植物呼吸速率的測(cè)定培訓(xùn)課件

1、植物呼吸速率的測(cè)定植物呼吸速率的測(cè)定一、原理: 1. 在密閉、定溫及固定體積的系統(tǒng)中，當(dāng)氣體被吸收時(shí)，氣體分子減少，壓力降低。相反，當(dāng)產(chǎn)生氣體時(shí)，壓力上升。壓力的變化可以用微量檢壓計(jì)測(cè)出，并可據(jù)此計(jì)算氣體吸收或釋放的數(shù)量。因此，微量檢壓計(jì)可用以研究呼吸作用、光合作用及與O2、CO2及其它氣體交換相關(guān)的反應(yīng)如某些酶的活性等。植物呼吸速率的測(cè)定2一、原理: 1. 在密閉、定溫及固定體積的系統(tǒng)一、原理: 2. 由于在呼吸過程中吸收氧氣和產(chǎn)生二氧化碳是同時(shí)進(jìn)行的，所以從壓力計(jì)上所觀察到的壓力變化是氧的吸收量和二氧化碳釋放量的總結(jié)果。若在反應(yīng)瓶中加入堿液（如氫氧化鉀），呼吸時(shí)所產(chǎn)生的二氧化碳被堿吸收，則

2、可由壓力的變化計(jì)算出氧的吸收量。 植物呼吸速率的測(cè)定3一、原理: 2. 由于在呼吸過程中吸收氧氣和二、材料、儀器設(shè)備及試劑（一）材料：萌發(fā)的小麥種子。（二）儀器設(shè)備：1. 瓦布格呼吸計(jì)（微量呼吸檢壓計(jì)）；2. 移液管；3. 量筒；4. 小鑷子；5.橡皮筋；6.吸水紙植物呼吸速率的測(cè)定4二、材料、儀器設(shè)備及試劑（一）材料：萌發(fā)的小麥種子。（植物呼吸速率的測(cè)定5植物呼吸速率的測(cè)定5植物呼吸速率的測(cè)定培訓(xùn)課件三、實(shí)驗(yàn)步驟（一）種子吸氧量的測(cè)定（測(cè)壓計(jì)用） 1.種子處理：取發(fā)芽小麥種子6-8粒，用吸水紙將種子表面水分吸干，稱其鮮重（W）。用排水法測(cè)定其體積（V種子）：取10ml量筒，內(nèi)盛約5ml的水，

3、將種子充分放入量筒內(nèi)，二次水分體積之差即為種子體積。將種子取出，再次用吸水紙吸干附在種子外表的水分，將種子放入反應(yīng)瓶的底部，并往反應(yīng)瓶底部加入0.5ml水。植物呼吸速率的測(cè)定7三、實(shí)驗(yàn)步驟（一）種子吸氧量的測(cè)定（測(cè)壓計(jì)用） 1.種子2.反應(yīng)瓶及壓力計(jì)處理：在中央小槽內(nèi)加入20KOH 0.2ml，用以吸收CO2。為了增大吸收CO2的能力，可將1cm2cm濾紙折疊后插入中央小槽內(nèi)，并在中央小槽口上涂少量凡士林，防止堿液逸出。 側(cè)管的玻璃棒涂以凡士林后塞緊。壓力計(jì)口亦涂上凡士林和反應(yīng)瓶連接，轉(zhuǎn)動(dòng)反應(yīng)瓶，使封口凡士林呈透明為止，然后用橡皮筋將反應(yīng)瓶固定在壓力計(jì)上。 植物呼吸速率的測(cè)定82.反應(yīng)瓶及壓力

4、計(jì)處理：在中央小槽內(nèi)加入20KOH 03.壓力計(jì)及反應(yīng)瓶與水槽間溫度的平衡：將壓力計(jì)固定在水槽上，并打開壓力計(jì)活塞。設(shè)置恒溫水槽溫度，啟動(dòng)水槽攪拌裝置并啟動(dòng)轉(zhuǎn)盤振蕩，使壓力計(jì)平衡1015min。在此過程中要注意檢查反應(yīng)瓶是否漏氣。植物呼吸速率的測(cè)定93.壓力計(jì)及反應(yīng)瓶與水槽間溫度的平衡：將壓力計(jì)固定在水槽上4.測(cè)定與讀數(shù)：當(dāng)反應(yīng)瓶?jī)?nèi)溫度與水槽溫度平衡后，停止振蕩，將壓力計(jì)上的活塞關(guān)閉并重新開始振蕩，記錄開始時(shí)間。每隔15min記錄壓力計(jì)左側(cè)毛細(xì)管Brodie液面高度（ h ）。讀數(shù)時(shí)暫停振蕩，并將壓力計(jì)的右管液面調(diào)至150mm處，記錄左管液面高度，共計(jì)四次（共1h）。植物呼吸速率的測(cè)定104.

5、測(cè)定與讀數(shù)：當(dāng)反應(yīng)瓶?jī)?nèi)溫度與水槽溫度平衡后，停止振蕩，（二）空白實(shí)驗(yàn)與測(cè)壓計(jì)壓力值校正 由于壓力計(jì)左管口與大氣相通，實(shí)驗(yàn)時(shí)室內(nèi)氣壓或水槽溫度微小變化對(duì)讀數(shù)均有影響，為此，必須進(jìn)行校正。 校正方法：反應(yīng)瓶中除不加種子外，其他處理、測(cè)定及讀數(shù)與測(cè)壓計(jì)完全相同（即空白實(shí)驗(yàn)，作溫壓計(jì)用）；由測(cè)壓計(jì)讀數(shù)與溫壓計(jì)讀數(shù)的差值求得測(cè)壓計(jì)的實(shí)際壓力值（校正值）。植物呼吸速率的測(cè)定11（二）空白實(shí)驗(yàn)與測(cè)壓計(jì)壓力值校正 由于壓力計(jì)左管四、結(jié)果計(jì)算（二）呼吸速率計(jì)算：（樣品耗氧的）呼吸速率（l/gh） h K/ Wt。 其中， hK為根據(jù)實(shí)際壓力差值（h，mm）求出的氧氣的吸收量（l）；W為鮮樣品質(zhì)量（g）；t為反應(yīng)

6、時(shí)間（h）五、分析討論植物呼吸速率的測(cè)定12四、結(jié)果計(jì)算（二）呼吸速率計(jì)算：（樣品耗氧的）呼吸速率（主要注意事項(xiàng)：1. 操作中切勿對(duì)種子造成物理或化學(xué)損傷；2. 壓力計(jì)為精密玻璃儀器，須防止損壞；3. 壓力計(jì)與反應(yīng)瓶編號(hào)要配套一致；4. 壓力計(jì)及反應(yīng)瓶必需保證氣密性良好；5. 壓力計(jì)讀數(shù)時(shí)應(yīng)暫停振蕩，且不可將活塞打開，也不可將壓力計(jì)從水槽上卸下。思考題：1.本實(shí)驗(yàn)中為什么要設(shè)計(jì)溫壓計(jì)？2.反應(yīng)瓶常數(shù)k與哪些因素有關(guān)？本實(shí)驗(yàn)是如何滿足其條件的？植物呼吸速率的測(cè)定13主要注意事項(xiàng)：1. 操作中切勿對(duì)種子造成物理或化學(xué)損傷；實(shí)驗(yàn)4-2 小籃子法（廣口瓶法）測(cè)定植物呼吸速率植物呼吸速率的測(cè)定14實(shí)驗(yàn)4

7、-2 小籃子法（廣口瓶法）測(cè)定植物呼吸速率植物呼吸一、原理 植物呼吸時(shí)會(huì)放出CO2，一定量的植物樣品在單位時(shí)間內(nèi)放出CO2的數(shù)量，即可作為該樣品的呼吸速率。 植物呼吸過程中放出的CO2可用氫氧化鋇溶液吸收，呼吸過程結(jié)束后用已知濃度的草酸溶液滴定剩余的堿液，從空白和樣品二者消耗草酸溶液之差即可計(jì)算出呼吸過程中釋放的CO2的量。 植物呼吸速率的測(cè)定15一、原理 植物呼吸時(shí)會(huì)放出CO2，一定量的植二、材料、設(shè)備儀器及試劑（一）材料：發(fā)芽的小麥種子。（二）儀器設(shè)備：1.呼吸測(cè)定裝置；2.天平；3.鐘表；4.酸式及堿式滴定管；5.溫度計(jì) （三）試劑：1） 0.05mol/L 左右的Ba(OH)2：Ba(

8、OH)2 8.6g溶于1000ml蒸餾水中；2） 144 mol/L 草酸溶液：準(zhǔn)確稱取重結(jié)晶的H2C2O42H2O 2.8651g溶于蒸餾水中并定容至1000ml（每ml相當(dāng)于1mg CO2）；3） 酚酞指示劑：1g酚酞溶于100ml 95乙醇中，貯于滴瓶中。 植物呼吸速率的測(cè)定16二、材料、設(shè)備儀器及試劑（一）材料：發(fā)芽的小麥種子。（二三、實(shí)驗(yàn)步驟 1. 取500ml廣口瓶一個(gè)，瓶口用打有三孔的橡皮塞塞緊，一孔插一盛堿石灰的干燥管，使呼吸過程中能進(jìn)入無CO2的空氣，一孔插溫度計(jì)，另一孔直徑約1cm，供滴定用，平時(shí)用一小橡皮塞塞緊，瓶塞下面掛一鐵絲紗小籃，以便裝植物樣品，整個(gè)裝置即為廣口瓶呼

9、吸測(cè)定裝置。植物呼吸速率的測(cè)定17三、實(shí)驗(yàn)步驟 1. 取500ml廣口瓶一個(gè)，瓶口用打有三孔三、實(shí)驗(yàn)步驟 2. 向廣口瓶?jī)?nèi)加入0.05mol/L 的Ba(OH)2溶液20ml，立即塞緊橡皮塞（不帶小籃），充分搖動(dòng)廣口瓶2min，使瓶?jī)?nèi)CO2全部被吸收，拔出小橡皮塞，加入酚酞指示劑2滴后搖勻，把滴定管插入孔中，用標(biāo)準(zhǔn)草酸溶液進(jìn)行空白滴定，直到紅色剛剛消失為止。記錄滴定所用草酸的量（V0，ml） 植物呼吸速率的測(cè)定18三、實(shí)驗(yàn)步驟 2. 向廣口瓶?jī)?nèi)加入0.05mol/L 的B三、實(shí)驗(yàn)步驟 3. 倒出瓶中廢液，用無CO2的蒸餾水（煮沸過的）洗凈后，重加上述Ba(OH)2溶液20ml。稱取5g左右的發(fā)

10、芽小麥種子（稱前須擦干種子表面水分），裝入小籃子中，掛于橡皮塞下，塞緊瓶塞并開始記錄時(shí)間，經(jīng)過2030min，其間輕輕搖動(dòng)數(shù)次（以破壞溶液表面的BaCO3薄膜，利于充分吸收CO2）。到預(yù)訂時(shí)間后，打開塞子，將裝有植物材料的小籃子迅速取出，向瓶?jī)?nèi)加入2滴酚酞指示劑，立即塞緊塞子，搖勻后用草酸滴定，方法如前。記錄滴定所用草酸的量（Vs，ml）。植物呼吸速率的測(cè)定19三、實(shí)驗(yàn)步驟 3. 倒出瓶中廢液，用無CO2的蒸餾水（煮沸四、結(jié)果計(jì)算 樣品的呼吸速率（mg CO2/gh） （V0Vs）1/(Wt) 式中， V0 ：空白滴定用去的草酸量（ml）； Vs ：樣品滴定用去的草酸量（ml）；W：樣品鮮重（g）；t：測(cè)定時(shí)間（h）。1表示滴定所用每毫升144mol/L 的草酸相當(dāng)于1mgCO2。 五、分析討論植物呼吸速率的測(cè)定20四、結(jié)果計(jì)算 樣品的