TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)原理和方法tunel完成_第1頁
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1、TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)原理和方法tunel完成第一頁，共10頁。TUNELTUNEL的原理TUNEL的操作步驟結(jié)果及注意事項(xiàng)第二頁，共10頁。主要試劑1. 緩沖液(Labeling Buffer)： 用于維持一定的反應(yīng)條件，含有以下成分：500mmol/L二甲胂酸鉀、 pH7.2 10mmol/L CoCl2 (氯化鈷)、1mmol/L DTT(二硫蘇糖醇)。2.末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶(TdT) ： 催化3-OH末端 dUTP反應(yīng)的關(guān)鍵酶3.熒光素-dUTP ： TdT的底物和本實(shí)驗(yàn)的標(biāo)記物4.蛋白酶K： 消化組織，增加細(xì)胞通透性 第三頁，共10頁。TUNEL的原理凋亡細(xì)胞的特征是:內(nèi)源

2、性核酸內(nèi)切酶被激活，細(xì)胞自身的染色質(zhì)DNA被切割，出現(xiàn)單鏈或雙鏈缺口，并產(chǎn)生與DNA斷點(diǎn)數(shù)目相同的 3-OH末端 。末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal deoxynucleotidyl Transferase TdT)能將脫氧核糖核苷酸連接到DNA的3-末端。TUNEL的原理是：用熒光素（fluorescein）標(biāo)記的脫氧核糖核苷酸，在TdT 的作用下連接到凋亡細(xì)胞中斷裂DNA的3-OH末端，用熒光顯微鏡即可觀察結(jié)果。在此基礎(chǔ)上連接辣根過氧化酶標(biāo)記的熒光素抗體，可進(jìn)一步放大檢測(cè)信號(hào)，并且普通顯微鏡觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果。由于正常的或正在增殖的細(xì)胞幾乎沒有DNA的斷裂，因而沒有3-OH形成，很少能夠被染色。 第四頁，共10頁。TUNEL原理第五頁，共10頁。標(biāo)本處理第六頁，共10頁。實(shí)驗(yàn)步驟第七頁，共10頁。實(shí)驗(yàn)流程第八頁，共

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