EP15A2定量臨床實驗室測量步驟

1、用戶驗證精密度和正確度User Verification of Performance for Precision and Truenes)s1 范圍： 本文件適用于性能方法之前已經(jīng)被建立或者在大的范圍和長時期內(nèi)已經(jīng)被實驗方案記錄。 本文所涉及的實驗方法和統(tǒng)計方案在應用統(tǒng)計駁回聲明的力量相對薄弱，只能用來證實操作 的方法和廠家的聲明是(manufacturerclaims) 致的。本文件并不意在建立或者證實方法 的分析性能。由于這個文件對精確度和正確度的驗證很有限，所以更嚴密的 CLSI/NCCLS 方案(例如， EP6-Evaluation of the linearity of Quant

2、itative Measurement Procedures: A Statistical Approach;EP17-Protocols for determination of limits of detection and limits of quantitation; and C28-How to define reference intervals in the clinical laboratory)被用來按照用戶的需求驗證方法的性能。 CLSI/NCCLS EP5-評估定量測量方法的精確性能(Evaluation of precision Performance of Quant

3、itative Measurement Methods， EP9-對病人樣品的 方法比較和偏倚估計(Method Comparsion and Bias Estimation Using Patient Samples)用來幫助廠商來驗證一個診斷設置的 精確度和正確度的性能。CLSI/NCCLS EP10-定量臨床實驗室方法的初步評估(Preliminary Evaluation of Quantitative Clinical Laboratory Methods)意在快速的初步評價精確性，偏倚， 樣本交叉污染，漂移，和非線性。但是，這是比較復雜的，因為它基于一個多因素的設計并 且得到的數(shù)據(jù)

4、很有限。EP10只能用做初步評估分析性能。值得注意的是，EP15有一個隱含的假設：如果評估的精密性(precision)和正確性(trueness) 是可接受的,那么這個方法的整體的誤差(例如,全部分析誤差) 就是可接受的. 這種隱含的模 型會導致當其他因素對實驗有很重要的影響時，低估全部分析誤差(total analytical error). 除了要執(zhí)行更大規(guī)模的評估，應該考慮執(zhí)行CLSI/NCCLS草案EP-21-臨床實驗室評價總分 析誤差的方法(Estimation of the total Analytical Error for Clinical Laboratory Method

5、s.這個方 案是直接估計總分析誤差(total analytical error)并且不依賴于模型。2 介紹： 本指南是為了幫助實驗室驗證一個已經(jīng)建立好的測量步驟。它假定這個步驟應經(jīng)被制造商檢 查過，并且功能是正確的。本指南提供了一個與制造商的要求一致，來驗證一個特定的測量 過程的最小化的實施方案。實驗室必須按照指南中提及的的方案的目標步驟進行測量。本指南還可運用于在外部質(zhì)量評估中，當水平測試(proficiency testing)的糾錯失敗后，演示 接受性能(acceptable performance).與本文件相關的特性為重復性(repeatability,)實驗室間的精確性(with

6、in-laboratory), 相對于可接受的標準值正確度(trueness)(從測量的偏倚中估算出)。按照此指南的建議 成功的完成這項方案，實驗室需要驗證按照制造商對精確性和準確性的要求的方法。本文件可使用戶決定實驗室實際的性能和方法的預期性能的吻合度。如果實驗室性能與預期 性能不一致，補救措施需要執(zhí)行。在這個方案中，假設實驗室可以正確的操作程序。3.標準預防措施 由于經(jīng)常不可能知道哪一個樣本時有可能傳染的，所有病人和實驗樣本被認作是可以傳染 性的并且按照“標準預防措施”處理。標準預防措施是結(jié)合“普遍預防措施和身體物質(zhì)隔離” 重要特征的實踐的一項指導方針。標準預防措施涵蓋了所有傳染性物質(zhì)，因

7、此比起普遍的預 防措施更為廣泛，因為普遍預防措施只能夠應用在血源性病原體中。標準和普遍預防措施可 從美國疾病控制和預防中心得到。4定義：分析物-代表組成的一個可衡量的數(shù)量名稱。注 1：包括元素，離子，化合物，因素，傳染 性病原體，細胞，組織，活性(酶，激素，或免疫球蛋白)，或者性能，緊度，或者其他可 被測量的特性；注 2：例如，在 24 小時尿液中的蛋白質(zhì)，其中“蛋白質(zhì)”為分析物。在血 漿中的葡萄糖的量，“葡萄糖”為分析物。在這兩種情況下，長詞組表示被測物(measurand)；注3在血清中乳酸脫氫酶同工酶1 (lactate dehydrogenase isoenzyme 1)的催化濃度，l

8、actate dehydrogenase isoenzyme 1為分析物。長詞組被指定為倍 測量物( measurand)。偏倚-期望的檢測值與可接受的參考值之間的差值。被測物-受測量的特定的數(shù)量。注 1：舉個例子，在 37 度下堿性磷酸酶的活性；注 2：特殊 的被測物可能需要聲明時間，溫度，壓力等。注3：在上一個例子中，被測物不僅僅包含實 體的測量(堿性磷酸酶)，還包括特定的質(zhì)量測量(酶活性)，并且在特定的環(huán)境測量( 37 度)。測量步驟-明確的描述用特定的方法的專門測量的操作設置。注1：這個詞涉及到具體程序， 由特定廠商銷售。注2：在其他的文件和EP15-A中，相等的術(shù)語是方法，裝置，化驗

9、。 測量區(qū)間-在一定的范圍內(nèi)設置由測量工具的錯誤造成被測物的值。注1：“錯誤”在有關的 常規(guī)真值決定。注2：區(qū)間值已達到方法可接受標準；這就是說，當非線性，不精確性，或 其他因素導致的錯誤在定義的限制中。注3：以往的術(shù)語可報告的范圍用在本文件中，另一 個慣用的是分析物測量范圍。測量方法-用來測量的邏輯的操作和廣義的描述。注1：一個測量的方法，由于廣義的描述， 并沒有數(shù)值指定特性。一個給定的方法可基于一個或多個測量步驟，對每一個特性都有固有 的數(shù)值。注2：之前，術(shù)語方法用在EP15中。對等組(Peer group)-在熟練的測設中，一組推測的相同的測試系統(tǒng)。 精確度(precision):在規(guī)定

10、的條件下獨立的測試結(jié)果的親密度的統(tǒng)一性。 注：精確度在表示定量是用非精確性(imprecision)表示-在一個復制的測量中得到的標準 差或變異系數(shù)的結(jié)果。重復性：在相同測量條件下，連續(xù)測量相同被測物的緊密度的統(tǒng)一性。注：之前，術(shù)語批次 間精確度用在 EP15.重復條件：在一段很短的時間內(nèi)，用相同的方法在相同的測量材料上，相同的實驗室，相同 的操作者用相同的儀器得出獨立的實驗結(jié)果的條件。RUN-在一段時間內(nèi)，一個測試系統(tǒng)的正確性和精確性達到預期的穩(wěn)定，但是不要超過24 小時。注1：在ISO 3534-1中，RUN被定義為：在一系列對質(zhì)的特性的觀察中，相同屬性 在不間斷系列中連續(xù)出現(xiàn)被稱為一個R

11、UN.注2：在分析間，可能會出現(xiàn)導致測量過程易變 異的事件是很重要的?？傉`差：任何可定義的誤差可以影響分析結(jié)果的正確性的總和。注：本文件定義總誤差為偏 倚和不精密性的總和。真值：從一系列大的測試結(jié)果得出的在平均值和一個可接受的參考值親密度的統(tǒng)一性。注： 對真值的測量通常用偏倚表示。 實驗室間的精密性-在一個定義的時間和操作中的精密性，用相同的設備和相同的儀器。校 準品和試劑可以改變。注：以前，術(shù)語總精密性用在EP15中。5 實行標準 在選定一個特定的測量分析物的步驟或者評估步驟的性能，實驗室必須基于臨床需求建立一 個最小化的詳細的實行計劃。醫(yī)學基礎實行標準表在參考文獻中被給出。一些常規(guī)的和認證

12、 的項目在實行水平測試(proficiency testing)指定最低的標準。如果應用常規(guī)的性能(performance)標準，則定義方法可能產(chǎn)生的允許測量誤差的最大值。這些標準用一個術(shù)語 總允許差值(總誤差)來表示，是從一個可接受的參考值中得出的。精確性和準確性目標是 必須來自允許的總誤差中的允許的標準差和偏倚。對可允許的誤差和允許范圍內(nèi)的標準差和 偏倚在一些發(fā)表的文章里被討論并在參考文獻中羅列出來。用戶可以查閱 CLSI/NCCLS EP21 在臨床實驗室方法中評價總分析誤差( estimation of total analytical error for clinical labor

13、atory methods) .為了正確的評估性能，推薦以下性能目標樣本來證實評價結(jié)果： 精密性：精確目標應被說明是在每一個被測的分析物濃度中，最大程度內(nèi)可允許的 SD 和 CV%。正確性：正確性目標應被說明是在被測的每一個分析濃度中，最大程度內(nèi)可允許的偏倚。最 大程度的偏倚可被表示為一個絕對濃度或者表示為一個百分比濃度?？傉`差：總誤差目標應該被說明是最大程度允許的獨立樣本的結(jié)果和這個樣本的目標結(jié)果(target value)的差值。目標值可被以下決定：在水平測試中，對等組(peer group)的方法； 在水平測試中，一個設定的參考方法； 從比較病人樣本的實驗中得出的一個比較方法； 廠家提供

14、的參考材料。用戶拿這些性能目標與廠家的聲明(manufacturerclaims)做比較。理想中，實驗室可以選 擇一種方法使廠商聲明的精確性和正確性在實驗室特定的性能標準范圍內(nèi)。如果廠家聲明在 特定的性能標準之外，那么這個方案就不合適。這時用戶可以選擇用更廣泛的方案來確認方 法的性能特點，比如 CLSI/NCCLS 中的 EP5 和 EP9, 或者選擇另一種候選的方法，并且比 較它聲明的特性與現(xiàn)今的方案。6協(xié)議概述在本協(xié)議中所有實驗工作可以在5 天內(nèi)完成：6.1：設備熟悉期 設備熟悉期是給予操作者時間來熟悉習慣使用儀器的操作和測量步驟。這個熟悉期包括有時 間計劃的學習評估對評估精密性有深遠的意

15、義。如果一個操作者沒有設備熟悉期的機會，包 括在精確的方案之前進行測量。由操作者得出的第一組數(shù)據(jù)，實驗室會假設測試系統(tǒng)的不精 密性和偏倚較真實的情況偏低。設備熟悉期也是去證實實驗室預期使用方法所用到的QC材料。6.2精密性評估實驗(見 8) 精確性的評估實驗提供給用戶演示精密性能步驟的指南。經(jīng)常的，制造商有兩種精確性的聲 明-重復性(批次間的精確性)(within-run precision)和實驗室間的精確性(within-laboratory precision)o這個部分提供了從這兩種聲明中確定總偏差的統(tǒng)計方法。6.3正確性評估實驗（見 9） 正確性的評估實驗提供給用戶兩種不同的方法。一

16、個或兩個都可以用到。（1）可比性.正確性可以從分離樣本比較實驗中評估出來，分析平均分布在整個測量區(qū)間20 個病人的樣本。兩種方法得出的結(jié)果（評估的方法和比較方法）來比較從而決定顯著的 差別是否存在。（2） 從認證的參考材料中獲得期望的值。正確性可以從分析水平測試（proficiency test） 材料和其他檢測的參考材料估計出，然后比較用評估方法得出的對預期參考值的結(jié) 果。（ 3 ）測量區(qū)間和參考區(qū)間測量區(qū)間的用戶演示被在最新版本的CLSI/NCCLS文件EP6-評估定量測量步驟的線性：一 個統(tǒng)計學方法（盡管線性區(qū)間和測量區(qū)間并不完全相同）中討論。參考區(qū)間用戶驗證被包含 在最新版本的CLSI

17、/NCCLS文件中C28-怎樣定義或決定臨床實驗室的參考區(qū)間。這些內(nèi)容 沒有在本文中討論。7 熟悉時期 當制造商檢查完系統(tǒng)后，員工必須對操作，維護步驟，樣品準備方法，校準，監(jiān)測功能熟悉。 這個熟悉期的時間是可以變化的，由裝置的復雜程度決定。校準在這個時期應該被驗證（看 最新版本的CLSI/NCCLS文件EP-6-在定量測量步驟中評估線性）。在這個時期結(jié)束時，操 作者應該對裝置的操作很有信心。操作培訓 必須學習操作，維持步驟，樣本準備方法，校準，監(jiān)測功能。一些制造商提供這些培訓。裝 置應被設置在獨立的實驗室足夠長的時間，以了解所有的步驟，避免在評估性能中遇到問題。 培訓應包括運用真正的實驗材料，

18、包括混合血清，控制品，剩余的病人樣本，或者其他適用 于裝置的可測物。所有偶然發(fā)生的意外（例如，錯誤標志，錯誤數(shù)據(jù)糾正，校準）可能出現(xiàn)在操作過程中，應 被小心的監(jiān)測。數(shù)據(jù)不要被記錄在這個時期。操作者培訓不應該被完成直到使用者可以對操 作儀器有信心（看最新版本的CLSI/NCCLS文件GP-21 -培訓和完成評估）。質(zhì)量控制步驟 在熟悉期，質(zhì)量控制步驟應被建立。驗證裝置在制造商規(guī)范下控制運行是很重要的。演示這 些，在制造商的建議下運用控制步驟。由于方案的短持續(xù)性，評估標準差不應該被應用來建 立質(zhì)量控制限制。最新版本的CLSI/NCCLS文件C24-定性測量統(tǒng)計質(zhì)量控制，可以當做建 立質(zhì)量控制步驟的

19、指南。精密度實驗材料在這個時期用于精密性實驗的材料的測試，是用來證實他們和預期中的相符。由于精密度可 能直接和濃度相關，分析物濃度應該在或者接近醫(yī)學決定值。舉個例子，葡萄糖方法性能應 被評估在濃度接近于126m/dl（7.0 mmol/1），高于這個濃度，一個快速的葡萄糖結(jié)果可能指 示疾病。對一些特定的分析物，在測量區(qū)間的高值和低值測量精確度也很重要。一般的， 選擇材料的分析值有和在制造商在試驗中用來建立精密度要求值接近的濃度就足夠了(這些 信息被制造商提供在評估測試系統(tǒng)的包裹中)。用于精密度實驗的可接受材料包括控制樣本， 標準，之前分析的病人樣本，或者一個合適的有值的材料。用于精確度實驗的材

20、料必須模仿 病人樣本基質(zhì)。舉個例子，在精確度實驗中測量全部血液分析時應用的材料必須盡可能接近 人體全部血液(human whole blood)。8 證實精密度性能 不精密度是一個定量的值，用來指示重復實驗的不吻合度。不精密度可以被報告為標準差 (SD。或者變異系數(shù)(CV%。的形式，表示標準差以一個在重復實驗中的平均值的百分比。在任何情況，平均值也應該被報告。增加標準差或者變異系數(shù)的值指示出測量不精密度的增 加。在這個文件中，精確度被考慮為是重復性(區(qū)間運行within-run精確度)或者實驗室間精確 度。重復性(repeatability。是一個定量的值，指示在所有的測量都在理想的條件下進行

21、(或 者在一個單一的批次中)的重復測量的不吻合度。實驗室間精確度(within-laboratory)是一個定量的值，指示重復實驗的不吻合度在很長的時 間內(nèi)當所有的已知的，重要的錯誤測量來源在一個實驗室內(nèi)(出去重要維持，重新校準，試 劑改變)都計算在內(nèi)。實驗室間精確度反映出很多種錯誤來源的積累，包括可重復性。實驗設計-天數(shù)和重復注：小寫字母6與下標的r或1結(jié)合，被分別指派用于廠商的要求重復標準差值和實驗 室間標準差(一些制造商叫總精確度)。小寫字母I,與下標的r或1結(jié)合，被分別用 來指派為用戶估計的重復標準差和實驗室間標準差。特定的步驟五天內(nèi)每天分析一批，在兩個濃度下用三個重復的樣本進行分析。

22、如果一批必須被駁回由于質(zhì)量控制步驟或者操作困難造成的，丟棄這些數(shù)據(jù)，增加一個 批次的分析。包括每天常用的質(zhì)量控制樣品。用于正確性實驗中，相同的批次內(nèi)被測量的樣品。按照制造商的要求來操作校準。如果制造商表明精密度數(shù)值是經(jīng)過多次校準得出的，那 么操作者可以選擇此值在實驗中重新校準。記錄數(shù)據(jù)附錄A包含了一個總結(jié)數(shù)據(jù)記錄表的例子。這樣的總結(jié)在以下描述的統(tǒng)計分析是很有用的。 附錄 B 顯示了一個完整的工作表的例子?？勺鳛檫x擇的，用戶可以用電腦提供的電子數(shù)據(jù) 表。精密度估計的計算收集數(shù)據(jù)并且轉(zhuǎn)移到適當?shù)挠涗洷砗?，之后就是計算。附錄A顯示了用于計算的一個空白工作表。附錄 B 顯示了一個完整的計算工作表的例子

23、。可作為選擇的，用戶可以用電腦提 供的電子數(shù)據(jù)表。每一水平的濃度都應被單獨計算。8.4.1 可重復性（批間精密度 within-run） 從下面的公式中算出重復性：（見附錄 A 工作表）其中：D = 總天數(shù)（5 ）口=每天的總重復數(shù)（3）xdi=重復i在第d天的結(jié)果-xd=所有結(jié)果的平均值在d天 值得注意的是，如果沒有按照完全一樣的實驗方案，那么重復性估計是不正確的。8.4.2 實驗室間精密度（within-laboratory） 實驗室間精密度可以由以下的公式計算出（見附錄 A 工作表）這些計算基于變量組成方法在 CLSI/NCCLS 文件中 EP-5 在定量測量方法中評估精密性中 討論的方

24、法。計算變量術(shù)語，sb2,公式中每天的平均值（間附錄A的工作表）：- X）1-xd=所有結(jié)果的平局值在d天X=全部結(jié)果的平均值計算si用以下的公式：其中，n=每一批重復的數(shù)目（3）與廠家聲明比較估計的重復性用比較 8.4.1 中提到的重復性估計計算方法與制造商的要求來驗證重復性。如果制造商聲明以變異系數(shù)的形式，把變異系數(shù)轉(zhuǎn)變?yōu)樵跍y試材料所有結(jié)果平均濃度標準差：oT = CV%T x這里，CV%r指制造商聲稱的重復性（批間within-in run變異系數(shù)）如果估計的重復性標準差小于制造商聲明的標準差，表明用戶演示的精密度與廠家聲明一 致。如果重復標準差大于廠家聲明，注意，一個用戶的重復性可以比

25、廠家聲明的要大并且與 聲明不同的可以不被統(tǒng)計。如果計算的重復性標準差比廠家聲明的要大，按照以下方法測試 是否屬于統(tǒng)計明顯偏大（真正的差值）：（1）計算重復度的自由度（degree of freedom）, v.在一個試驗中，在D天持續(xù)和n重復。V等同于D.（n-l）.在本方案中指5天的持續(xù)期和3個重復。所以v=10（2）決定（1-a/l）百分百點，C, X2（Chi-square）與v自由度的分布。這里a是指錯誤駁回，l 指水平測試的數(shù)量。 C 的百分點比有 2,3,4 水平測試一致值分別為.5%,98.33%和 98.75%。表1列舉了這些百分點的C值；其他數(shù)值可以從任何標準統(tǒng)計書和很普遍

26、的電腦電子數(shù)據(jù)程序中得出。（ 3） 計算驗證值Venfi cation vakie =arVenfi cation vakie =ar * ;C l.+3L =（4） 如果估計的重復度，sr,比驗證值小或相等，重復性的數(shù)據(jù)與廠家聲明的一致，并且 聲明是經(jīng)過驗證過的。為了更好的檢測能力，從制造商要求出發(fā)，多分析兩次并且 重新計算所有的統(tǒng)計，應用混合的數(shù)據(jù)。這樣使得廠家的聲明更有力。（見附錄C）. 如果聲明沒有被驗證，那么可聯(lián)系廠家尋求幫助。比較估計實驗室間精確性與廠家聲明用比較8。 4.2 提到估計計算的方法和廠家的聲明來驗證實驗室要求。如果廠家對實驗室間 精密度以變異系數(shù)的方式，那么把變異系數(shù)

27、轉(zhuǎn)變?yōu)樵跍y量材料所以結(jié)果的平均濃度時的標準 差：W = GV%】+靈這里，CV%是廠家聲明的實驗室間變異系數(shù)（之前的術(shù)語，總變異系數(shù)，CVt）.如果估計的實驗室間標準差比廠家聲明的要小，用戶表明精密度與廠家聲明一致。果重復標 準差大于廠家聲明，注意，一個用戶的重復性可以比廠家聲明的要大并且不被不同于聲明的 統(tǒng)計。如果計算的重復性標注差比廠家聲明的要大，按照以下方法測試是否屬于統(tǒng)計明顯偏 大（真正的差值）：(1) 自由度的有效率(effective degree of freedom) ,T,為了用于實驗室間精密度估計。對 于一個實驗在D天的持續(xù)期和n次的重復性(見附錄A工作表)：T _(吐_

28、1)，石 + (n * U)_(2)決定(1-a/l)百分百點，C, X2(Chi-square)與v自由度的分布。這里a是指錯誤駁回，l指水平測試的數(shù)量。C的百分點比有2,3,4水平測試一致值分別為.5%,98.33%和 98.75%。表1列舉了這些百分點的C值；其他數(shù)值可以從任何標準統(tǒng)計書和很普遍的電腦電子數(shù)據(jù)程序中得出。3) 按照以下方法計算驗證值(4) 如果實驗室間精確性評估，sl,比驗證值小或者相等，重復性的數(shù)據(jù)與廠家聲明的一 致，并且聲明是經(jīng)過驗證過的。如果用戶對這個結(jié)論不滿意，多分析兩次并且應用 混合的數(shù)據(jù)重新計算所有的統(tǒng)計。這樣會給用戶一個更有力的對廠家聲明的測試(見 附錄C)

29、。如果 sl 超過驗證值，用戶沒有表名與廠家聲明一致的精確度，這是用戶要聯(lián)系廠家尋求幫 助。9演示正確性(Trueness)正確性是指與一個真值，接受的標準，或者預期的值的一致性。對于一個測量結(jié)果，偏倚是 對正確性的測量；它與測量結(jié)果和一個分析物可接受的參考值是不同的。對于一個測量步驟， 偏倚被表示為在一個特定的條件下和可接受的參考值得出的平均結(jié)果的差值，也許來自一個 可接受的比較程序或者一個經(jīng)過認證的可參考的材料。本方案提出兩個程序來演示正確性(見附錄D,E,F;G,H):比較病人樣本的結(jié)果和其他測量程序。如果可能，比較病人樣本實驗應被完成。這種技 術(shù)可以避免人工制品，這種制品可能出現(xiàn)在商業(yè)

30、參考材料和其他程序中。比較病人樣本 在實驗室開始評估程序時是很重要的。比較本人樣本被強烈的建議當在預期的程序中得 到緊密的統(tǒng)一性。比較病人樣本也可能產(chǎn)生建立多種程序間的聯(lián)系的偏倚。這樣可以保 證是實驗室提供相同的結(jié)果運用不同的方法的能力。(見最新版本的 CLSI/NCCLS 文件 EP9-應用病人樣本方法比較和偏倚評估。恢復實驗參考材料的預期結(jié)果。當從程序中或得到經(jīng)驗，參考物質(zhì)策略在校準或者在水 平測試錯誤中對驗證應該更加方便。9.1 比較病人樣本結(jié)果和其他程序選擇比較的(參考)測量程序 對于解釋實驗的結(jié)果是很重要的。如果實驗室傾向于演示與廠家聲明的一致的正確性，那么比較的方法必須和廠家建立聲

31、明用 到的方法是一樣的。當從相同的廠家用一個新的步驟修正之前的步驟，或者在一個新的儀器 上應用廠家之前的程序，實驗室現(xiàn)今使用的程序可以作為廠家的比較程序。廠家正確性要求 適用于這種情況，在實驗中應被應用于演示正確值的基礎。經(jīng)常的，當今使用的程序和比較方法是不同的，或者是一個參考的方法或者在一個可參考的 實驗室做出的方法，并且實驗室傾向于演示一個新程序的正確值，新方法的程序與廠家用作 于比較方法是不同的。在這種情況下，廠家的聲明是不適用于作為演示正確值的基礎的，所 以就不能用作演示正確值的基礎。實驗室必須在用新程序得出的結(jié)果與比較程序得出的結(jié)果 之間指定一個醫(yī)學允許的偏倚，選用這個偏倚作為演示正

32、確值的基礎。特定允許偏倚是可以 獲得的。比較病人樣本測試結(jié)果的實驗方案已被制定為驗證方案。為了使試驗保持簡單，每 一個病人單獨的被比較和測試方法測試。這個程序只能檢測出在實驗室和廠家聲明的值中明 顯的偏倚差值。為了更加準確的評價偏倚，實驗室應應用CLSI/NCCLS文件EP-9-應用病人 樣品的方法比較和偏倚評價(Method comparison and bias estimation using patient sample 因為 它包括更多的病人樣本并且在用兩種方法重復測試。在所有的情況下，驗證兩種方法測量相 同的被測物是非常重要的。如果一個比較的方法被選定了，應進行以下步驟。見附錄D的

33、工作表，附錄C為一個完整 的工作表?？蛇x擇的，用戶可應用電腦提供的電子表格。取 20 個濃度不同的病人樣本，但是濃度不要超過測量程序的測量區(qū)間。不要使用分析濃度 超過測量區(qū)間的樣本。樣本的類型必須適用于比較和測量的程序。理想的，在廠家聲明中在 比較方法和測量方法被認定為含有干涉物質(zhì)的樣本應被除去(見最新版本的 CLSI/VCCLS 文件 EP7-在臨床化學的干涉測試 Interference testing in clinical chemistry).使用電子病歷或者一個必要的軟件允許進行的排除時才變得適用。如果不能切實的排除這些 樣本，見以下(2)對不符結(jié)果的討論。樣本應盡可能的在收集的當

34、天，在盡可能模仿經(jīng)常使用的程序的條件下測試。如果 比較和測試程序在不同地理位置的實驗室完成，那么應準備兩套凍融分裝品。分裝 品可被融化并被兩個實驗室在相同的時間進行分析。這樣就可以減輕在運輸中樣本 的損害。按照廠家的說明收集和處理病人樣本。對于實驗室來說，非正常的樣品很 少被觀察到，所以可先儲藏它們，知道有足夠的數(shù)量來進行實驗。如果用儲存的樣 品，需要重新冷藏，如果符合被測物的穩(wěn)定性和廠家的聲明，避免可能的人造制品 在凍融循環(huán)時被導入。一些實驗室可能需要用到冷凍的樣本，特別是當實驗持續(xù)期 和廠家生產(chǎn)標明需用冷凍樣本，在使用之前，它們必須被充分的混合并檢查顆粒物 在融化之后。如果顆粒物被發(fā)現(xiàn)，那

35、么需要用離心機，選上清作為樣本。如果用儲 存的樣本，應在一個或兩個小時內(nèi)用比較和測量的方法測量。測量的結(jié)果應該被平 均的分布在測量區(qū)間。如果整個區(qū)間不能被占據(jù)，這個結(jié)論只能適用于區(qū)間測量。 一個單獨的驗證測量區(qū)間，可允許得出一個基于嚴格的樣本結(jié)果區(qū)間，對于正確性 和精密性的結(jié)論。在測量和比較方法中測量樣本。這些測量應該在同一天的四小時內(nèi)完成。如果每天 測量 5-7 個樣本在 3-7 天，得到的結(jié)論比較可靠。這些測試可以和精密性測試同時 進行。在幾天連續(xù)測量可允許得出可能存在于測量方法或者比較方法中的天間變量(between-day variability)平均值。檢查每一個結(jié)果。如果觀察到在測

36、量和比較方法 中，一個單獨的樣本結(jié)果與其它的樣本相差很大，那么這是一個信號，在實驗中有 一些錯誤，需要對試驗合適度做進一步調(diào)查。建議做以下步驟：用測量方法和比較方法重復測量異常的樣本。一些病人樣本可能顯示出非預期的很大的 不同這是由于在測量程序中特異性差異或者其它的原因。需要注意的是，特異的錯誤可 以重復出現(xiàn)，但是其他隨機的與系統(tǒng)相關的而不是與病人樣本相關的系統(tǒng)錯誤是不會重復出現(xiàn)的。因此得出非重復出現(xiàn)的很大的差值是不重要，這樣的結(jié)論是不明智的。（b）在EP-15中，不符的數(shù)據(jù)應被丟棄，它會使結(jié)果發(fā)生偏倚。為了維持建議的樣本大小， 在分析中應該增加另一個樣本。（c）用樣本原始試驗或者重復試驗中的

37、信息來找出差異的原因。舉個例子，一個重復出現(xiàn)的 差異表示出在病人樣本中的干涉物質(zhì)。（3）對于每個測量程序中，應用適當?shù)馁|(zhì)量控制程序。任何不能接受的分析性能應被糾正， 那個批次中的樣本應被重新測量。 計算差值（單獨的樣本偏倚），以可報告的單位（reportable units）或者由兩種方法得出 的樣本結(jié)果的百分比差值的形式。在可報告的獨立的樣本偏倚=（測量結(jié)果-比較結(jié)果）獨立樣本偏倚的百分比=%“=100*test procedme result1 - -ompiriso口 pro-cdm-e result,=100*comparisoii procedure resuLti對每個樣本建立一個

38、偏倚或偏倚百分比（縱坐標） VS 比較方法結(jié)果（橫坐標）的坐標圖。 通過檢查偏倚的差值圖來確定在濃度區(qū)間測試中出現(xiàn)的程序差值是否相對恒定。如果恒定偏 倚 VS 濃度或者恒定偏倚百分比 VS 濃度被觀測到，這時，在步驟（5）平均偏倚表示在程 序中的平均差值。這個值隨后和廠家的聲明做比較來演示測量程序的正確性。如果偏倚或者偏倚百分比在濃度測量區(qū)間中沒有恒定，數(shù)據(jù)應被分成兩段，然后分別計算每 一段的平均偏倚。如果偏倚隨著濃度的增加而增加，那么平均偏倚就不能被計算。在這種情 況下，在測試測量程序中，需要更多的數(shù)據(jù)來驗證正確性。更多信息見最新版本的 CLSI/NCCLS 文件 EP9-Method Co

39、mparison Bias Estimation Using Patient Sample.（5） 在兩種程序中以可報告的單位或者百分比的形式計算偏差。-拆6） 結(jié)算偏倚的標準差/或者偏倚百分比假設一個錯誤的駁回率(rejection rate) , a .典型的錯誤率選定值為a =1%和5%。決定(100- a/2)百分比點，在 nT(degree of freedom)時的 t 分布(t-distribution). 這里n表示病人樣本的數(shù)量。舉個例子，如果a等于1%, n等于20, (100-a/2 )點， 在 t 分布(t-distribution)和 19 的自由度(degrees

40、of freedom)是 2.861。其 他雙面值的(two-sided) t值可以從任何標準統(tǒng)計書中得到，或者用電腦電子數(shù)據(jù) 來計算不同的a和n。計算偏倚的驗證極限值在可報告的單位中：決血八 Alld (USVikVn其中，b是廠家聲明的偏倚值。如果估計得偏倚一b在驗證極限值之間，那么實驗室演示出的偏倚與廠家聲明的是 一致的。如果用偏倚百分比，計算偏倚百分比的驗證極限值：其中，b是廠家聲明的偏倚值的百分比。如果估計得偏倚百分比b在驗證極限值之間，那么實驗室演示出的偏倚與廠家聲 明的是一致的。如果測量的偏倚或者偏倚百分比比廠家聲明的要大，但是在驗證極限值之間，用戶可 以測量多余于10-20病人

41、樣本，用混合的數(shù)據(jù)重新進行統(tǒng)計計算。如果估計得偏倚超出了驗證極限的范圍，那我么用戶就沒有演示出和廠家聲明一致的 正確性，那么就需要聯(lián)系廠家尋求幫助。9.2 從參考材料的設定值中復原期望值分析目標值的參考物質(zhì)可以從很多途徑得到。這些物質(zhì)典型的從人體材料( human source material)中制作出來，并且通過增加一些添加劑來達到預期的分析濃度并且提高分析物的 穩(wěn)定性。由于制造的原因，應制造的物質(zhì)所有的基質(zhì)溶液不同于真正人體的樣本?；|(zhì)的不 同可能會引起分析物反應的改變，這對于一個特定的材料測量程序是獨特的。這樣的結(jié)果是， 使用一個權(quán)威的或者可參考的程序中的分析目標值是不正確的，除非這個

42、參考材料已經(jīng)被特 別的評估并且找到合適的驗證過的程序。有目標值的參考材料在程序中被特別的制定用來指 示正確性，可提供目標值和已知的不確定因素的相關聯(lián)。這種情況下，正確性的演示對于驗 證其他實驗室應用相同的方法是有限的。材料程序(material-procedure)基質(zhì)反應的的另外一個結(jié)果造成很多不表示在實驗室應用的 設定目標的反試劑值潛在的不同反應(different response)o如果一個反應物有大量的不同出 現(xiàn)，那么程序特定的目標值就不能使用于新的反應物。這時就需要咨詢廠商對驗證正確性的 合適的參考材料的建議。9.2.1 參考材料的來源 以下列出一些可被用來驗證正確性有特定值的材料

43、的來源：新鮮的冷凍的人類血清或者是其他沒有摻雜的人體材料。已被認證的可參考材料可 從美國國家標準于技術(shù)研究所或者其他國際認可的提供商得到。這些物質(zhì)的部分表 可在實驗室醫(yī)學溯源性聯(lián)合委員會的網(wǎng)頁中得到：htpp:/en/committees/jc/jctlm-db/.從水平測試(proficiency testing)中得出的參考材料。這些物質(zhì)是由很多實驗室和頻 繁出現(xiàn)在很過反應物和系統(tǒng)校準過程中設定的。所以，這些特定的值表示的是程序的平 均值。3由制造商提供的驗證正確性和質(zhì)量控制的材料。這些材料是為已經(jīng)測試過的實驗程序 特別的設計，但是一般情況下不適用于另一個制造商的測量程序。用于實驗室間質(zhì)量

44、控制程序的材料。這些被相關的很大數(shù)量的實驗室測量，并且他 們的對等組平均值(peer group mean valus)可被用做設定的值。應注意的是，為了 得到一個可靠的平均值，一個適當數(shù)量的實驗室應被包含在對等組中(peer group). 在一個程序組中， 10個參與者通常被認為是可得出可靠平均值的最少的數(shù)目。這些 程序可能包含一小部分反應物在大量的程序出現(xiàn)，對于一個獨立的實驗室一個新的 反應物可以影響設定值的可靠度。由第三方供應商提供的材料，已經(jīng)在不同的測量程序中設定值。這些與水平測試(proficiency testing)或者區(qū)域性質(zhì)量控制材料相似，但是通常情況下，只有小部 分實驗室

45、貢獻對等組平均值(peer group mean valus )。所以，目標值有很大的不確 定性。此外，可能包括相對少的大量試劑差值，可能會影響設定目標值的可靠性。反應濃度可被調(diào)整為可說明的濃度，舉個例子，在血液中的氣壓可以被張力計測量 為可以說明的值。9.2.2 設定值的不確定性 參考材料的制造商經(jīng)常會提供設定值的不確定性，或者一個 95%的確定區(qū)間值(confidence interval)o對于這些材料，用戶必須提供設定值(assigned value)的標準誤 差(standard error)以便決定驗證極限(verification limits)見9.2.4。標準誤差可被很多種

46、方法決定，取決于決定值的方法，或者廠家提供的信息，在這個文件中，叫做sa:如果廠家提供標準誤差或者報告設定值的 “標準不確定性”( standard uncertainty) (經(jīng)常表示為u),或者“聯(lián)合標準誤差”(combined standard uncertainty)(經(jīng)常表示 為uc)，那么sa-提供的標準誤差，標準不確定性，或者聯(lián)合標準不確定性。如果廠家報告對于設定值為“95%的確定區(qū)間值(confidence interval)5,，那么sa=C/2. 如果廠家報告出確定區(qū)間的最高或者最低值，那么C= (Upper-lower) , sa=C/2.如果廠家報告出設定值的“延伸的不確定性”(expanded uncertainty) ,U,那么他必 須也報告出“覆蓋率(co