細菌的革蘭氏染色

1、細菌的革蘭氏染色一、目的： 學習細菌的革蘭氏染色法。二、原 理革蘭氏染色法：是1884年由丹麥病理學家所創(chuàng)立的。革蘭氏染色法可將所有的細菌區(qū)分為革蘭氏陽性菌（G+）和革蘭氏陰性菌（G）兩大類，該染色法所以能將細菌分為G+菌和G菌，是由這兩類菌的細胞壁結構和成分的不同所決定的。革蘭陽性菌細胞壁的化學組成肽聚糖（15-50層）細胞膜（雙層脂質(zhì) 蛋白嵌鑲）脂質(zhì)蛋白質(zhì)-1,4糖苷鍵N-乙酰葡萄糖胺N-乙酰胞壁酸四肽鏈五肽橋革蘭陰性菌細胞壁的化學組成外膜肽聚糖（1-3層）細胞膜脂質(zhì)蛋白質(zhì)脂質(zhì)雙層脂蛋白脂多糖革蘭陽性菌與革蘭陰性菌細胞壁 區(qū)別要點 革蘭陽性菌 革蘭陰性菌 肽聚糖組成 聚糖骨架、四肽側鏈、五

2、肽交聯(lián)橋 聚糖骨架、四肽側鏈 肽聚糖層數(shù) 可多達50層 僅1-2層 肽聚糖含量 占細胞壁干重50%-80% 占細胞壁干重5%-10% 強度 較堅韌，三維立體結構 較疏松，二維平面結構 磷壁酸 有 無 外膜 無 有 青霉素、溶菌酶 敏感 不敏感G+菌細胞壁較厚，肽聚糖含量較高，網(wǎng)格結構緊密，含脂量低，當被酒精脫色時，引起了細胞壁肽聚糖層網(wǎng)狀結構的孔徑縮小以至關閉，從而阻止了不溶性結晶紫-碘復合物的逸出，還是原來的顏色；G細菌的細胞壁肽聚糖層較薄，含量較少，而脂類含量高，當酒精脫色時，脂類物質(zhì)溶解，細胞壁透性增大，結晶紫-碘復合物也隨之被抽提出來，故G細菌細菌菌體呈復染液的紅色。1234？結晶紫碘

3、液酒精復紅三、實驗器材1、活材料：培養(yǎng)24小時的大腸桿菌和葡萄球菌。2、染色液和試劑：結晶紫、碘液、95%酒精、石炭酸復紅 、蒸餾水、乙醚-乙醇混合液、香柏油。3、器材：廢液缸、洗瓶、載玻片、接種杯、酒精燈、擦鏡紙、顯微鏡。 （1）涂片：取干凈載玻片一塊，在載玻片中央加一滴蒸餾水，按無菌操作法取大腸桿菌涂片，做成濃菌液，注意取菌不要太多。（2）晾干：讓涂片自然晾干或者在酒精燈火焰上方文火烘干。（3）固定：手執(zhí)玻片一端，讓菌膜朝上，通過火焰2-3次固定（以不燙手為宜）。四、實驗方法：（4）結晶紫染色：將玻片置于廢液缸玻片擱架上，加適量（以蓋滿細菌涂面）的結晶紫染色液染色1分鐘；水洗：傾去染色液，

4、用水小心地沖洗。（5）媒染：碘液，媒染1min；水洗：用水洗去碘液。（6）脫色：將玻片傾斜，連續(xù)滴加95%乙醇脫色2025s至流出液無色，立即水洗。（7）復染：滴加復紅復染3-5min；水洗：用水洗去涂片上的復紅染色液。（8）晾干：將染好的涂片用吸水紙吸干。（9）鏡檢：鏡檢時先用低倍，再用高倍，最后用油鏡觀察，并判斷菌體的革蘭氏染色反應性。 革蘭氏陰性桿菌革蘭氏陽性桿菌（10)實驗完畢后的處理：將浸過油的鏡頭按下述方法擦拭干凈，a.先用擦鏡紙將油鏡頭上的油擦去。b.用擦鏡紙沾少許乙醚-乙醇混合液（二甲苯）將鏡頭擦2-3次。c.再用干凈的擦鏡紙將鏡頭擦2-3次。注意擦鏡頭時向一個方向擦拭。將顯微鏡小心輕拿，按號放入顯微鏡柜中。 觀察后的染色玻片用廢紙將香柏油擦干凈，放入回收容器內(nèi)。五、注意事項1.革蘭氏染色成敗的關鍵是酒精脫色。如脫色過度，革蘭氏陽性菌也可被脫色而染成陰性菌；如脫色時間過短，革蘭氏陰性菌也會被染成革蘭氏陽性菌。脫色時間的長短還受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影響