮結(jié)實細(xì)胞，根據(jù)試劑盒說明書作構(gòu)造化學(xué)染色檢測破骨細(xì)胞標(biāo)記物TRAP的表達(dá).甲苯胺藍(lán)染色及電鏡掃描(SE)：象牙磨片浸泡于NH4H(1l/L)30in、超聲波處置懲罰去除黏附的細(xì)胞及碎片后，蒸餾水潤洗并于氣氛中晾干.甲苯胺藍(lán)染色后，光學(xué)顯微鏡下檢測蟲蝕樣骨汲取陷窩的形成，并盤算蟲蝕樣骨汲取陷窩面積占象牙磨片總面子積的百分比.別的有一部門象牙磨片用梯度乙醇脫水、氣氛晾

7、干并覆以金粉涂層后做電鏡PhilipsSE505掃描.2效果3討論破骨細(xì)胞的成效和活性在骨代謝調(diào)治中起側(cè)重作用,TRAP陽性和骨汲取作用為其特性性標(biāo)記.破骨細(xì)胞的形成依靠于破骨細(xì)胞前體細(xì)胞外貌的RANK與其配體(RANKL)之間的彼此作用；同時SF的存在也是破骨細(xì)胞分化及存活的需要條件3.骨庇護(hù)素PG是RANKL的餌受體，通過與RANK競爭結(jié)合RANKL從而按捺RANKL誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞分化及骨汲取作用.很多細(xì)胞因子通過調(diào)治RANKL與PG之間的平衡來影響破骨細(xì)胞的溶骨作用4.比來Kd等5報道炎性細(xì)胞因子白細(xì)胞介素6IL6和IL11可以或許直接誘導(dǎo)破骨細(xì)胞分化而不依靠于RANKL/RANK作用機

8、制.TNF是一種非常緊張的炎性因子，它具有多種生物學(xué)成效，包羅調(diào)治炎性反響、免疫應(yīng)答、調(diào)亡和抗病毒反響等.在骨骼體系中，TNF可以或許按捺細(xì)胞外基質(zhì)沉積并刺激基質(zhì)金屬卵白酶的合成1、而且它還可以促進(jìn)溶骨性細(xì)胞因子如SF和RANKL的表達(dá)2.Kbayashi等6和Kud等7先后報道了TNF體外直接誘導(dǎo)老鼠和人的破骨細(xì)胞分化成為具有骨汲取活性的破骨細(xì)胞，而且IL1可以或許顯著加強這種破骨細(xì)胞的活性.然而La等8那么以為TNF單獨不克不及夠誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞分化，只能在最低容許濃度RANKL存在的條件下才氣誘導(dǎo)破骨細(xì)胞形成.我們的效果與Kabayashi和Kud研究小組的效果同等，表現(xiàn)TNF可以或許直接

9、誘導(dǎo)小鼠PBs中破骨細(xì)胞前體細(xì)胞分化為具有骨汲取活性的成熟的破骨細(xì)胞.原始細(xì)胞造就24h未見TRAP陽性細(xì)胞，象牙磨片上也未見骨汲取陷窩形成，表白原始造就細(xì)胞中不含有破骨細(xì)胞.顛末914d造就后，TNF誘導(dǎo)PBs分化為TRAP陽性的具有骨汲取活性的Ns.而且，象牙磨片上蟲蝕樣骨汲取陷窩的面積隨TNF的劑量增長而增大，提示破骨細(xì)胞的活性對TNF表示出劑量依靠性.抗TNF中和抗體可以或許阻斷這一歷程，而RANKL阻斷劑RANK:F對這一歷程無明顯影響，表白這種作用是由TNF介導(dǎo)而不依靠于RANKL/RANK作用機制的.TNF誘導(dǎo)形成的破骨細(xì)胞與RANKL誘導(dǎo)形成的破骨細(xì)胞差異；前者的體積小而且所含

10、細(xì)胞核的數(shù)目少.這種相對較小的TRAP陽性的多核細(xì)胞和單核細(xì)胞與gp130細(xì)胞因子如IL6誘導(dǎo)形成的細(xì)胞相似5.itten等9曾在斑馬魚模子中不雅察到單個核破骨細(xì)胞可以形成小而淺的蟲蝕樣汲取陷窩.Quinn等10也報道過在研究破骨細(xì)胞體外模子時見到TRAP陽性的單核細(xì)胞，但其性子尚不明晰.我們在實行中也不雅察到TRAP陽性的單核細(xì)胞，筆者以為它們是處于馬上交融狀態(tài)的破骨細(xì)胞前體細(xì)胞；但是這種細(xì)胞是否具有骨汲取活性還不明晰，必要作進(jìn)一步的研究.在多種病理條件下，如風(fēng)濕性樞紐炎和人工樞紐置換術(shù)后無菌性松動，局部構(gòu)造中TNF程度都有所升高，作為一種炎性分子，TNF通過多種途徑到場骨代謝歷程.我們的實

11、行效果進(jìn)一步證實，TNF可以直接誘導(dǎo)破骨細(xì)胞分化并刺激其活性從而在骨代謝中發(fā)揮緊張作用.因此針對TNF的治療大概成為防范和治療這些疾病的有用方法.【參考文獻(xiàn)】1SiikDA,hangDL,luiS.Interliukin1andturnersisfatrdereasellagensynthesisandinreaseatrixetallprtEinaseativityinardiafibrblastsinvitrJ.irRes,2000;86(12):1259-1265.2KubtaA,HasegaaK,SugurT,etal.Turnersisfatralphaprtestheexpress

12、infsteprtegerininrheuatidsynvialfibrblastsJ.JRheuatl,2022;31(3):426-435.3BlairH,AthanasuNA.ReentadvanesinstelastbilgyandpathlgialbneresrptinJ.HistlHistpathl,2022;19(1):189-199.4HfbauerL,HikK,henD,etal.RegulatinfsteprtegerinprdutinbyandrgensandantiandrgensinhuansteblastilineageellsJ.EurJEndrinl,2002;

13、147(2):269-273.5Kd,SabkbarA,ItnagaI,etal.Interleukin6andinterleukin11supprthuanstelastfratinbyaRANKLindependentehanisJ.Bne,2022;32(1):1-7.6KbayashiK,TakahashiN,JiiE,etal.TurnersisfatrsalphastiulatesstelastdifferentiatinbyaehanisindependentftheDF/RANKLRANKinteratinJ.JExped,2000;191(2):275-286.7Kud,FujikaaY,ItnagaI,etal.Prinflaatryytkine(TNF/IL1)indutinfhuanstelastfratinJ.JPathl,2002;198(2):220-227.8LaJ,TakeshitaS,BarkerJE,etal.TNFinduesstelastgenesisbydiretstiulatinfarphagesexpsedtperissivelevelsfRANKligandJ.JlinInves,2000;106(12):1481-1488.9ittenPE,HansenA,HallBK.Featuresfnandultinuleatedbne