線性范圍試驗

1、實驗5線性范圍試驗在光譜分析中，測定該實驗條件下被測物質(zhì)符合Beer定律的濃度范圍（線性范圍），是 評價分析方法準(zhǔn)確性和實用性的重要工作。通過線性范圍測定，選擇線性段作為該方法的分 析范圍，直線上任何一點的待測物濃度與吸光度的比值均為一常數(shù)，其斜率tan。都相等， 即tan 9 =此處的值稱為校正常數(shù)，可用于計算測定結(jié)果。這樣，可使具有臨床意義的標(biāo)本測定值都限定在此范圍內(nèi)，以保證測定結(jié)果的可靠。線性誤差表現(xiàn)為溶液的濃度與吸光度不成線性關(guān)系，出現(xiàn)正偏離或負(fù)偏離的現(xiàn)象。這 種偏離，按Beer定律現(xiàn)象來自兩個方面：一是溶液本身不符合Beer定律，這種現(xiàn)象叫做化 學(xué)偏離；二是儀器本身各種因素的影響，使

2、吸光度與濃度之間不成線性，這種現(xiàn)象叫儀器偏 離，如雜光、有限帶寬、檢測器噪聲、環(huán)境條件的變化、波長的變動、比色杯的誤差、輻射 光的非平行性、檢測器本身的非線性等。因此，在做方法學(xué)線性范圍評價實驗時，良好的儀 器性能是必須的?！驹怼?使用不同濃度的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，用GOD-POD法試劑測定各自的吸光度， 以標(biāo)準(zhǔn)濃度為橫坐標(biāo)，以其對應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，在方格紙上作圖，即可繪制出一條直線， 即劑量反應(yīng)曲線(dose-respones curve)。一般測定方法的線性范圍要求能覆蓋臨床上的參考值 和常見疾病的醫(yī)學(xué)決定水平，以減少標(biāo)本稀釋重測的機(jī)會?！驹噭?0mmol/L葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液稱取已干燥恒重

3、的無水葡萄糖0.7208g，溶于12mmol/L苯甲酸溶液約70ml中，以12mmol/L苯甲酸溶液定容至100ml。2h后方可應(yīng)用。其它試劑 同GOD-POD法試劑?！静僮鞑襟E】按表2-1操作表2-1血糖與GOD-POD試劑劑量反應(yīng)曲線的制作加入物標(biāo)準(zhǔn)管012345葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液()0246810蒸餾水 l)1086420GOD-POD 試劑(ml)1.51.51.51.51.51.5下同GOD-POD法，讀取各管吸光度。以葡萄糖濃度(mmol/L)為橫坐標(biāo)，以對應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，將其交點在方格紙上標(biāo)出， 即可獲得血糖與GOD-POD試劑的劑量反應(yīng)曲線。【注意事項】葡葡糖標(biāo)準(zhǔn)液的加量必須十分

4、準(zhǔn)確，應(yīng)用計量性能準(zhǔn)確度很高的微量進(jìn)樣器加樣。標(biāo)準(zhǔn)管系列中每管平行作3管取平均值。本方法的線性可達(dá)22.24mmol/L，造成線性變窄的原因為試劑配制中組分投料不足； 試劑配制后組分穩(wěn)定性差；因運輸、貯存不當(dāng)?shù)葘?dǎo)致試劑組分的含量發(fā)生變化。有的測定特別是酶法測定，當(dāng)酶量相對不足時，用標(biāo)準(zhǔn)液所作的線性范圍可以達(dá)到 指定的高限，但在測定同樣高值樣品時，結(jié)果卻明顯偏低，這往往是樣品中的介質(zhì)效應(yīng)引起 的，值得注意?！揪€性范圍的確定及其評價】測定上限測定上限應(yīng)使95%的臨床標(biāo)本不經(jīng)稀釋即可進(jìn)行測定，具體數(shù)值必須通 過線性范圍試驗加以確定，因為檢測上限是不可超越的界限，當(dāng)測定值高于上限臨界值時， 應(yīng)減少標(biāo)本

5、用量或?qū)?biāo)本稀釋后重新測定。測定下限測定下限實測多少就報告多少，如未經(jīng)驗證，隨意延長測定下限的做法 是不正確的。對測定范圍線性的評價通過制作劑量反應(yīng)曲線的實驗可以確定某種測定方法的吸 光度一濃度線性范圍，就能為制作實際工作中使用的校正曲線打下堅實的基礎(chǔ)。隨后要對其 線性擬合的良好程度和實用性進(jìn)行實際檢查與評價。對線性范圍內(nèi)的濃度與對應(yīng)吸光度值作直線回歸分析，求出此直線的截距a和斜率 b，建立直線回歸方程y=a+bx；并作相關(guān)分析，求出相關(guān)系數(shù)(r)。值得強(qiáng)調(diào)的是校正曲線是 一條直線，回歸一相關(guān)分析只是一種數(shù)據(jù)評價手段，不能代替在基本操作上下功夫。線性回歸方程擬合程度的檢驗：所繪制的回歸直線能否代表原資料各觀測點的趨 勢，即各觀測點與回歸直線的差異是否只是來自隨機(jī)抽樣誤差而無真正的差別，通過線性回 歸方程擬合度檢驗，即可作出判斷。方法仍然是用變異分析，看剩余平方和的大小，如剩余)的比值越小，說明Y的實際觀測值與Y的估計值（）越接近，曲線擬合越好。這種擬合度，可用相關(guān)指數(shù)（）來表示。越接近于1.0，表明擬合度越高。這里要注意的是必須由配得