3.微生物計數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查驗證方案

1、.概述:培養(yǎng)基是微生物試驗的基礎(chǔ)，直接影響微生物試驗結(jié)果。適宜的培養(yǎng)基制備方法、貯藏條件和質(zhì)量控制是提供優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基的保證。供試品微生物限度檢查中所使用的培養(yǎng)基應(yīng)進行適用性檢查。.驗證目的：本次驗證的目的是確認需氧菌總數(shù)、霉菌及酵母菌總數(shù)檢查用的胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基、胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基的質(zhì)量，以及其制備程序、保存條件等是否滿足微生物限度檢查用要求。.驗證依據(jù)：中國藥典2015年版四部“非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計數(shù)法”、“9203藥品微生物實驗室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則”。.驗證項目：胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基、胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基的適用性檢查。.適用范圍：

2、成品培養(yǎng)基、由脫水培養(yǎng)基或按處方配制的培養(yǎng)基均應(yīng)進行培養(yǎng)基適用性檢查。.驗證周期：除另有規(guī)定外，在實驗室中，若采用已驗證的配制和滅菌程序制備培養(yǎng)基且過程受控，那么同一批脫水培養(yǎng)基的適用性檢查試驗可以只進行一次。如果培養(yǎng)基的制備過程未經(jīng)驗證，那么每一滅菌批培養(yǎng)基均要進行適用性檢查試驗。.驗證小組人員及職責：小組人姓名簽字所在部門職務(wù)員職務(wù)7.3.1.47.3.1.4負責驗證資料及結(jié)果的審核工作。質(zhì)量部質(zhì)量控制實驗室質(zhì)量控制實驗室質(zhì)量總監(jiān)QC主任微生物QC驗證小組人員:驗證人員職責及要求按驗證方案及相關(guān)文件實施驗證。認真觀察并做好驗證原始記錄。對實施驗證的結(jié)果負責。驗證中各部門的職責驗證領(lǐng)導(dǎo)組職責

3、制訂驗證總計劃，負責全公司驗證工作的管理。確定驗證項目及驗證項目負責人。負責驗證方案的批準工作。7.3.1.57.3.1.5負責驗證報告的批準工作。7.3.3.6負責對驗證人員的培訓、考核工作。7.3.3.6負責對驗證人員的培訓、考核工作。驗證項目小組職責負責驗證方案的起草工作。參與驗證方案的討論、確認工作。.2.3負責驗證方案的實施。7.3.2.4負責驗證結(jié)果的分析、統(tǒng)計、報告工作。7.3.2.5參與驗證結(jié)果的評價工作。7.3.3質(zhì)量部職責7.3.3.1負責公司驗證日常管理工作。7.3.3.2負責驗證方案的審核工作。7.3.3.3負責驗證過程中儀器、儀表、計量器具的校驗工作。7.3.3.4負

4、責檢驗儀器及檢驗方法的驗證。7.3.3.5負責驗證中各項檢測工作，提供驗證的檢驗記錄、檢驗報告，對驗證過程中的各項檢驗工作負責。7.3.3.7負責驗證資料和報告的審核工作。7.3.3.7負責驗證資料和報告的審核工作。.3.8負責驗證文件回收、歸檔管理工作。8.合格標準：8.1被檢固體培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)與對照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的比值應(yīng)在0.5-2范圍內(nèi)，且菌落形態(tài)大小應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致；被檢液體培養(yǎng)基管與對照培養(yǎng)基管比較，試驗菌應(yīng)生長良好。9.驗證實施條件驗證方案培訓：在驗證實施前，應(yīng)對參與驗證的人員進行驗證方案以及與驗證相關(guān)的文件進行培訓，確保相關(guān)人員掌握了驗證的相關(guān)要求與知識。微

5、生物限度檢測室：檢驗所使用的檢測室應(yīng)經(jīng)過要求。檢驗用水：驗證過程使用的純化水其制備系統(tǒng)應(yīng)經(jīng)過確認并符合要求，純化水質(zhì)量應(yīng)經(jīng)過檢驗并符合中國藥典2015年版二部的要求。檢驗儀器設(shè)備：驗證涉及的檢驗儀器（設(shè)備）與檢驗方法，應(yīng)經(jīng)過技術(shù)監(jiān)督局校驗合格或者公司確認/驗證合格。驗證菌種：驗證所使用的菌種，其種類與傳代次數(shù)應(yīng)符合中國藥典的2:菌種確認。相關(guān)要求。菌種情況見附件2:菌種確認。10.驗證過程菌液制備取經(jīng)30-35培養(yǎng)18-24h的銅口假單胞菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物1ml加入9ml0.9%無菌氯化鈉溶液中，10倍遞增稀釋至10-6-10-8,約為D100cfu/ml的菌懸液備用

6、。取經(jīng)20-25培養(yǎng)2-3天的白色念珠菌、黑曲霉的液體培養(yǎng)物1ml,加入9m10.9%無菌氯化鈉溶液中，10倍遞增稀釋至10-5-10-8,約為1100cfu/ml的菌懸液備用。實驗操作胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基：取11個無菌平皿，分別接種上述銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各2皿，每皿接種1ml菌液（接種量口100cfu）,另1口皿不接種菌作為空白對照，傾注對照胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，混口，口固后于30口35口倒置培養(yǎng)，培養(yǎng)時間不超過3天（白色念珠菌、黑曲霉培養(yǎng)時間不超過5天），計數(shù)；被檢培養(yǎng)基同法操作?？诶掖蠖闺艘后w培養(yǎng)基：新鮮配制10ml/支的對照胰酪大豆胨液體培養(yǎng)

7、基7支,1211滅菌15min,備用。取6支，分別接種上述銅口假單胞菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌各2支，每支接種1ml菌液（接種量口100cfu），另1支不接種菌作為空白對照；被檢培養(yǎng)基同法操作。置30口35口培養(yǎng)，培養(yǎng)時間不超過3天,分別觀察結(jié)果。沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基：取5個無菌平皿,分別接種上述白色念珠菌、黑曲霉各2皿，每皿接種1ml菌液（接種量口100cfu）,另1口皿不接種菌作為空白對照，傾注對照沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，混口，凝固后于20口25口倒置培養(yǎng)培養(yǎng)，培養(yǎng)時間不超過5天，計數(shù)；被檢培養(yǎng)基同法操作。13.6附件6:驗證結(jié)果審批表13.6附件6:驗證結(jié)果審批表10.3.10.3.

8、檢查結(jié)果：見附件5：計數(shù)用培養(yǎng)基適用性檢查結(jié)果13.5附件5:計數(shù)用培養(yǎng)基適用性檢查結(jié)果13.5附件5:計數(shù)用培養(yǎng)基適用性檢查結(jié)果.異常情況與偏差處理：當出現(xiàn)偏差時，應(yīng)按偏差處理管理規(guī)程進行處理。.驗證結(jié)果評定、結(jié)論與建議驗證小組組長負責收集各項驗證、試驗記錄，根據(jù)驗證、試驗結(jié)果對驗證效果進行綜合評審，起草驗證報告、做出驗證結(jié)論。對驗證結(jié)果的評審應(yīng)包括以下內(nèi)容：驗證試驗是否有遺漏？驗證實施過程中對驗證方案有無修改？修改原因、依據(jù)以及是否經(jīng)過批準？驗證記錄是否完整？驗證試驗結(jié)果是否符合標準要求？偏差及對偏差的說明是否合理？是否需要進一步補充試驗？.附件附件1:驗證實施條件確認附件2:培養(yǎng)基確認附

9、件3:菌種確認附件4:菌液濃度確定附件1：設(shè)施設(shè)備驗證確認驗證報告編驗證結(jié)果設(shè)施設(shè)備名稱驗證結(jié)果號實驗室HVAC系統(tǒng)純化水系統(tǒng)LDZX-40A型立式自控電熱壓力蒸汽滅菌器PSH-500A型生化培養(yǎng)箱303As-2型電熱恒溫隔水式培養(yǎng)箱SW-CJ-1C型雙人凈化工作臺確認結(jié)論：確認人：確認日期：附件2：培養(yǎng)基確認培養(yǎng)基名稱來源批號有效期至培養(yǎng)基名稱來源批號有效期至皿皿2胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基胰酪大豆胨瓊脂對照培養(yǎng)基胰酪大豆胨液體對照培養(yǎng)基沙氏葡萄糖瓊脂對照培養(yǎng)基確認結(jié)論：確認人：確認日期：附件3：菌種確認培養(yǎng)基名稱來源批號枯草芽孢桿菌CMCC(B63501銅

10、綠假單胞菌CMCC(B10104金黃色葡萄球菌CMCC(B26003白色念珠菌CMCC(F白色念珠菌CMCC(F98001黑曲霉CMCC(F98003確認結(jié)論：確認人：確認日期：附件4：菌液濃度確定10-310-410-510-610-7in山in山1n山1n山1n山TOC o 1-5 h z銅綠假單胞菌皿1皿2金黃色葡萄球菌皿1皿2大腸埃希菌皿1皿2枯草芽孢桿菌皿1皿2白色念珠菌皿1附件附件5：計數(shù)用培養(yǎng)基適用性檢查結(jié)果白色念珠菌（沙氏）皿1皿2黑曲霉皿1皿2黑曲霉（沙氏）皿1皿2結(jié)論：根據(jù)要求，菌數(shù)要控制在每1ml中含菌數(shù)在lOOCfU,因此，我們確定菌液制備：銅綠假單胞菌：稀釋金黃色葡萄

11、球菌:稀釋大腸埃希菌：稀釋枯草芽孢桿菌:稀釋白色念珠菌（胰酪）:稀釋白色念珠菌（沙氏）:稀釋黑曲霉（胰酪）：稀釋黑曲霉（沙氏）：稀釋檢驗人檢驗時間年月日-年月日復(fù)核人復(fù)核年月時間日11培養(yǎng)基驗證菌株皿號被檢培養(yǎng)基對照培養(yǎng)cfu/ml基cfu/ml比值菌落形態(tài)0.5-2大小生情況長胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基(30D35,D3天)銅綠假單胞菌*白色念珠菌、黑曲霉15天平均金黃色葡萄球平均枯草芽孢桿菌平均白色念珠菌白色念珠菌白色念珠菌1平均黑曲霉平均空白銅綠胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基銅綠(30D35,D3天)假單胞菌金黃色葡萄球枯草芽孢桿菌空白沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(23D28,72h)2平均黑曲霉12平均空白1檢驗時檢驗人間年月日-年月日復(fù)核時復(fù)核人間年月日表6: