龍眼參黃酮抗心肌缺血再灌注引起的脂質(zhì)過氧化損傷的研究

1、龍眼參黃酮抗心肌缺血再灌注引起的脂質(zhì)過氧化損傷的研究張緒東，蔣偉哲，焦陽，黃仁彬【摘要】目的探究龍眼參黃酮Lngyanshenflavnids,LF對(duì)大鼠心肌缺血再灌注(yardialisheiareperfusin,IR)引起的脂質(zhì)過氧化損傷的影響。要領(lǐng)60只康健SD大鼠，隨機(jī)分為假手術(shù)(Sha)組、缺血再灌注(IR)組、生理鹽水(nralsaline,NS)組和3個(gè)預(yù)處置懲罰組(LF低劑量組、LF中劑量組、LF高劑量組)，各組大鼠雌、雄各半。結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前落支30in后，再灌注60in，創(chuàng)立IR模子。用差異劑量LF在結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前落支前30in別離做預(yù)處置懲罰。再灌注竣事后采血，測(cè)定血

2、漿中谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、肌酸激酶(K)、肌酸激酶同工酶B(K-B)、超氧化物岐化酶(SD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(DA)的改變，丈量心肌堵塞范疇。效果與IR組比力，LF預(yù)處置懲罰能顯著低落血漿中AST，K，K-B和DA含量，能進(jìn)步SD，GSH-Px活性，低落心肌堵塞范疇。結(jié)論LF對(duì)大鼠IR引起的脂質(zhì)過氧化損傷具有明顯的庇護(hù)作用?！娟P(guān)鍵詞】龍眼參；黃酮；心肌缺血再灌注;脂質(zhì)過氧化損傷Keyrds:Lngyanshen;Flavnids;yardialisheiareperfusin;Lipidperxidatininjury龍眼參Lngyanshen，LYS原植物經(jīng)考據(jù)為

3、蝶形花科植物疏葉崖豆illettiapulhraKurzvar-laxir(Dunn)Z.Ei的塊根，是廣西民間普及應(yīng)用的壯藥。本課題組對(duì)龍眼參舉行了大量的研究事情，創(chuàng)造龍眼參水提取物具有減輕心肌缺血再灌注性損傷、抗羥自由基和氧自由基等1，2作用，而龍眼參提取物龍眼參總黃酮是否具有抗心肌缺血再灌注引起的脂質(zhì)過氧化損傷作用未見報(bào)道?，F(xiàn)將其抗心肌缺血再灌注引起的脂質(zhì)過氧化損傷作用及大概的作用機(jī)制報(bào)道如下。1東西與要領(lǐng)1.1動(dòng)物60只康健SD大鼠，廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)行動(dòng)物中央提供，體重(23020)g，牝牡各半。1.2試劑與儀器龍眼參黃酮,廣西醫(yī)科大學(xué)藥理教研室自行提取制備。伊文思藍(lán)(Evanblue)

4、和氯化三苯基四氮唑(triphenyltetrazliuhlride,TT)購自Siga公司。DA，SD，GSH-Px試劑盒購自南京建成生物工程研究所。AST，K，K-B購自英國朗道RANDX公司。動(dòng)物呼吸機(jī)AL-V8，上海奧爾科特生物科技產(chǎn)物。日本日立(HITAHI)7170生化闡發(fā)儀，日本日立公司產(chǎn)物。TGL-16G-A高速冷凍離心機(jī)，上海安亨科學(xué)儀器廠產(chǎn)物。722N可見分光光度計(jì)，上海細(xì)密科學(xué)儀器。S4000U生物信號(hào)定量記載闡發(fā)體系，廣州市龍飛達(dá)科技。1.3分組與給藥要領(lǐng)將SD大鼠隨機(jī)分為6組，每組10只，牝牡各半：假手術(shù)(Sha)組；缺血再灌注(IR)組；生理鹽水(NS)組：缺血前3

5、0in經(jīng)十二指腸注射生理鹽水2lkg-1；LF低劑量組：缺血前30in經(jīng)十二指腸注射LF20gkg-1；LF中劑量組：缺血前30in經(jīng)十二指腸注射LF40gkg-1；LF高劑量組:缺血前30in經(jīng)十二指腸注射LF80gkg-1。1.4創(chuàng)立缺血再灌注模子各組大鼠以20%烏拉坦腹腔注射麻醉5l/kg體重，仰臥位結(jié)實(shí)。將銀針電極插入四肢皮下，毗連S4000U生物信號(hào)定量記載闡發(fā)體系，監(jiān)測(cè)肢體導(dǎo)聯(lián)心電圖。分散氣管并插管后立即正壓人工呼吸(呼吸頻率70次/in，潮宇量50l/kg，吸呼比12)。從左側(cè)第3，4肋間翻開胸腔。表露心臟，剪破心包膜，在肺動(dòng)脈圓錐左緣與左心耳右緣之間，平左心耳下緣2處進(jìn)針，進(jìn)針

6、深度12，寬度23,用5/0無損傷縫合線穿過心肌層，繞過冠狀動(dòng)脈左前落支，除假手術(shù)組不結(jié)扎外，別的組均結(jié)扎。30in后排除結(jié)扎，再灌注60in。以心電圖ST段舉高、T波高聳作為心肌缺血的標(biāo)記；以舉高的ST段落落，T波漸漸規(guī)復(fù)確定再灌注的樂成。再灌注竣事后，從腹自動(dòng)脈采血2l，離心04，3000r/in，離心15in，取上層血漿凍存?zhèn)溆谩?.5心肌堵塞面積丈量再灌注竣事后，將冠狀動(dòng)脈左前落支原位重新結(jié)扎，由自動(dòng)脈逆行注入0.5gL-1的伊文思藍(lán)1.5l，待心臟非缺血區(qū)充實(shí)染成藍(lán)色后，摘取心臟，用冰生理鹽水(4)將心臟洗濯干凈，剪去心底構(gòu)造、心耳及右心室，置于-80冰箱速凍5in，然后自心尖向心底

7、平行于房室溝標(biāo)的目的將左室切成11.5厚的薄片。將心臟切片置于pH7.4的10gL-1TT磷酸鹽緩沖液中，37孵育15in。冷鹽水沖洗去游離染料，10%甲醛結(jié)實(shí)。染成藍(lán)色的地區(qū)代表非缺血區(qū)，赤色地區(qū)含白色區(qū)代表缺血區(qū)，白色地區(qū)代表堵塞區(qū)。沿著差異顏色的邊沿切下差異地區(qū)并稱重，別離以心肌堵塞區(qū)重量(infarteight，I)、缺血區(qū)重量(eightfriskR)占左室重量(eightfleftventriular，LV)的百分比(I/LV)%、(R/LV)%反響心肌堵塞范疇、心肌缺血范疇。1.6血漿心肌酶測(cè)定接納日本日立(HITAHI)7170生化闡發(fā)儀檢測(cè)血漿AST，K，K-B程度。1.7血

8、漿SD，GSH-Px，DA測(cè)定按試劑盒要領(lǐng)測(cè)定SD活力，GSH-Px，DA含量。1.8統(tǒng)計(jì)學(xué)處置懲罰實(shí)行數(shù)據(jù)接納s表現(xiàn)，多組間比力接納單因素方差闡發(fā)，接納SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件闡發(fā)處置懲罰數(shù)據(jù)。2效果2.1血漿心肌酶的變革IR組血漿各心肌酶均顯著高于Sha組(P0.01)，IR組與NS組比力，無明顯性差異(P0.05)，LF中劑量組、LF高劑量組血漿各心肌酶顯著低于IR組(P0.01)。效果見表1。表1龍眼參黃酮對(duì)IR血漿心肌酶學(xué)的影響(略)2.2血漿SD，GSH-Px，DA的變革2.3心肌堵塞范疇的變革3討論正常生理環(huán)境下，細(xì)胞內(nèi)有自由基掃除劑超氧化物歧化酶(SD)使氧自由基變化為過氧化氫(H22)，后者又通過過氧化氫酶(AT)及谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)的作用復(fù)原為水和分子氧,自由基產(chǎn)生與掃除保持著動(dòng)態(tài)平衡。急性心肌缺血和復(fù)灌時(shí)，由于構(gòu)造缺氧、呼吸鏈按捺、NADH(復(fù)原型輔酶I)聚集、兒茶酚胺增多和游離脂肪酸聚集，使得膜脂質(zhì)的分子氧不克不及全部復(fù)原，經(jīng)加氧酶系產(chǎn)生大量自由基;自由基氧化膜上的不飽和脂肪酸，使脂肪