《藥物分析》chapter5課件

1、第五章 巴比妥類藥物的分析基本要求一、掌握我國藥典中巴比妥類藥物的鑒別和含量測定的基本原理與方法。二、熟悉國外藥典本類藥物鑒別和含量測定的基本原理與方法。三、了解本類藥物的體內(nèi)分析方法。一、巴比妥類藥物的結(jié)構(gòu)剖析巴比妥類藥物為環(huán)狀酰脲類鎮(zhèn)靜催眠藥，是巴比妥酸的衍生物，其基本結(jié)構(gòu)通式為：5-位取代基R1和R2不同，形成不同巴比妥類藥物，具有不同的理化性質(zhì)。臨床上常用的本類藥物多為巴比妥酸的5，5-二取代衍生物，少數(shù)1，5，5-三取代或C2 位為硫取代的硫代巴比妥酸的5，5-二取代衍生物。巴比妥類藥物的基本結(jié)構(gòu)可分為兩部分：一部分為母核巴比妥酸環(huán)狀丙二酰脲結(jié)構(gòu)。此結(jié)構(gòu)是巴比妥類藥物的共同部分，決定

2、巴比妥類藥物的共性，可用于與其它類藥物相區(qū)別。另一部分是取代基部分，即R1和R2等。根據(jù)取代基不同，可以形成各種具體的巴比妥類藥物，并具有不同的理化性質(zhì)。這些理化性質(zhì)可用于各種巴比妥類藥物之間的相互區(qū)別。(一) 弱酸性巴比妥類藥物的母核環(huán)狀結(jié)構(gòu)中含有1，3-二酰亞胺基團，能使其分子發(fā)生酮式-烯醇式互變異構(gòu),在水溶液中發(fā)生二級電離。本類藥物具有弱酸性(pKa值為7.38.4)故可與強堿反應(yīng)生成水溶性的鹽類，一般為鈉鹽。由弱酸與強堿形成的巴比妥鈉鹽，其水溶液呈堿性，加酸酸化后，則析出結(jié)晶性的游離巴比妥類藥物，可用有機溶劑將其提取出來。上述這些性質(zhì)可用于巴比妥類藥物的分離、鑒別、檢查和含量測定。2巴

3、比妥類藥物鈉鹽的水解本類藥物的鈉鹽，在吸濕的情況下也能水解。一般情況下，在室溫和Ph10 以下水解較慢；pH11 以上隨著堿度的增加水解速度加快。(三) 與重金屬離子的反應(yīng)1與銀鹽的反應(yīng)難溶性二銀鹽白色沉淀。可溶性的一銀鹽2與銅鹽的反應(yīng)銅離子吡啶溶液穩(wěn)定的配位化合物4與汞鹽的反應(yīng)白色汞鹽沉淀,能溶于氨試液(四) 與香草醛(Vanillin)的反應(yīng)加乙醇后，其反應(yīng)產(chǎn)物可轉(zhuǎn)變?yōu)椋毫虼捅韧最愃幬锏淖贤馕展庾V在鹽酸溶液（0.1mol/L）中，兩個吸收峰分別在287nm和238nm；(-)在氫氧化鈉溶液（0.1mol/L）中，兩只吸收峰分別移至304nm和255nm。(）在pH13 的強堿性溶液中，

4、硫代巴比妥類藥物在255nm處的吸收峰消失，只存在304nm處的吸收峰。（六）薄層色譜行為特征1、 薄層色譜法 取巴比妥類藥物約50g點于硅膠GF254薄層板上，以氯仿-丙酮（4:1）混合液作流動相，展開后，薄層板用溫?zé)峥諝饬鬟M 行干燥，然后噴灑2%的氯化汞乙醇溶液，繼之再噴灑2%的1，5-二苯卡巴腙乙醇溶液。此時則在紫色的背景上觀察到巴比妥類藥物的白色斑點。2、高效液相色譜法 取巴比妥類藥物的乙醇溶液（1mg/ml）2l，注入ODS柱（250mm4.6mm，填充5m的Spherisord ODS）中，用磷酸二氫鈉（0.1mol /L）用氫氧化鈉液（5mol/L）調(diào)節(jié)pH 至8.5-甲醇（4:

5、1）混合溶液作為流動相，流速為0.8ml/min，以UV檢測器于210nm波長進行檢測，其保留行為應(yīng)與對照品一致。三、鑒別試驗（一）丙二酰脲類鑒別反應(yīng)1、銀鹽反應(yīng)的方法 取供試品約0.1g，加碳酸鈉試液（一水合碳酸鈉12.5g 或無水碳酸鈉10.5g，加水溶解成100ml，即得）1ml與水10 ml，振搖2min，濾過，濾液中逐滴加入硝酸銀試液，即生成白色沉淀，振搖，沉淀即溶解；繼續(xù)滴加過量的硝酸銀試液，沉淀不再溶解。2、銅鹽反應(yīng)的方法 取供試品約50mg，加吡啶溶液（110）5ml，溶解后加銅吡啶試液（硫酸銅4g，加水90ml溶解后，加吡啶30ml，即得）1ml，即顯紫色或生成紫色沉淀。（二

6、）測定熔點1、司可巴比妥鈉的鑒別 取本品1g，加水100 ml 溶解后，加稀醋酸5ml，強力攪拌，再加水200ml，加熱煮沸使溶解成澄清溶液（液面無油狀物），放冷，靜置后析出結(jié)晶，濾過，結(jié)晶在70干燥后，熔點約為97。2、苯巴比妥鈉的鑒別 中國藥典的方法：取本品約0.5g，加水5ml溶解后，加稍過量的稀鹽酸，即析出白色結(jié)晶性沉淀，濾過；沉淀用水洗凈，在105干燥后，熔點應(yīng)為174- 178。（三）利用特殊取代基或元素的鑒別試驗1、利用不飽和取代基的鑒別試驗（1） 碘試液的反應(yīng)：（2）與高錳酸鉀的反應(yīng)：3、硫元素的鑒別試驗用于硫代巴比妥類與巴比妥類藥物的區(qū)別。黑色的硫化鉛四、特殊雜質(zhì)檢查合成工藝

7、：2、溶液的澄清度 本項檢查主要是控制苯巴比妥中乙醇不溶性雜質(zhì)，利用苯巴比妥酸這些雜質(zhì)在乙醇溶液中的溶解度比苯巴比妥小的特性進行檢查。檢查方法：取本品1.0g，加乙醇5ml，加熱回流3min，溶液應(yīng)澄清。3、中性或堿性物質(zhì) 中性或堿性物質(zhì)是由中間體（）形成的副產(chǎn)物2-苯基丁二酰胺、2-苯基丁二酰脲或分解產(chǎn)物等雜質(zhì)，不溶于氫氧化鈉試液但溶于乙醚；而苯巴比妥具有酸性，溶于氫氧化鈉試液，故采用提取重量法測定其含量。利用這些雜質(zhì)與苯巴比妥在氫氧化鈉試液和乙醚中的溶解度不同，采用提取重量法測定雜質(zhì)含量。五、含量測定（一）銀量法 在滴定過程中，巴比妥類藥物首先形成可溶性的一銀鹽，當(dāng)被測定的巴比妥類藥物完全

8、形成一銀鹽后，稍過量的銀離子就與巴比妥類藥物形成難溶性的二銀鹽沉淀，使溶液變渾濁，以此指示滴定終點。中國藥典均可采用銀量法測定其含量異戊巴比妥及其鈉鹽的測定：取本品約0.2g，精密稱定，加甲醇40ml使溶解，再加新鮮配制的3%無水碳酸鈉溶液15ml，照電位法，用硝酸銀滴定液（0.1mol/L）滴定，即得。每1ml硝酸銀滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于22.63mg的C11H18N2O（3 或24.83mg的C11H17N2NaO3）。（二）溴量法 凡在5位取代基含有不飽和鍵的巴比妥類藥物，其不飽和鍵能與溴定量地發(fā)生加成反應(yīng)，故可采用溴量法測定其含量（三）酸堿滴定法1、在水-乙醇混合溶劑中的滴定

9、 基于本類藥物在水中的溶解度較小，滴定時多在醇溶液或含水的醇溶液中進行，這樣可避免反應(yīng)中產(chǎn)生的弱酸鹽易于水解而影響滴定終點。常以麝香草酚酞為指示劑，滴定至淡藍色為終點。2、在膠束水溶液中的滴定方法 本法是在有機表面活性劑的膠束水溶液中進行滴定，用指示劑或電位法指示終點。因表面活性劑能改變巴比妥類藥物的離解平衡，使藥物的Ka增大，即使巴比妥類藥物酸性增強，因此使滴定終點變化明顯。常用的有機表面活性劑有：溴化十六烷基三甲基芐銨和氯化四癸基二甲基芐銨。3、非水溶液滴定法 巴比妥類藥物在非水溶液中的酸性增強，用堿性標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定時，終點較為明顯，可獲得比較滿意的結(jié)果。測定時常用的有機溶劑有二甲基甲酰胺、

10、甲醇、氯仿、丙酮、無水乙醇、苯、吡啶、甲醇-苯（15:85）、乙醇-氯仿（1:10）等；常用的滴定劑有甲醇鉀（鈉）的甲醇（或乙醇）溶液、氫氧化四丁基銨的氯苯溶液等；常用的指示劑為麝香草酚藍等，也可用玻璃-甘汞電極系統(tǒng)，以電位法指示終點。（四）紫外分光光度法 巴比妥類藥物在酸性介質(zhì)中幾乎不電離，無明顯的紫外吸收。但在堿性介質(zhì)中電離為具有紫外吸收特征的結(jié)構(gòu)，因而可采用紫外分光光度法測定其含量一些巴比妥類藥物紫外吸收的有關(guān)數(shù)據(jù)1、直接測定的紫外分光光度法 本法是將供試品溶解后，根據(jù)溶液的pH，在最大吸收波長（max）處，直接測定對照品溶液和供試品溶液的吸收度，再計算藥物的含量。中國藥典對注射用硫噴妥

11、鈉的含量測定采用本法。2、提取分離后的紫外分光光度法 根據(jù)巴比妥類藥物具有弱酸性，在氯仿等有機溶劑中易溶，而其鈉鹽在水中易溶的特點。測定時取供試液適量，加酸酸化后，用氯仿提取巴比妥藥物。氯仿提取液加pH7.2-7.5 緩沖溶液（水10ml-25ml，加碳酸氫鈉1g，10%鹽酸3-4滴），振搖，分離棄去水相緩沖液層。再用0.45mol/L 氫氧化鈉溶液提取氯仿層中的巴比妥類藥物，將堿提取液調(diào)節(jié)至適宜pH，然后選擇相應(yīng)的吸收波長進行測定。本法可消除干擾物質(zhì)對巴比妥類藥物測定的影響，因此USP(25)對苯巴比妥鈉的含量測定采用本法。3、差示紫外分光光度法 本法是利用巴比妥藥物在不同pH值溶液中的電離級數(shù)不同，因而產(chǎn)生紫外吸收光譜的情況不同，以此為依據(jù)設(shè)計測定方法。該法常用于巴比妥類藥物的制劑分析，也可用于體內(nèi)巴比妥類藥物的監(jiān)測。課堂練習(xí)與思考1、利用特殊取代基或元素的專屬反應(yīng)可以區(qū)分不同的巴比妥類藥物，以下可用做專屬鑒別試驗的為：A: 司可巴比妥鈉水溶液滴加碘試液，所顯棕黃 色5min內(nèi)消失。B: 苯巴比妥與甲醛-硫酸反應(yīng)，生成玫瑰紅色 產(chǎn)物。C: 硫噴妥鈉在氫氧化鈉試液中與鉛離子反應(yīng)生 成白色沉淀。D: 苯巴比