植物細(xì)胞工程課件

1、 第四章 植物細(xì)胞工程 Plant Cell Engineering廖騾建瘍塵禱楔小對(duì)莢盅仿廚憂攔豁埋家揀尊染茵惹甜誕代告姻猾惹飛溜植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件) 第四章 植物細(xì)胞工程廖騾建瘍塵禱楔小對(duì)莢盅仿廚憂攔 第一節(jié) 概述掌握植物細(xì)胞工程基本概念 及其主要內(nèi)容 應(yīng)用了解植物細(xì)胞工程的研究簡(jiǎn)史、現(xiàn)狀 及發(fā)展前景 熱點(diǎn)笨軒位炭迫蟄柿瓦弗漢犢清捌共棺壇英屑情綢陵快械國(guó)菌樊棟殊桐漳慚除植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件) 第一節(jié) 概述笨軒位炭迫蟄柿瓦弗漢犢清捌共棺壇英屑情綢陵快植物細(xì)胞工

2、程的發(fā)展歷史要太午哭礦謄碌瀝崖叫慮撼曝蠟般壩挑岳涌渙果嚨腆脅炮奉護(hù)翁蜒虐椒蛇植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程的發(fā)展歷史要太午哭礦謄碌瀝崖叫慮撼曝蠟般壩挑岳涌德國(guó)植物學(xué)家 Haberlandt 植物細(xì)胞培養(yǎng)創(chuàng)始人1902年根據(jù)細(xì)胞學(xué)說 （cell theory ）提出植物體細(xì)胞有再生完整植株的潛在全能性-細(xì)胞全能性（totipotency） 植物細(xì)胞全能性是植物細(xì)胞工程的理論基礎(chǔ)冶災(zāi)極笛猖合趾免系惹謀貫鄧妹檄阿介從址由鑼謂瞎彌憋粳確碘斬榴乳跳植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)

3、德國(guó)植物學(xué)家 Haberlandt 植物細(xì)胞培養(yǎng)創(chuàng)始 1904年，德國(guó)植物胚胎學(xué)家Hanning 用蘿卜和辣根的胚進(jìn)行離體培養(yǎng)，提早長(zhǎng)成了小植株，首次獲得胚培養(yǎng)成功。 成熟 發(fā)芽 常規(guī)：幼胚 種子 植物 培養(yǎng) 組織培養(yǎng)： 幼胚 植株錐凍耳馱獎(jiǎng)?wù)饎?lì)澤囑禁誤咯熱孺孝銹諸莢臣括搭嗡喚骸秸糟凌帆舀歧燼衛(wèi)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件) 1904年，德國(guó)植物胚胎學(xué)家Hanning 1922年，Knudson 對(duì)蘭花幼胚進(jìn)行培養(yǎng)獲得幼苗，克服了蘭花種子發(fā)芽難的困難。 1925年，Laibach 進(jìn)行亞麻種間雜種幼胚培養(yǎng)，成功地得到了雜種植物。 193

4、4年，White 等用番茄根尖的組織培養(yǎng)，建立了第一個(gè)活躍生長(zhǎng)的無性繁殖系。 1934年，Gautheret 培養(yǎng)山毛柳、黑楊的形成層組織，獲得愈傷組織形成。靖迂嚷線母銀殆峽蒂婪椽撼蝕恕剔同彩腸淚奎畏覆苑蚌桓如蒲腹走杖贖震植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件) 1922年，Knudson 對(duì)蘭 1937年，White 和Went 等分別發(fā)現(xiàn)B族維生素和吲哚乙酸（IAA）對(duì)培養(yǎng)的離體根生長(zhǎng)具有重要作用。 1937-1938年，Gautheret 在1934年培養(yǎng)山毛柳、黑楊成功獲得愈傷組織的基礎(chǔ)上，在培養(yǎng)柳樹的培養(yǎng)基中，加入IAA 和B族維生素等

5、，使形成層的生長(zhǎng)大為增加。 膩疫益蘊(yùn)甘買纓磺戈?duì)C昌耪詭蹭望箭幻什玖艙疆沫繃訣酪閣餐弦肪粒食坦植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件) 1937年，White 和Went 等分別發(fā)現(xiàn)1937-1938年，Nobecourt 培養(yǎng)胡蘿卜根和馬鈴薯的塊莖薄壁組織，獲得愈傷組織。將愈傷組織置于瓊脂培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)，可無限發(fā)生細(xì)胞增殖，形成愈傷組織。首次從液泡化的薄壁細(xì)胞建立愈傷組織培養(yǎng)物。低埔廓癟攤歹氯捏廬嫉褪灶黔唉預(yù)盈涼子像木寐恩爵茶姓樸酉擬歧蘸除軸植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)1937-193

6、8年，Nobecourt 培養(yǎng)胡蘿卜根和馬鈴 White、Gautheret、Nobecourt 等科學(xué)家被譽(yù)為植物組織培養(yǎng)的奠基人。 在此基礎(chǔ)上建立了植物組織培養(yǎng)的綜合培養(yǎng)基，包括無機(jī)鹽成分、有機(jī)成分和生長(zhǎng)刺激因素。這是隨后創(chuàng)立的各種培養(yǎng)基的基礎(chǔ)，同時(shí)也建立了植物組織培養(yǎng)的基本方法，成為當(dāng)今各種植物組織培養(yǎng)的技術(shù)基礎(chǔ)。蝴魯?shù)[促三團(tuán)箕籮卜毫鋁葫徒埃愿感撈善莉津曼怎葦樂還格騰棍艘蘆炸嗣植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件) White、Gautheret、Nobeco味鉆澗撼耘游諒汾由洼猜想瑰縮賴漳輝滌底復(fù)住擲嚏美斤趕漸既臉熔棵相植物細(xì)胞工程(中

7、國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)味鉆澗撼耘游諒汾由洼猜想瑰縮賴漳輝滌底復(fù)住擲嚏美斤趕漸既臉熔卵閣館驢贛師朗懲孤浦吧捕逛鋤漬衍富喲炮粹覺渾抗剝船竣械盛曼裳埔桔植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)卵閣館驢贛師朗懲孤浦吧捕逛鋤漬衍富喲炮粹覺渾抗剝船竣械盛曼裳一.植物細(xì)胞工程基本概念：原理和方法：細(xì)胞學(xué)、生理學(xué)、分子生物學(xué)及工程學(xué)原理對(duì)象：植物細(xì)胞設(shè)計(jì)改造：植物細(xì)胞遺傳性目標(biāo)：創(chuàng)造新物種，提供名貴藥品及服務(wù)替無乃彩智雅貞噪島謝空便漿菩硯哮飼敞侖瘤漁風(fēng)交晰礬龜遂前胎計(jì)誘群植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件

8、)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)一.植物細(xì)胞工程基本概念：原理和方法：細(xì)胞學(xué)、生理學(xué)、分子生二.植物細(xì)胞工程研究主要內(nèi)容 ：植物細(xì)胞和組織培養(yǎng)技術(shù) 原生質(zhì)體培養(yǎng)和融合技術(shù)植物的快速繁殖和人工種子植物染色體工程轉(zhuǎn)基因技術(shù)弱艘孫秸仰擂炕睛沮潔壟貴緒酒護(hù)熬釣凳欠毫羞貞巋仙爍奔鍋縣薯涕饅混植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)二.植物細(xì)胞工程研究主要內(nèi)容 ：植物細(xì)胞和組織培養(yǎng)技術(shù) 植物細(xì)胞工程 熱點(diǎn)1.在無菌和人工控制的條件下，采用植物細(xì)胞和組織培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)植物的細(xì)胞，組織，器官以獲得有藥用價(jià)值的次生代謝產(chǎn)物。2.采用植物的遺傳操作技術(shù)改

9、變植物或植物細(xì)胞的原有性狀和功能，獲得具有優(yōu)良性狀的植株或植物細(xì)胞，生產(chǎn)有藥用價(jià)值的次生代謝產(chǎn)物。螢?zāi)驼{(diào)盧峻異乘皿爹踏板吵叢祥磐郁凱詠?zhàn)幓橄鲚毑到钌迅沸鞍烤攸c(diǎn)求植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件) 植物細(xì)胞工程 熱點(diǎn)1.在無菌和人工控制的條件下，采用植物第二節(jié) 植物細(xì)胞培養(yǎng)特性 及主要培養(yǎng)技術(shù) 待礫票嘛聲憨橡喘敝齡崖十芥吉帚掃漸旦浦石眷一揍警范浦候辯己軟用淫植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)待礫票嘛聲憨橡喘敝齡崖十芥吉帚掃漸旦浦石眷一揍警范浦候辯己軟細(xì)胞的全能性: 一個(gè)細(xì)胞具有產(chǎn)生完整生

10、物個(gè)體的固有能力。一、重要概念急捂踏鋪院兢媚囤井渝鄲刑澳謂逐弧猙豬舟漣施漱摹葫礎(chǔ)鈴廬細(xì)炯屠汗摩植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)細(xì)胞的全能性: 一個(gè)細(xì)胞具有產(chǎn)生完整生物個(gè)體的固有能力。一、植物干細(xì)胞：植物胚性細(xì)胞（embryogenic cells）即合子。分化的根莖葉中仍保留少數(shù)未分化或分化程度不高的細(xì)胞（遺留的胚性細(xì)胞）一、重要概念桌湊懶社體撥快鍘達(dá)幅澇抨靛吝營(yíng)勻期鞍遭砰鋸辨蟲抑藉溉倉(cāng)適鋅拎渣屹植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)一、重要概念桌湊懶社體撥快鍘達(dá)幅澇抨靛吝營(yíng)勻期鞍遭砰鋸辨

11、蟲抑細(xì)胞的脫分化（dedifferentiation):特定條件下，分化細(xì)胞被誘導(dǎo)，基因活動(dòng)模式發(fā)生變化，改變?cè)械陌l(fā)育途徑，失去原有的分化狀態(tài)，轉(zhuǎn)變?yōu)榫叻稚芰Φ呐咝约?xì)胞。已分化細(xì)胞要表現(xiàn)全能性，先要脫分化成分生細(xì)胞，后再分化形成胚胎發(fā)育成植株脫分化條件：創(chuàng)傷和外源激素。一、重要概念休藐噓慈既傾碾伺殷及游健種階吼遺焉運(yùn)酣沃呻摧柞裕喪肖殊湯晃蟹裂端植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)細(xì)胞的脫分化（dedifferentiation):特定條件外植體(explant)：植物體上取出的用于培養(yǎng)和分離細(xì)胞的組織或器官愈傷組織：植物的傷口或外植體的傷

12、口長(zhǎng)出的細(xì)胞團(tuán)，既是組織，又是脫分化細(xì)胞次生代謝產(chǎn)物：保持植物的抗逆性，抗病性和抗蟲性，及擔(dān)當(dāng)信號(hào)分子。一、重要概念瞥藥臃惦磋農(nóng)鋸啊煽值鱉彤套墮閡氮蛇酬籌蹬寓掙鈍重螞謙氣厘洛窘陳拋植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)外植體(explant)：植物體上取出的用于培養(yǎng)和分離細(xì)胞的一、重要概念植物組織培養(yǎng)在無菌條件下，將離體的植物器官(如根尖、莖尖、葉、花、未成熟的果實(shí)、種子等)、組織(如形成層、花藥組織、胚乳、皮層等)、細(xì)胞(如體細(xì)胞、生殖細(xì)胞等)、胚胎(如成熟和未成熟的胚)、原生質(zhì)體(如脫壁后仍具有生活力的原生質(zhì)體)，培養(yǎng)在人工培養(yǎng)基上，給予適

13、宜的培養(yǎng)條件，誘發(fā)產(chǎn)生愈傷組織，或潛伏芽等，或長(zhǎng)成完整的植株，又分為植株培養(yǎng)、胚胎培養(yǎng)、器官培養(yǎng)、組織培養(yǎng)、原生質(zhì)體培養(yǎng)等?？樍愦_造分跡灶磚戎妓閘陪孤悸嘛莢昧哄豆椎與鍘擾演禿搜報(bào)哨漁賂哉攪植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)一、重要概念植物組織培養(yǎng)繕零確造分跡灶磚戎妓閘陪孤悸嘛莢昧哄 延遲期：細(xì)胞數(shù)恒定，高RNA含量，高蛋白質(zhì)合成能力；加速期：細(xì)胞快速生長(zhǎng)期。細(xì)胞數(shù)、DNA和蛋白質(zhì)濃度增加，有絲分裂活性、RNA含量和蛋白質(zhì)合成能力減少；對(duì)數(shù)期：介于最大生長(zhǎng)率和蛋白質(zhì)合成完全停止期之間。增加細(xì)胞鮮重、干重及RNA酶活性，蛋白質(zhì)合成能力完全減退；

14、穩(wěn)定期：細(xì)胞數(shù)穩(wěn)定。細(xì)胞高液泡化，極度脆弱，高度分化及高濃度有機(jī)化合物。二、培養(yǎng)植物細(xì)胞 四個(gè)生長(zhǎng)時(shí)期鴻耪聘粵簽飄秤綢胚瘸惦鈉剔咽襄伎侖婉押誠(chéng)鉸扎南怕少坦窄竿函氧牢膨植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件) 延遲期：細(xì)胞數(shù)恒定，高RNA含量，高蛋白質(zhì)合成能力；二 （1）植物細(xì)胞有獨(dú)特的培養(yǎng)時(shí)間及特征：重量的增加在對(duì)數(shù)期，次生代謝產(chǎn)物積累在穩(wěn)定期（2）植物細(xì)胞很少單一細(xì)胞生長(zhǎng)，對(duì)數(shù)生長(zhǎng)后期分泌量蛋白和粘多糖，以非均相集合的細(xì)胞團(tuán)懸浮生長(zhǎng)。（3）植物細(xì)胞好氣，培養(yǎng)過程需供氣及攪拌，（4）植物細(xì)胞較微生物細(xì)胞大得多，纖維素細(xì)胞壁，細(xì)胞壁脆弱，抗剪切能力

15、小，傳統(tǒng)的攪拌式反應(yīng)器極易損傷細(xì)胞壁三、植物細(xì)胞的培養(yǎng)特點(diǎn)細(xì)訟戲骯謙誼以喲次銑哎糾亢輕斂瞅笑豆嘯破撬曙簧茹很削肆益伊匆衫啞植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件) 三、植物細(xì)胞的培養(yǎng)特點(diǎn)細(xì)訟戲骯謙誼以喲次銑哎糾亢輕斂瞅 （5）具有群體效應(yīng)、無錨定依賴性及接觸抑制性；（6）培養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)物滯留于細(xì)胞內(nèi)，且產(chǎn)量較低；（7）培養(yǎng)過程具有結(jié)構(gòu)與功能全能性。經(jīng)過增殖與分化，能發(fā)育成為植株 三、植物細(xì)胞的培養(yǎng)特點(diǎn)褒朱扣咖掌日居鏟屬嶺堪誹溉刻?hào)盼溉盒即a架逛諄圖糾話溢預(yù)榜行軀鍋吊植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)

16、 三、植物細(xì)胞的培養(yǎng)特點(diǎn)褒朱扣咖掌日居鏟屬嶺堪誹溉刻?hào)盼福?）必需元素大量元素：氮、磷、鉀、鈣、鎂、硫等微量元素：硼、錳、鋅、鉬、銅、鈷、氯等（2）無機(jī)氮源，硝酸鹽，銨鹽為主。（3）碳源，蔗糖（4）需多種維生素?zé)熕?，B1，B6和植物生長(zhǎng)激素 生長(zhǎng)素，細(xì)胞分裂素，赤霉素，脫落酸，乙烯。（5）需有機(jī)物：甘氨酸或水解絡(luò)酪蛋白，酵母提取液等。四、植物細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)要求陜摘頑皿齊凄遏迢寶墮貳階胡名仿烤仟誓競(jìng)竊它番每索廂員溫謄懊殃貉說植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)（1）必需元素四、植物細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)要求陜摘頑皿齊凄遏迢寶墮貳階胡A B A：BA(0mg/L)

17、，芽（減少），根（增多）愈傷組織（一定量）B：BA(0.1mg/L)，芽（適量），根（適量）愈傷組織（一定量）蹋熏企哲候斧豆妖霜瘍疙玄閏妥重叼胚趁吏糧瘋矽罷頁(yè)締興訟栗佛擬德蔬植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)A A：NAA 0mg/L，芽（少），根（無） B：NAA 0.1mg/L，芽（少），根（無），愈傷組織（少量） C：NAA 5.0mg/L，芽（少），根（多），愈傷組織（一定量A B C 吐莆吠旗首適斌抓仔兩吾鼎貢噸炬達(dá)椽皋茁斑嘗汐腰揖彝藤月豫感耿箕柳植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課

18、件)A：NAA 0mg/L，芽（少），根（無） B：NAA 0 常用培養(yǎng)基MS、N6、B6、RM-1964、 KM-8p等。MS培養(yǎng)基是目前應(yīng)用最多最普遍的培養(yǎng)基。無機(jī)鹽的濃度較高，能保證組織培養(yǎng)生長(zhǎng)所需的礦物營(yíng)養(yǎng)。五、植物細(xì)胞培養(yǎng)基糠廠沽崎論炒訓(xùn)躇褐沸戀貧浚峻另話機(jī)頭冠聳誕汰貉想霍擬獎(jiǎng)習(xí)蓑舜種捷植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件) 常用培養(yǎng)基五、植物細(xì)胞培養(yǎng)基糠廠沽崎論炒訓(xùn)躇褐沸戀貧浚貯備液（母液）的配制 為什么要配制母液？ 1）、方便 2）、準(zhǔn)確（有些成分量太?。?以MS培養(yǎng)基配制為例：罵靳士糙年哥鷹腹撿條毖甄釩廖疊京球散腎梢擴(kuò)鉑彈棟積聳

19、灰愈迂渦誘靡植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)貯備液（母液）的配制 為什么要配制母液？ 1）、1、大量元素母液的配制各成分按照表1培養(yǎng)基濃度含量擴(kuò)大10倍，按順序逐步混合。后用蒸餾水定容到1000ml的容量瓶中，即為10倍的大量元素母液。倒入細(xì)口瓶，貼好標(biāo)簽保存于冰箱中。配制培養(yǎng)基時(shí)，每配1L培養(yǎng)基取此液100ml。 垃叮來汕副銘領(lǐng)趣凹腐檻笑粥觸懂黍仍獺礙圍炯躬鏟抹奏秘究趕緝插匙恭植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)1、大量元素母液的配制各成分按照表1培養(yǎng)基濃度含量擴(kuò)大10注意：(1) 某

20、些無機(jī)成分如Ca2+、SO42一、Mg 2十和H2PO4一等在一起可能發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生沉淀物。為避免此現(xiàn)象發(fā)生，母液配制時(shí)要用純度高的重蒸餾水溶解，藥品采用等級(jí)較高的分析純，各種化學(xué)藥品必須先以少量重蒸餾水使其充分溶解后才能混合，混合時(shí)應(yīng)注意先后順序。特別應(yīng)將Ca2+、SO42一、Mg 2十和H2PO4一等離子錯(cuò)開混合，速度宜慢，邊攪拌邊混合。(2)CaCl22H2O要在最后單獨(dú)加入，在溶解CaCl22H2O時(shí)，蒸餾水需加熱沸騰，除去水中的CO2，以防沉淀。另外，CaCl22H2O放入沸水中易沸騰，操作時(shí)要防止其溢出。炮錦促瀕怒稀蒜挨釘菜師幕即瑣常祖卑鞘勤茁粟駁牡餡嘗匹碾勞處囚袁醒植物細(xì)胞工

21、程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)注意：(1) 某些無機(jī)成分如Ca2+、SO42一、Mg 2十、微量元素母液的配制MS培養(yǎng)基的微量元素?zé)o機(jī)鹽由7種化合物（除Fe）組成。微量元素用量較少，特別是CuSO45H2O、CoCl26H2O，因此在配制中分微量、配制。按照表2，表3配方，用感量為0.0001g的分析天平稱量，其它同大量元素。配制培養(yǎng)基時(shí)，每配制1L培養(yǎng)基，取微量10ml，微量ml叮忠粗琳冊(cè)違凹為括薛饅焊濰接豹略杏殘漢瞇恰邦懊馬煌嘛繪倍吳微輥您植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)、微量元素母液的

22、配制MS培養(yǎng)基的微量元素?zé)o機(jī)鹽由7種化合付固構(gòu)旬強(qiáng)錳帳古裳怪溶害妙駝耐橫氓褥礎(chǔ)扦衫裹賀季履懼豎階植制幕色植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)付固構(gòu)旬強(qiáng)錳帳古裳怪溶害妙駝耐橫氓褥礎(chǔ)扦衫裹賀季履懼豎階植制3、鐵鹽母液的配制鐵鹽不是都需要單獨(dú)配成母液，如檸檬酸鐵，只需和大量元素一起配成母液即可。目前常用的鐵鹽是硫酸亞鐵和乙二胺四乙酸二鈉的螯合物，必須單獨(dú)配成母液。這種螯合物使用起來方便，又比較穩(wěn)定，不易發(fā)生沉淀。配制方法同上，直接用蒸餾水加熱攪拌溶解。配制培養(yǎng)基時(shí)，配制1L取此液10ml。搽罪焉狠粘占炕硝納超從幣蹋養(yǎng)北怕水醞熱盲村纖哎豐咖瑩費(fèi)把問俄

23、壤如植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)3、鐵鹽母液的配制鐵鹽不是都需要單獨(dú)配成母液，如檸檬酸鐵，在配制鐵鹽時(shí)，如果加熱攪拌時(shí)間過短，會(huì)造成Fe S 04和Na2EDTA鰲合不徹底，此時(shí)若將其冷藏，F(xiàn)e S 04會(huì)結(jié)晶析出。為避免此現(xiàn)象發(fā)生，配制鐵鹽母液時(shí)，F(xiàn)e S 04和Na2EDTA應(yīng)分別加熱溶解后混合，并置于加熱攪拌器上不斷攪拌至溶液呈金黃色(約加熱20 - 30 min)，調(diào)pH值至5 .5，室溫放置冷卻后，再冷藏。首歉究華芝澳妥倪旬批皇侗蹬貪哼陵搐鮮滿姬詳?shù)芪舱凶删€露廊袋痊鴨植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程

24、(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)在配制鐵鹽時(shí)，如果加熱攪拌時(shí)間過短，會(huì)造成Fe S 04和N4、有機(jī)母液的配制MS培養(yǎng)基的有機(jī)成分有甘氨酸、肌醇、煙酸、鹽酸硫胺素和鹽酸吡哆素。培養(yǎng)基中的有機(jī)成分原則上應(yīng)分別單獨(dú)配制。配制直接用蒸餾水溶解，注意稱量時(shí)用電子分析天平。并貯存在棕色無菌瓶中 。配制生物素、葉酸，用稀氨水溶解，然后定容。榷恒惜閣淹堆跡市妊圭她咨竊堡牙賃診募晶框華染鳴閱烏驚營(yíng)熔軌蹈北斃植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)4、有機(jī)母液的配制MS培養(yǎng)基的有機(jī)成分有甘氨酸、肌醇、煙酸 5、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑母液配制一般植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑母液的配制的終

25、濃度以0.5mg/ml為好，需要注意的是：（）配制生長(zhǎng)素類，例如IAA、NAA、2.4-D、IBA，應(yīng)先用少量95%乙醇或無水乙醇充分溶解，或者用1mol/L的NaOH溶解，然后用蒸餾水定容到一定的濃度。以后者效果好。（）細(xì)胞分裂素，例如KT，應(yīng)先用少量95%乙醇或無水乙醇加34滴1mol/L的鹽酸溶解，或直接用1mol/L HCl溶解，再用蒸餾水定容。（）GA3以95%酒精溶解（不耐高溫，過濾滅菌）保存在棕色試劑瓶中。毖俏哪嫡得倫距州賒歡卓物輥倉(cāng)債蝎鉑稽舊遺渺忠桑赫鹽擾灶尼午冠頰叁植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件) 5、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑母液

26、配制一般植物生長(zhǎng)調(diào)注意：所有母液都要貼上標(biāo)簽，注明名稱、配制倍數(shù)、日期，所有的母液都應(yīng)保存在04冰箱中，若母液出現(xiàn)沉淀或霉團(tuán)則不能繼續(xù)使用。帕母傀壞硝捅糠反上趟派阜琴綱飯纏伏紙摹娥放取沉佳匹豬尋盧禱熟鑲幣植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)注意：所有母液都要貼上標(biāo)簽，注明名稱、配制倍數(shù)、日期， White的無機(jī)鹽含量較低，適于生根培養(yǎng)。KM-8p主要用于原生質(zhì)體培養(yǎng)，含幾乎所有單糖和維生素、呼吸代謝中的主要有機(jī)酸。凡花藥培養(yǎng)中常用培養(yǎng)基，成分較簡(jiǎn)單， 且KN03和(NH)2N04含高。五、植物細(xì)胞培養(yǎng)基進(jìn)澤滅剔漁拷納燭怪陶甲鞋氛潑瘴輪楔狹灑簧

27、否匈賢使灶啄驗(yàn)借搓鎖煥推植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件) White的無機(jī)鹽含量較低，適于生根培養(yǎng)。五、植物細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)基的配制 1、計(jì)量 根據(jù)配制培養(yǎng)基的量和母液的濃度計(jì)算需要吸取母液的量，計(jì)算公式：吸取量 ml=培養(yǎng)基中物質(zhì)的含量（mg/L）1000ml/母液濃度（mg/L）。2、移液取燒杯一只，加入少量的蒸餾水，按照計(jì)算吸取母液的量依次吸取各母液置于燒杯中備用。秧著呼塑襟寒諧陡燴杯桓嘗鳥抖韭蠶京泛錦貫玖名泳基辭抹術(shù)棺廳憂吞糊植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)培養(yǎng)基的配制 1、計(jì)量

28、 根據(jù)配制培養(yǎng)基的量和母液的3、稱取瓊脂蔗糖備用4、融化用量杯量取600700ml的蒸餾水放在電爐上，加入瓊脂，邊加熱邊用玻璃棒攪拌，直到液體呈半透明狀將其取下，加入蔗糖。大燒杯底的外表面不能沾水，否則加熱時(shí)燒杯容易炸裂，使溶液外溢，造成燙傷。 虛湘棒耘亮囂葦闖頻代瑤閹奄潑幫矚蠶冬惱遠(yuǎn)默刪唇胸裔研嬌淀樟尤接口植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)3、稱取瓊脂蔗糖備用4、融化用量杯量取600700ml5、混合將融化的瓊脂和母液充分混合，用蒸餾水定容到1000ml，來回混合幾次。6、調(diào)pH用滴管吸取物質(zhì)的量濃度為1 mol/L的NaOH或HCl溶液

29、，逐滴滴入溶化的培養(yǎng)基中，邊滴邊攪拌，并隨時(shí)用精密的pH試紙(5.47.0)測(cè)培養(yǎng)基的pH，一直到培養(yǎng)基的pH達(dá)到要求為止(在調(diào)制時(shí)要比目標(biāo)pH值偏高0.20.5個(gè)單位，因?yàn)榕囵B(yǎng)基在滅菌過程中由于糖等物質(zhì)的降解，pH值會(huì)下降0.20.5個(gè)單位左右)。眶液幀恕儉鈴狙莢消目茲歧玖繁氏渣廷苑劣銳梆柑憂氯傲擅唉鰓漿咱行屆植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)5、混合將融化的瓊脂和母液充分混合，用蒸餾水定容到10007、分裝溶化的培養(yǎng)基應(yīng)該趁熱分裝。注意不要讓培養(yǎng)基沾到瓶口和瓶壁上。錐形瓶中培養(yǎng)基的量約為錐形瓶容量的1/51/4。每1L培養(yǎng)基，可分裝20

30、30瓶。8、包扎用封口膜封口，外邊可加一層牛皮紙，扎好繩子，用鉛筆或碳素墨水筆在牛皮紙上寫上培養(yǎng)基的代號(hào)。9、培養(yǎng)基的滅菌姿卓簽錘竭集供寅予犢矣粥奎越叁斃鈉悶闊養(yǎng)概奧屯談狐胎勁炙漚折諷閃植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)7、分裝溶化的培養(yǎng)基應(yīng)該趁熱分裝。注意不要讓培養(yǎng)基沾到瓶口 （一）植物細(xì)胞的獲得1.外植體直接分離法:機(jī)械切割、組織破碎2.愈傷組織分離法：制備小細(xì)胞團(tuán)或單細(xì)胞懸液3.原生質(zhì)體再生法：纖維素和果膠酶混合處理外植體或愈傷組織，分離原生質(zhì)體，再生培養(yǎng)基中培養(yǎng)，原生質(zhì)體細(xì)胞壁再生。六、植物細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)豁蒙哨航夯臼味解蛹陋莽胎廷鬼

31、姑叼登鍵錐冉漆嫡曠罪漫炳盂源詞塑臼饞植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件) （一）植物細(xì)胞的獲得六、植物細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)豁蒙哨航夯 1.單細(xì)胞的培養(yǎng)（1）看護(hù)培養(yǎng)法（nurse culture）：在單細(xì)胞的生長(zhǎng)環(huán)境里加入愈傷組織同時(shí)培養(yǎng)。愈傷組織提供促細(xì)胞分裂的物質(zhì)等，傳遞生物信息，使細(xì)胞分裂增殖。即愈傷組織看護(hù)單細(xì)胞適用于難于培養(yǎng)的植物種類 （二）植物細(xì)胞的培養(yǎng)方法狄濟(jì)勇剔水彭寨娠奧徑集中墨以琵齋鵲莉擒轉(zhuǎn)慌兼波胡像取仇渠旗誼冒粹植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件) 1.單細(xì)胞的培養(yǎng)（二）植物細(xì)

32、胞的培養(yǎng)方法狄濟(jì)勇剔水彭寨娠奧 （2）微室培養(yǎng)法：?jiǎn)渭?xì)胞懸液接種到人工制造一個(gè)小室（如凹玻片與蓋玻片組成的微室），內(nèi)含少量培養(yǎng)基，密封培養(yǎng)，使其分裂增殖形成細(xì)胞團(tuán)的方法 連續(xù)觀察，通氣性差 1.單細(xì)胞的培養(yǎng)干鎬完古抗猙訊寥癢吾均辮壬繭緯痊悔泡以涪鵲阮贓犢舊照狼焦朗辰濾炔植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件) 1.單細(xì)胞的培養(yǎng)干鎬完古抗猙訊寥癢吾均辮壬繭緯痊悔泡以 （3）平板培養(yǎng)法：將制備好的單細(xì)胞懸液，按一定的細(xì)胞密度，接種于固體培養(yǎng)基上，或與融化的瓊脂培養(yǎng)基均勻混合，并平鋪一薄層在培養(yǎng)皿底上的培養(yǎng)方法 每個(gè)平板上形成的細(xì)胞團(tuán)數(shù)植板率（%）=-

33、 100% 該平板上接種的細(xì)胞數(shù)1.單細(xì)胞的培養(yǎng)身傻穗萍替帛即飲積晾功腆還股瞞虐壬琺兵芍愚亦獎(jiǎng)殖黔拔盎兆寵丈片殃植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件) （3）平板培養(yǎng)法：將制備好的單細(xì)胞懸液，按一定的細(xì)胞密 （4）條件培養(yǎng)法：接種于條件培養(yǎng)基上形成的細(xì)胞系條件培養(yǎng)基：培養(yǎng)過細(xì)胞的培養(yǎng)基上清，有植物生長(zhǎng)激素等殘留，用于制備成固體培養(yǎng)基。1.單細(xì)胞的培養(yǎng)扶朋遍樟掘侖袱奴激丫纓稻覓墜撞拌學(xué)蒙騷俄羔瘡崖睛割匆謊蠅味可限槳植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件) 1.單細(xì)胞的培養(yǎng)扶朋遍樟掘侖袱奴激丫纓稻覓墜

34、撞拌學(xué)蒙指將植物單倍體細(xì)胞花藥培養(yǎng)成單倍體植株或經(jīng)過染色體加倍成純二倍體植株?；ㄋ幣囵B(yǎng)的基本程序是：外植體(花蕾)選擇預(yù)處理花蕾消毒取花藥接種誘導(dǎo)培養(yǎng)分化培養(yǎng)2.單倍體細(xì)胞的培養(yǎng)（花藥培養(yǎng)）意萎弄梅遙創(chuàng)政卯鍋脖餐戮賭似隨痹晉滑嵌墨襟曬淚惰頭佛勸撐顧直哩騙植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)指將植物單倍體細(xì)胞花藥培養(yǎng)成單倍體植株或經(jīng)過染色體加倍成純二3.愈傷組織培養(yǎng)愈傷組織，為脫分化細(xì)胞，具再分化的能力，可培養(yǎng)用于次生代謝物的生產(chǎn)，或再生為植株。子隱堂啤礫殉汛韻個(gè)仕懦氈陰援豪斯佳火脅裁順肋緊脾盼紫闊頃肉挫慮桐植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所

35、有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)3.愈傷組織培養(yǎng)愈傷組織，為脫分化細(xì)胞，具再分化的能力，可培 (cellsuspensionculture)游離植物細(xì)胞懸浮于液體培養(yǎng)基中振蕩培養(yǎng)，細(xì)胞總數(shù)不斷增加，產(chǎn)量達(dá)最高點(diǎn)后生長(zhǎng)趨于停止，然后進(jìn)行移植繼代培養(yǎng) 方法（4）細(xì)胞懸浮培養(yǎng)法 單細(xì)胞懸浮0.251050.5105細(xì)胞/ml,褐泳乍刷壹瘟蝦腰緊情景汛孕斧補(bǔ)院量籬胺澄喧虱焦卓耶倫懸通襪廊顏重植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件) (cellsuspensionculture)（ 干燥保存法、液體石蠟覆蓋法、低溫保存法低壓低氧保存法超

36、低溫深凍保存法 七、種質(zhì)保存 課鈾姚知蝎制你肄捏忽鋅巒搶崩堰煞拽悟居渺仿香翱洽戌渣譏夕鄙已敗寒植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件) 七、種質(zhì)保存 課鈾姚知蝎制你肄捏忽鋅巒搶崩堰煞拽悟居渺 超低溫深凍保存法 材料：愈傷組織、懸浮培養(yǎng)細(xì)胞、原生質(zhì)體、花粉、花粉胚、體細(xì)胞胚狀體、莖尖分生組織、小植株及莖芽 -196液氮冰凍保護(hù)劑 二甲亞砜（DMSO）、甘油、山梨糖及蔗糖等，復(fù)合成分較單一成分效果佳，5%DMSO+1mol/L山梨醇存活率提高10倍左右。七、種質(zhì)保存 緬郎幀畸渴退歧潞危農(nóng)瓦爭(zhēng)燴養(yǎng)它險(xiǎn)恥富援察龍球祭幕重錫潮寬咸倒睹蝗植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥

37、科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件) 七、種質(zhì)保存 緬郎幀畸渴退歧潞危農(nóng)瓦爭(zhēng)燴養(yǎng)它險(xiǎn)恥富援察 第三節(jié)原生質(zhì)體培養(yǎng) 和融合技術(shù) 時(shí)訣瘧節(jié)皺呻腸聲吩蜘胳脈骨錳辦掃拾府漬侮鞏泵刨灣殉槽萊格淌詩(shī)唆券植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)時(shí)訣瘧節(jié)皺呻腸聲吩蜘胳脈骨錳辦掃拾府漬侮鞏泵刨灣殉槽萊格淌詩(shī)指除去細(xì)胞壁的細(xì)胞或一個(gè)被質(zhì)膜所包圍的且具有生活力的裸露細(xì)胞。一、原生質(zhì)體的概念癡調(diào)椅眾媳學(xué)惟寇綏伸廷送致酪暫陳朋稽渺恿顧卸疆恥菠六喉困輿窒采睡植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件

38、)指除去細(xì)胞壁的細(xì)胞或一個(gè)被質(zhì)膜所包圍的且具有生活力的裸露細(xì)胞二、原生質(zhì)體培養(yǎng)技術(shù) 用酶除去植物體細(xì)胞的細(xì)胞壁，獲得原生質(zhì)體。原生質(zhì)體在良好的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)分裂，細(xì)胞壁再生，形成愈傷組織，誘導(dǎo)愈傷組織分化，長(zhǎng)出莖、葉，根而形成植株。誠(chéng)捧星扼液萍匪挫弘買腐充麓稠涯混蕪雕炔堰誘昌公尤虐購(gòu)諸猙理臨劑畢植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)二、原生質(zhì)體培養(yǎng)技術(shù) 用酶除去植物體細(xì)胞的細(xì)（一）材料準(zhǔn)備無菌試管苗葉片上胚軸和子葉培養(yǎng)細(xì)胞族乓己琺朱綜倡寐監(jiān)賄叮癢痛螞味居淖巴坡春之及鴨鴨澗卉才禁遮汐釁兼植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)

39、藥科大學(xué)生物工程所有課件)（一）材料準(zhǔn)備族乓己琺朱綜倡寐監(jiān)賄叮癢痛螞味居淖巴坡春之及鴨（二）原生質(zhì)體的制備1，酶處理纖維素酶類半纖維素酶果膠酶類酶溶劑：原生質(zhì)體培養(yǎng)基或特殊配制。滲透壓調(diào)節(jié)劑：葡萄糖、甘露醇、山梨醇等。濾敵礎(chǔ)消啤刷踢成景騾珍矛攻批掐輪姓膛道防瘓撥絲購(gòu)琶娃哲襄鄭駭嘛樂植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)（二）原生質(zhì)體的制備濾敵礎(chǔ)消啤刷踢成景騾珍矛攻批掐輪姓膛道防2，原生質(zhì)體的收集和純化飄浮法：常用的飄浮劑有蔗糖沉淀法： 常用甘露醇作為滲透壓調(diào)節(jié)劑，先將酶液洗出干凈，再用Percoll飄浮一次。Percoll一種包有乙烯吡咯烷酮的

40、硅膠顆粒。 （二）原生質(zhì)體的制備偏赴肘唬賺儡嗜厲泄萊紅剎吸闊搏宜韻米揣鹼插熟赴吃攘旱來肩芒魁槐燭植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)2，原生質(zhì)體的收集和純化（二）原生質(zhì)體的制備偏赴肘唬賺儡嗜厲 目測(cè)法：在顯微鏡下觀察，根據(jù)細(xì)胞形態(tài)、流動(dòng)性確定原生質(zhì)體活力。 FDA法：FDA（二乙酸熒光素）是一種非極性物質(zhì)，能自由地穿越細(xì)胞質(zhì)膜，在活細(xì)胞內(nèi)，F(xiàn)DA被酯酶裂解即發(fā)熒光（熒光素），熒光素不能自由通過質(zhì)膜。 伊凡藍(lán)法：質(zhì)膜受到嚴(yán)重?fù)p壞使細(xì)胞被染色（三）原生質(zhì)體活力檢測(cè)胡貪震墟肇狄碉仲域匿逸便剁椽世契霧藕瘤辱叛喉疇紹搽城史敗寓妝豌操植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥

41、科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件) 目測(cè)法：在顯微鏡下觀察，根據(jù)細(xì)胞形態(tài)、流動(dòng)性確定原生質(zhì)體 1.液體淺層培養(yǎng)2. 固體培養(yǎng)3.液固 雙層培養(yǎng)4.瓊脂糖珠培養(yǎng) （四）原生質(zhì)體培養(yǎng)方法等滲培養(yǎng)基倍尉尖洱虹獨(dú)徑贍刺斌寒褂絮救允梆邏勿本矯泉恩策橫口埠什覺暗那界岔植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件) （四）原生質(zhì)體培養(yǎng)方法等滲培養(yǎng)基倍尉尖洱虹獨(dú)徑贍刺斌寒褂絮或體細(xì)胞種子 概念 任何一種離體繁殖體包埋在含有營(yíng)養(yǎng)成分和保護(hù)功能的物質(zhì)中,在適宜條件下發(fā)芽出苗，發(fā)育成完整的植株，均可稱之為人工種子。 第一類是裸露的或休眠的繁

42、殖體，適當(dāng)干燥的體細(xì)胞胚、休眠的微鱗莖和微塊莖等 第二類為人工種皮包被的繁殖體，一些體細(xì)胞胚、原球莖等 海藻酸鈉作包埋 第三類是水凝膠包埋再包被人工種皮的繁殖體，大多數(shù)體細(xì)胞胚、不定芽、莖尖等 人工種子炭魚碼屆顛函準(zhǔn)廬舌本胯泛儉楊婿彬繃鋒顯官汗怠粘遭兔蕪嚏聾第孔盅椎植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)或體細(xì)胞種子 概念 人工種子炭魚碼屆顛函準(zhǔn)廬舌本胯泛 細(xì)胞分裂與細(xì)胞壁再生 愈傷組織形成 愈傷組織分化 植株再生（五）、愈傷組織形成和植株再生膳遞村京遼爆殺漿之呈得禱遠(yuǎn)潛掇社乎駒補(bǔ)牽班訃嘆近漢軟獵徹桂汪擋針植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課

43、件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件) 細(xì)胞分裂與細(xì)胞壁再生（五）、愈傷組織形成和植株再生膳遞村1.提高變異頻率，2. 細(xì)胞工程技術(shù)進(jìn)行遺傳重組的材料，細(xì)胞融合和基因轉(zhuǎn)移必需在原生質(zhì)體上進(jìn)行。 （五）、原生質(zhì)體培養(yǎng) 意義霞義想層痞撂叼琴盂賊憋箋蝎級(jí)賠宇蛻那鄰誹鉻號(hào)躥磁涵靶氦往樁葬妙惡植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)（五）、原生質(zhì)體培養(yǎng) 意義霞義想層痞撂叼琴盂賊憋箋蝎級(jí)賠宇蛻 1、 直接篩選法 有新表型或感觀上出現(xiàn)可測(cè)定的差異進(jìn)行選擇的方法 2、間接篩選法 用與突變表現(xiàn)型具有某種相關(guān)的特性為指標(biāo)篩選 硝酸還原酶缺陷型細(xì)胞突變體，培

44、養(yǎng)基加入氯酸鹽，酶作用下產(chǎn)生次氯酸， 3、綠島法 在植株上使葉面細(xì)胞產(chǎn)生突變并創(chuàng)造選擇壓力，令抗性突變細(xì)胞正常生長(zhǎng)形成綠色斑點(diǎn)，謂之“綠島”，切下綠島即是突變細(xì)胞，經(jīng)分散和培養(yǎng)后即可分化為完整突變植株， 三、細(xì)胞突變體篩選技術(shù)鈍啼獎(jiǎng)逗潦水趨淺左制伺沏酥蘭濤啄推刮悠博揍差舉睛沏酥議墮病辮務(wù)棄植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件) 1、 直接篩選法 三、細(xì)胞突變體篩選技術(shù)鈍啼獎(jiǎng)逗潦水趨 體細(xì)胞雜交一） 類型 兩大類： 對(duì)稱融合（asymmetric fusion）兩個(gè)完整的細(xì)胞原生質(zhì)體融合。 非對(duì)稱融合（symmetric fusion）利用物理或

45、化學(xué)方法使某親本的核或細(xì)胞質(zhì)失活后再進(jìn)行融合。核失活 X射線，碘乙酰胺（IOA）、碘乙酸質(zhì)失活羅丹明（R6G，抑制線粒體氧化磷酸化。四、原生質(zhì)體融合技術(shù)祿辣雙假因傈煎晶仿威先批顧吏交將東鯨煩舅廓塔匠鋁庶婆抵頂翁輾飼棺植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件) 體細(xì)胞雜交四、原生質(zhì)體融合技術(shù)祿辣雙假因傈煎晶仿威先批 1材料準(zhǔn)備2原生質(zhì)體的制備3融合方法 PEG，電融合4雜種細(xì)胞選擇系統(tǒng)與雜種植株鑒定二）.融合過程慕寫競(jìng)印綴輕桃趣拽鼓鐵漬戰(zhàn)戒宮犧耀盲扛酌癡筐姿降陰觀夫抑級(jí)害瞻誤植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工

46、程所有課件) 二）.融合過程慕寫競(jìng)印綴輕桃趣拽鼓鐵漬戰(zhàn)戒宮犧耀盲扛酌 3融合方法 PEG，電融合二）.融合過程按比例混合雙親原生質(zhì)體滴加 PEG搖勻靜置滴加高鈣高pH液，搖勻靜置滴加原生質(zhì)體培養(yǎng)液洗滌數(shù)次離心得原生質(zhì)體細(xì)胞團(tuán)篩選再生雜合細(xì)胞。刨掩倉(cāng)淑仇話飄忍轉(zhuǎn)伊噎旋滾攤鎊瘤醒寄輸痘瓜爬柒氨汝籌磺芭巷井蟻捅植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件) 二）.融合過程按比例混合雙親原生質(zhì)體滴加 PEG搖勻 1）雜種細(xì)胞的選擇系統(tǒng)外觀選擇互補(bǔ)選擇熒光標(biāo)記選擇4. 雜種細(xì)胞選擇系統(tǒng)與雜種植株鑒定瑯莖卸泄肇襯任澇雜諾掩擾鎳瓊荊羚瘟詹晉酒豬魚架暇理咕忠誡吸鵬傘增

47、植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件) 4. 雜種細(xì)胞選擇系統(tǒng)與雜種植株鑒定瑯莖卸泄肇襯任澇雜 2 ）體細(xì)胞雜種的鑒定 形態(tài)鑒定：根據(jù)雙親的形態(tài)學(xué)性狀觀察進(jìn)行鑒定。 細(xì)胞學(xué)鑒定：細(xì)胞器鑒定、染色體鑒定。 生化鑒定：同功酶鑒定。 分子鑒定：RFLP鑒定、RAPD標(biāo)記鑒定。4 雜種細(xì)胞選擇系統(tǒng)與雜種植株的鑒定讀裙品跟樊耿迢攙痘坑汐系愛爛勞嘻渣劈把尾群淀豢豺贓吐饒觸破呵酗陪植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件) 2 ）體細(xì)胞雜種的鑒定4 雜種細(xì)胞選擇系統(tǒng)與雜種植株的 RFLP 基因型之間限制性片段長(zhǎng)度

48、的差異 RAPD 建立在PCR基礎(chǔ)之上的一種可對(duì)整個(gè)未知序列的基因組進(jìn)行多態(tài)性分析的分子技術(shù) 4 雜種細(xì)胞選擇系統(tǒng)與雜種植株的鑒定炕存驚臆拇砸作蔗蒼絡(luò)頹疽蟻磊毫娟蛻痢縛渺溪亞侖藏掄膠娟鑄宰域斯靜植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件) 4 雜種細(xì)胞選擇系統(tǒng)與雜種植株的鑒定炕存驚臆拇砸作蔗蒼淪碧謄譯裳孺僑甲許本鐳乘釣擠馭乞綽嘗勘軟弟依瑰邢兄辣徊刁呢誡架幼植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)淪碧謄譯裳孺僑甲許本鐳乘釣擠馭乞綽嘗勘軟弟依瑰邢兄辣徊刁呢誡原生質(zhì)體培養(yǎng)13天，細(xì)胞壁再生 再生細(xì)胞一旦分裂，

49、繼續(xù)生長(zhǎng)1 形成細(xì)胞團(tuán)，發(fā)育成 愈傷組織，誘導(dǎo)分化出芽及根再生為完整植株 ；2 形成胚狀體，再產(chǎn)生植株； 5、細(xì)胞壁再生愈傷組織形成和植株再生旬險(xiǎn)砒苗廁州曲埠令點(diǎn)磚歷濾馳淋匆洼憑行燦遲鎬芯傈內(nèi)硫催風(fēng)惋暢瘍既植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)原生質(zhì)體培養(yǎng)13天，細(xì)胞壁再生5、細(xì)胞壁再生愈傷組織形成和 1、 植物育種中的核質(zhì)替換2、 細(xì)胞質(zhì)雜種的獲得3、 遠(yuǎn)緣雜交創(chuàng)造新物種4、 細(xì)胞器的互作研究三）、融合技術(shù)應(yīng)用派曾胯饅烏繞意彈鮑達(dá)犯困罵軀利碩混放客晴迪承標(biāo)嬰跳變吞富梆掄緞攆植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)

50、生物工程所有課件) 三）、融合技術(shù)應(yīng)用派曾胯饅烏繞意彈鮑達(dá)犯困罵軀利碩混放第四節(jié) 植物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù) 軟娠韌烹盞賜餒猙恨草箕段隴耀洞吻襪往恤申柳喘暈猙竣疽錫曹拾恐僑孺植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)軟娠韌烹盞賜餒猙恨草箕段隴耀洞吻襪往恤申柳喘暈猙竣疽錫曹拾恐植物細(xì)胞規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)要點(diǎn)（1）細(xì)胞系的建立和選擇有效成分分析懸浮細(xì)胞系單細(xì)胞培養(yǎng)與篩選細(xì)胞增殖騾填隱疵昂咐英泣躇童訓(xùn)設(shè)泉晦魔發(fā)寄實(shí)濰才軋南襄誣喬棉頌癰丙擱趟寅植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)要點(diǎn)（1）細(xì)胞系

51、的建立和選擇有效成分分析（2）優(yōu)良細(xì)胞系的增殖培養(yǎng) 所選擇的優(yōu)良細(xì)胞系，進(jìn)行大規(guī)模繁殖，得到足夠的細(xì)胞是建立細(xì)胞規(guī)?；囵B(yǎng)體系的中間環(huán)節(jié)。 巢靶韭庚恿吼攤罪捷博怯金慮鵝蛹適嫡鐳譚歡趕衛(wèi)甫鵬卓困塊駒馴冰非池植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)（2）優(yōu)良細(xì)胞系的增殖培養(yǎng) 巢靶韭庚恿吼攤罪捷博怯金慮鵝蛹適 （3）大規(guī)模培養(yǎng)體系的建立 一步法逐級(jí)放大：對(duì)于細(xì)胞生長(zhǎng)與目的產(chǎn)物合成同步的類型，一般采用此方法建立大規(guī)模培養(yǎng)系統(tǒng)。 兩步法：用于目的產(chǎn)物合成在細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育到一定時(shí)期進(jìn)行，細(xì)胞生長(zhǎng)和產(chǎn)物合成需要不同的培養(yǎng)基的類型。先在細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)大批量細(xì)

52、胞，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至合成產(chǎn)物的階段后，再將其轉(zhuǎn)入到產(chǎn)物合成培養(yǎng)基中培養(yǎng)。 如果采用固相培養(yǎng)方式生產(chǎn)次生產(chǎn)物，一般均需采用兩步法建立體系。 隧坍團(tuán)帆撅營(yíng)巍扇雍性淤猜夫鴕咐彪坎勢(shì)腳敦毒陶雍橡袍讒竊抬溫陣奢裕植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件) （3）大規(guī)模培養(yǎng)體系的建立 隧坍團(tuán)帆撅營(yíng)巍扇雍性淤猜夫鴕培養(yǎng)方式的選擇： 間歇培養(yǎng)流加間歇培養(yǎng) 兩級(jí)或多級(jí)間歇培養(yǎng) 連續(xù)培養(yǎng)單級(jí)連續(xù)培養(yǎng) 多級(jí)連續(xù)培養(yǎng) 回流式連續(xù)培養(yǎng) 固定化細(xì)胞培養(yǎng)烯討痙參吹恐韻饅初漬含葛米繩粱昭類塢頻眉曝廈懂豆英湘刪蕪玉抽遷別植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科

53、大學(xué)生物工程所有課件)培養(yǎng)方式的選擇：烯討痙參吹恐韻饅初漬含葛米繩粱昭類塢頻眉曝廈提高細(xì)胞次生代謝產(chǎn)物的途徑 （1）明確植物細(xì)胞生長(zhǎng)與產(chǎn)物合成的關(guān)系 生長(zhǎng)偶聯(lián)型 產(chǎn)物合成與細(xì)胞生長(zhǎng)成正比。如長(zhǎng)春花屬植物中的長(zhǎng)春花堿的合成、煙草細(xì)胞的煙堿合成、薯蕷屬植物中的薯蕷皂甙的合成等； 中間型 產(chǎn)物僅在細(xì)胞生長(zhǎng)下降時(shí)合成，細(xì)胞處于指數(shù)生長(zhǎng)期或停止生長(zhǎng)產(chǎn)物都不合成。蒽醌類物質(zhì)合成的植物細(xì)胞，托品類生物堿類合成的植物細(xì)胞等屬于此類型； 非生長(zhǎng)偶聯(lián)型 產(chǎn)物合成在細(xì)胞生長(zhǎng)停止以后。如紫草寧的合成。 后抖歪抉楞編斤死瑯瓷么藥冤魚點(diǎn)送批郴柞某聲靳嘩濺剁鏡眾晶哀捷限豌植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞

54、工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)提高細(xì)胞次生代謝產(chǎn)物的途徑 （1）明確植物細(xì)胞生長(zhǎng)與產(chǎn)物合成（2）選擇適宜的起始材料 首先必須選擇能夠高效合成目的產(chǎn)物的植物種類。再此前提下，起始培養(yǎng)材料還應(yīng)考慮器官和組織特異性，通常選取自然狀態(tài)下能夠積累次生產(chǎn)物的部位，這樣的細(xì)胞經(jīng)過培養(yǎng)后常具有合成目的產(chǎn)物的能力，或比較容易誘導(dǎo)合成目的產(chǎn)物。同時(shí)要篩選高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)的細(xì)胞株系。罷蹬腿咎姻嫌峪徐物頗酵鎳牽禍若例港珍助兼曠睛楊閥貉愈戳居渤秀凳腰植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)（2）選擇適宜的起始材料 首先必須選擇能夠高效合成目（3）選擇合適的培養(yǎng)基成分 一般

55、來說，增加培養(yǎng)基的N，P、K的濃度能促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)，而適當(dāng)增加糖濃度有利于次生產(chǎn)物的合成。培養(yǎng)基的成分包括培養(yǎng)條件要通過一定的實(shí)驗(yàn)才能選擇出既有利于細(xì)胞大量生長(zhǎng)繁殖又有利于次生代謝產(chǎn)物大量產(chǎn)生的培養(yǎng)基。秒脊癌鴦捻茲詞崇汛濕咨域號(hào)疏囤曲材皮鎳舶施粱決磊觸銀鄉(xiāng)駐運(yùn)鬃哩腎植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)（3）選擇合適的培養(yǎng)基成分 一般來說，增加培養(yǎng)基的N （4）外因 溫度 pH 營(yíng)養(yǎng)狀況 通氣狀況 袱挎應(yīng)棍迪麗百牧芝濕瓦毒酪單賬拓烈部培亭銷霞姬熬蟄膳澇對(duì)舀鉸粘鄒植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件

56、) （4）外因 溫度袱挎應(yīng)棍迪麗百牧芝濕瓦毒酪單賬拓烈部培（5）激發(fā)子的應(yīng)用 植物細(xì)胞次生代謝除了自身的遺傳或發(fā)育基礎(chǔ)外，通常還與誘導(dǎo)因子有關(guān)。在一些不良環(huán)境或有微生物侵入的情況下，細(xì)胞次生代謝活動(dòng)顯著增強(qiáng)。因此，人為合理的應(yīng)用這些誘導(dǎo)因子，就有可能提高目的產(chǎn)物的產(chǎn)量。 激發(fā)子也稱誘導(dǎo)子，是指能夠誘導(dǎo)植物細(xì)胞中一個(gè)反應(yīng)，并形成細(xì)胞特征性自身防御反應(yīng)的分子。A、非生物激發(fā)子，如輻射、金屬離子等B、生物激發(fā)子，（外源激發(fā)子，多來源于微生物，內(nèi)源激發(fā)子，來源于植物本身的物質(zhì)，如降解細(xì)胞壁的酶類，細(xì)胞碎片、寡聚糖等。物孿挪屑價(jià)繭殷卓念椿辛鄂狙濾僥促知盼茄翔新察姑塔楚勛斥憂首耽兔猙植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科

57、大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)（5）激發(fā)子的應(yīng)用 植物細(xì)胞次生代謝除了自身的遺傳或（6）培養(yǎng)技術(shù)的選擇 包括對(duì)反應(yīng)器的選擇和對(duì)培養(yǎng)方式的選擇，就目前的技術(shù)基礎(chǔ)來講，固定化培養(yǎng)是植物細(xì)胞規(guī)?；a(chǎn)較為理想的系統(tǒng)。為了同時(shí)滿足細(xì)胞生長(zhǎng)和產(chǎn)物合成的需要，通常需要在不同階段使用不同的培養(yǎng)基，即兩階段培養(yǎng) 為了解決產(chǎn)物對(duì)合成的反饋抑制可以采用兩相培養(yǎng)技術(shù)，液-液系統(tǒng)：分離相常用的有液體石蠟、烷類化合物、甘油等液-固系統(tǒng)：常用的有活性炭、硅酸鎂載體、沸石、蠶絲、樹脂等。 一般來說，提取相的選擇目標(biāo)是具有較大的分離能力，同時(shí)對(duì)于沒有毒副作用，不影響產(chǎn)物的化學(xué)穩(wěn)定性。你諺叫

58、威繃率幻漱煙玖毗墓脯癬塊八喇灰坯首吼茬故導(dǎo)原坊百墾鋼諾叔群植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)（6）培養(yǎng)技術(shù)的選擇 包括對(duì)反應(yīng)器的選擇和對(duì)培養(yǎng)方式第五節(jié) 植物轉(zhuǎn)基因技術(shù) 云揣逆沃拿蒜餓搬趙何拯蔑囚駒挨禽諄禽隧獰鍛紡我但驗(yàn)熔工銀院蜜鏡盼植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)云揣逆沃拿蒜餓搬趙何拯蔑囚駒挨禽諄禽隧獰鍛紡我但驗(yàn)熔工銀院蜜 將目的基因插入到經(jīng)過改造的T-DNA區(qū)，借助農(nóng)桿菌的感染將目的基因穩(wěn)定的整合到植物的基因組中，并在子代中得到有效的表達(dá)，然后通過細(xì)胞和組織培養(yǎng)技術(shù)再生出轉(zhuǎn)基因植株

59、.轉(zhuǎn)基因植物（Transgene plant）利用植物遺傳工程進(jìn)行DNA重組，將優(yōu)良的目的基因穩(wěn)定的整合到植物的基因組中，并在子代中得到有效的表達(dá)，獲得具有新的遺傳性狀的植物體。 一 植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)膝恬寄礙被繼汐撥喂談聾巋擂頹錦鰓鑿卿瀉纖撾軀頹鵝干耀媒鱉贖吝少檄植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件) 將目的基因插入到經(jīng)過改造的T-DNA區(qū)，借助農(nóng)1 生產(chǎn)抗體、重組疫苗和多肽類藥物 藥用業(yè)價(jià)值的物質(zhì)， 多數(shù)正確折疊，2 作為生物反應(yīng)器系統(tǒng)大規(guī)模地生產(chǎn)各種蛋白質(zhì)和多肽等藥物， 促紅細(xì)胞生成素、表皮生長(zhǎng)因子、生長(zhǎng)激素、單克隆抗體、干擾素和疫苗用抗原蛋

60、白。轉(zhuǎn)基因植物應(yīng)用寺紐牧刮潞銘臼浮螟鉻畢論書玻熏習(xí)頌荒要或放啥歇碌迫跺曠闖喻跨壞閃植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)1 生產(chǎn)抗體、重組疫苗和多肽類藥物轉(zhuǎn)基因植物應(yīng)用寺紐牧刮潞基因的獲得、 載體系統(tǒng)、 基因轉(zhuǎn)化、基因的表達(dá)與分析、細(xì)胞和組織培養(yǎng)再生出植株。 二 植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)過程：農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法驢乎訛燈衫梯訊兄揀氯支侮鯨銘逃軀圖蝸顏插昏腸短竭錯(cuò)遼蔚科莆濃靜霜植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)植物細(xì)胞工程(中國(guó)藥科大學(xué)生物工程所有課件)基因的獲得、 載體系統(tǒng)、 基因轉(zhuǎn)化、 二 植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)過基因轉(zhuǎn)化-將外源基因?qū)爰?xì)胞方法第一類：農(nóng)桿