中國(guó)藥科大學(xué) 分析化學(xué) 第18經(jīng)典液相色譜法課件

1、第十八章 經(jīng)典液相色譜法 第一節(jié) 概述液相色譜法：以液體為流動(dòng)相的色譜法稱。經(jīng)典液相色譜：固定相顆粒較大且不均勻 常壓下輸送流動(dòng)相 柱效較低 分析周期長(zhǎng)現(xiàn)代液相色譜：固定相顆粒小且均勻 高壓下輸送流動(dòng)相 柱效較高 分析周期短第二節(jié) 液-固吸附柱色譜（一）分離原理（二）常用吸附劑（三）吸附劑和流動(dòng)相的選擇（一）分離原理 各組分與流動(dòng)相分子爭(zhēng)奪吸附劑表面活性中心 利用吸附劑表面的活性吸附中心對(duì)不同組分的 吸附能力差異而實(shí)現(xiàn)分離（二）常用吸附劑：多孔、微粒狀物質(zhì) 1. 硅膠 2. 氧化鋁 3. 聚酰胺1. 硅膠（SiO2H2O）結(jié)構(gòu)：內(nèi)部硅氧交聯(lián)結(jié)構(gòu)多孔結(jié)構(gòu) 表面有硅醇基氫鍵作用吸附活性中心表面硅醇

2、基存在形式：吸附活性的大小順序是： 游離羥基 束縛形 活潑形適用：分析酸性或中性物質(zhì) 硅膠吸附特性： 1）與極性物質(zhì)或不飽和化合物形成氫鍵 物質(zhì)極性，吸附能力，k ，tR 強(qiáng)極性吸附中心，不易洗脫2）吸水失活 105110OC烘干30分鐘(可逆失水)吸附力最大 500OC烘干(不可逆失水)活性喪失，無(wú)吸附力續(xù)前2. 氧化鋁 堿性氧化鋁 pH 910 適于分析堿性、中性物質(zhì) 中性氧化鋁 pH7.5 適于分析酸性堿性和中性物質(zhì) 酸性氧化鋁 pH 45 適于分析酸性、中性物質(zhì)3. 聚酰胺 氫鍵作用 氫鍵能力強(qiáng)，組分越后出柱 （三）吸附劑和流動(dòng)相的選擇： 依據(jù)被測(cè)組分、吸附劑和流動(dòng)相的性質(zhì)1. 被測(cè)組

3、分性質(zhì)（極性大小）： 烴 - - - - - - - - 羧酸，醇 2. 吸附劑的活性： 吸附劑的活性大，對(duì)被測(cè)組分的吸附能力強(qiáng) 強(qiáng)極性物質(zhì)選擇弱吸附劑 弱極性物質(zhì)選擇強(qiáng)吸附劑3. 流動(dòng)相的極性： 流動(dòng)相極性大，對(duì)被測(cè)組分的洗脫能力大 “相似相溶”原則 ：根據(jù)組分性質(zhì)、吸附劑的活性， 選擇適當(dāng)極性的流動(dòng)相第三節(jié)、薄層色譜法（一）概述（二）定性參數(shù)（三）吸附劑的選擇 （四）展開劑的選擇 （五）薄層板的制備（六）定性與定量分析（一）概述1定義：將固定相均勻涂布在表面光滑的平板上， 形成薄層而進(jìn)行色譜分離和分析的方法2操作過(guò)程：見圖示鋪板 活化 點(diǎn)樣 展開 定位(定性)/洗脫(定量)3分離機(jī)制：吸附

4、（分配，離子交換，空間排阻）4特點(diǎn)：分析快速、靈敏、顯色方便5應(yīng)用：藥物雜質(zhì)檢查、純度測(cè)定 next圖示（二）定性參數(shù)1. 比移值Rf續(xù)前討論 Rf與K有關(guān)，即與組分性質(zhì)（溶解度）以及薄層板 和展開劑的性質(zhì)有關(guān) 色譜條件一定，Rf只與組分性質(zhì)有關(guān)，是薄層色譜基本定性參數(shù)，說(shuō)明組分的色譜保留行為續(xù)前2. 相對(duì)比移值Rs 討論參考物與被測(cè)組分在完全相同條件下展開 可以消除系統(tǒng)誤差，大大提高重現(xiàn)性和可靠性；參考物可以是后加入純物質(zhì)，也可是樣品中已知組分相對(duì)比移值Rs與組分、參考物性質(zhì)及色譜條件有關(guān)，范圍可以大于或小于13.影響比移值的因素1）被分離物質(zhì)的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)2）薄層板的性質(zhì)3）展開劑的極性4）

5、溫度5）展開槽內(nèi)的展開劑蒸氣飽和程度（三）分離參數(shù)分離度（R） 兩相鄰斑點(diǎn)中心距離與兩斑點(diǎn)平均寬度（直徑）的比值成為分離度 R=2d/(W1+W2)（三）吸附劑的選擇 根據(jù)被測(cè)物極性和吸附劑的吸附能力 被測(cè)物極性強(qiáng)弱極性吸附劑 被測(cè)物極性弱強(qiáng)極性吸附劑（四）展開劑的選擇（同液固吸附色譜流動(dòng)相的選擇） 根據(jù)被測(cè)組分、吸附劑和展開劑本身的極性（五）薄層板的制備定性分析窄條定量分析1020cm （六）點(diǎn)樣和展開（七） 定性與定量分析 定性分析日光，紫外光，顯色 定量分析洗脫法，薄層掃描法硅膠G自含粘和劑硅膠H不含粘和劑，鋪板時(shí)另加入CMC硅膠FH254含熒光劑，254nm紫外光照發(fā)綠光硅膠FH365含熒光劑，365nm紫外光照發(fā)光第四節(jié) 紙色譜法將固定相放在紙上，以紙做載體進(jìn)行點(diǎn)樣、展開、定性、和定量的液-液分配色譜法固定相：紙纖維吸附的水流動(dòng)相：與水不互溶的有機(jī)溶劑（飽和正丁醇）分離機(jī)