免疫實驗技術(shù)培訓(xùn)課件

1、免疫實驗技術(shù)免疫實驗技術(shù)利用免疫學(xué)原理來檢測抗原、多種免疫分子(抗體、補體、細(xì)胞因子和粘附分子等)及免疫細(xì)胞的實驗過程。有助于疾病的輔助診斷、治療及預(yù)后判斷 。2免疫實驗技術(shù)利用免疫學(xué)原理來檢測抗原、多種免疫分子(抗體、補體、細(xì)胞因子 一、 凝集反應(yīng) 顆粒性抗原（細(xì)胞、細(xì)菌等）或吸附于免疫無關(guān)載體上的可溶性抗原與相應(yīng)抗體，在適量電解質(zhì)的存在下，形成肉眼可見的凝集團(tuán)塊。 1、直接凝集反應(yīng) （1）玻片凝集試驗 ABO血型鑒定 （2）試管凝集試驗 肥達(dá)試驗效價（滴度）：以出現(xiàn)明顯抗原抗體反應(yīng)現(xiàn)象的最高稀釋度作為待檢抗原（或抗體）的含量。 3免疫實驗技術(shù) 一、 凝集反應(yīng) 3免凝集反應(yīng)（agglutin

2、ation)顆粒型抗原細(xì)菌、細(xì)胞抗體（凝集素）電解質(zhì)（生理鹽水）3750數(shù)小時凝集反應(yīng)（凝集成團(tuán)）4免疫實驗技術(shù)凝集反應(yīng)（agglutination)顆粒型抗原抗體電解質(zhì)1. 直接凝集試驗玻片法試管法含有已知抗體的診斷血清待檢菌液生理鹽水特點簡便、快速不能定量UUUU待檢血清鹽水簡便、快速能定量肥達(dá)氏試驗（widal test)傷寒、副傷寒已知抗原5免疫實驗技術(shù)1. 直接凝集試驗玻片法試管法含有已知抗體待檢菌液生理鹽水特ABO血型鑒定紅細(xì)胞表面抗原 抗A抗體 抗B抗體 血型 A + - A B - + B H - - O A,B + + AB6免疫實驗技術(shù)ABO血型鑒定紅細(xì)胞表面抗原 抗A抗體

3、 免疫實驗技術(shù)培訓(xùn)課件8免疫實驗技術(shù)8免疫實驗技術(shù) 二、沉淀反應(yīng) 可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合，當(dāng)兩者比例合適，并有適量電解質(zhì)存在時，形成肉眼可見的沉淀物或沉淀線。 9免疫實驗技術(shù) 二、沉淀反應(yīng)9免疫實沉淀試驗（precipitation test）可溶性抗原細(xì)胞裂解液抗體（沉淀素）電解質(zhì)（生理鹽水）3750數(shù)小時沉淀反應(yīng)（清澄液中出現(xiàn)混濁沉淀）10免疫實驗技術(shù)沉淀試驗（precipitation test）可溶性抗原沉淀反應(yīng)分類（1）瓊脂擴散試驗 a.單向瓊脂擴散試驗 b.雙向瓊脂擴散試驗（2）免疫電泳試驗 對流免疫電泳：原理：在陰極孔內(nèi)加抗原，陽極孔內(nèi)加抗體。通電后，抗原帶負(fù)電荷較多，分子較小

4、，向陽極泳動；抗體分子帶負(fù)電荷較少，加上分子量大，在瓊脂的電滲作用下向陰極泳動。 （3）環(huán)狀沉淀試驗 11免疫實驗技術(shù)沉淀反應(yīng)分類11免疫實驗技術(shù)（1）單向擴散試驗（Single redial diffusion test）預(yù)先混有抗體12免疫實驗技術(shù)（1）單向擴散試驗預(yù)先混有抗體12免疫實驗技術(shù)（2）雙向擴散試驗（Double diffusion test）13免疫實驗技術(shù)（2）雙向擴散試驗13免疫實驗技術(shù)（3）對流免疫電泳作用及特點：抗體球蛋白移向陰極，抗原分子移向陽極，當(dāng)兩者在適當(dāng)比例處相遇，即形成灰白色沉淀線。檢查乙型肝炎抗原及甲胎蛋白，敏感度比雙向擴散法高約10倍，只需12小時即可獲

5、得檢驗結(jié)果。不能定量測定。AgAb_+14免疫實驗技術(shù)（3）對流免疫電泳作用及特點：AgAb_+14免疫實驗技術(shù)三、 免疫標(biāo)記技術(shù) 原理： 利用酶、熒光素、膠體金、發(fā)光物質(zhì)以及放射性核素等標(biāo)記物來標(biāo)記抗原或抗體，再與標(biāo)本中的抗體或抗原反應(yīng)，最后測定復(fù)合物中的標(biāo)記物。 優(yōu)點：特異、敏感、快速，可作定性、定量或定位測定。 15免疫實驗技術(shù)三、 免疫標(biāo)記技術(shù)15免疫實驗技術(shù)依據(jù)檢測物分兩類： 1.免疫組化技術(shù)(immunohistochemical technique)，用于組織/細(xì)胞中抗原或抗體的定位； 2.免疫測定(immunoassay)，用于液體標(biāo)本中抗原或抗體的檢測。 依據(jù)標(biāo)記物的不同，可

6、分為： 酶免疫技術(shù)、熒光免疫技術(shù)、金免疫技術(shù)、化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)和放射免疫技術(shù)。 1、酶免疫技術(shù) 酶免疫技術(shù)是以酶標(biāo)記的抗體或抗原進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)。16免疫實驗技術(shù)依據(jù)檢測物分兩類：16免疫實驗技術(shù)酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA) 屬固相酶免疫測定 ELISA原理： 把待測標(biāo)本(含有未知抗體或抗原)和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的順序與固相抗原或抗體起反應(yīng)，再洗滌固相載體，隨后加入酶的底物，底物受酶催化轉(zhuǎn)變?yōu)橛猩a(chǎn)物。根據(jù)顏色的深淺對待測物質(zhì)定性或定量。17免疫實驗技術(shù)酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme-linked immuno三種試劑：固

7、相抗原或抗體 即把抗原或抗體用合適的方法連接到固相載體表面，同時保留它們的免疫活性；酶標(biāo)抗原或抗體 即把某些酶用合適的方法連接到抗原或抗體表面，同時保留它們的免疫活性以及酶的催化活性。常用的酶是辣根過氧化物酶(HRP)和堿性磷酸酶(AP)；酶作用的底物 常用的底物是鄰苯二胺18免疫實驗技術(shù)三種試劑：18免疫實驗技術(shù)ELISA的類型： (1)雙抗體夾心法 測抗原 1）已知抗體包被 2）洗板 3）加待檢抗原標(biāo)本 4）洗板 5）加酶標(biāo)記抗體 6）洗板 7）加底物顯色，測定 19免疫實驗技術(shù)ELISA的類型：19免疫實驗技術(shù)（2）間接法 測抗體 1）己知抗原包被 2）洗板 3）加待檢病人血清 4）洗板

8、 5）加酶標(biāo)記抗人IgG 6）洗板 7）加底物顯色，測定（3）競爭法 測抗原或抗體 測定抗原：在待測管中加入受檢抗原和酶標(biāo)抗原，使它們同固相抗體進(jìn)行競爭性結(jié)合。 20免疫實驗技術(shù)（2）間接法 測抗體20免疫實驗技術(shù)酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）間接法Ag待檢血清酶標(biāo)抗抗體檢測抗體雙抗體法Ag檢測抗原待檢抗原抗原競爭法Ag待檢抗原酶標(biāo)抗原Ag檢測抗原21免疫實驗技術(shù)酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）間接法Ag待檢血清酶標(biāo)抗抗體檢 2、膠體金免疫技術(shù) 以膠體金為標(biāo)記物的抗原抗體反應(yīng)。常與膜載體技術(shù)結(jié)合，包括斑點金免疫滲濾試驗和斑點金免疫層析試驗等。斑點金免疫層析試驗(dot gold immunochromatographic assay，DICA) 以硝酸纖維素膜為載體 如早早孕試驗22免疫