6藥質(zhì)量控制研究和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制訂之漫談

1、新藥質(zhì)量控制研究和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制訂之漫談中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所General R&DProcessTargetIdentifi-cationAssay DevelopmentLead Identifi-cationLeadOptimi-zationPhase IIPhase IIIFilingLaunchPhase IDevelop-mentPre-dev.Med. ChemistryDMPKAnalyticsDevelopment StrategyCovered topicsBiology / PharmacologyInvolved disciplinesDescription of del

2、iverables and project review process for all major decision points in R&DRoles and responsibilitiesof stakeholders in R&D Project Review ProcessDeliverables for project teamand key questions / criteriato be evaluated by decision committeesInvolved disciplines: all major R&Ddisciplines from Target Id

3、entification through Start-of-DevelopmentDescription of activities/work packages and project milestones to optimize cycle times Activities in Drug Substanceand Drug ProductdevelopmentDevelopment process from Predevelopment through product launchInvolved disciplines: mainly Chem./Pharmaceutical Devel

4、opment, Processing and ManufacturingPharmaceutical DevelopmentChemical DevelopmentChem. and Pharm. Processing / Manuf.ToxicologyDDSTargetIdentifi-cationAssay DevelopmentLead Identifi-cationLeadOptimi-zationPhase IIPhase IIIFilingLaunchPhase IDevelop-mentPre-dev.Med. ChemistryDMPKAnalyticsDevelopment

5、 StrategyCovered topicsCovered topicsBiology / PharmacologyBiology / PharmacologyInvolved disciplinesInvolved disciplinesDescription of deliverables and project review process for all major decision points in R&DRoles and responsibilitiesof stakeholders in R&D Project Review ProcessDeliverables for

6、project teamand key questions / criteriato be evaluated by decision committeesInvolved disciplines: all major R&Ddisciplines from Target Identification through Start-of-DevelopmentDescription of activities/work packages and project milestones to optimize cycle times Activities in Drug Substanceand D

7、rug ProductdevelopmentDevelopment process from Predevelopment through product launchInvolved disciplines: mainly Chem./Pharmaceutical Development, Processing and ManufacturingPharmaceutical DevelopmentChemical DevelopmentChemical DevelopmentChem. and Pharm. Processing / Manuf.Chem. and Pharm. Proces

8、sing / Manuf.ToxicologyDDSTheRolesofStructure Analysis Group in drugdevelopmentPhaseIIILaunchPost launchDrug DiscoveryPC& Ph IPDPhIISupport Toxicologyand other activitiesCofA forTox. LotpotentialimpuritiesSupport preformulationSupport IND& CTAAFull CofApreliminaryreferencestandardINDProofofStructure

9、SyntheticimpuritiesPotentialdegradationproductRelease testingSupport formulationSupport NDAQualify PrimaryReference StandardNDAproofofStructureForcedDegradationstudyImpurities andDegradationproductRelease testingLeachablesClinicalsuppliestestingInvestigation of OOSSupport MarketingComplaintsCounterf

10、eitProblem SolvinginAll Phases!新藥安全、有有效、可可控新藥分類類化學(xué)藥品品中藥、天天然藥物物生物制品品化學(xué)藥品品1、未在在國(guó)內(nèi)外外上市銷銷售的藥藥品：（1）通過(guò)合合成或者者半合成成的方法法制得的的原料藥藥及其制制劑；（2）天然物物質(zhì)中提提取或者者通過(guò)發(fā)發(fā)酵提取取的新的的有效單單體及其其制劑；（3）用拆拆分或者者合成等等方法制制得的已已知藥物物中的光光學(xué)異構(gòu)構(gòu)體及其其制劑；（4）由已已上市銷銷售的多多組份藥藥物制備備為較少少組份的的藥物；（5）新新的復(fù)方方制劑。2、改變變給藥途途徑且尚尚未在國(guó)國(guó)內(nèi)外上上市銷售售的制劑劑。3、已在在國(guó)外上上市銷售售但尚未未在國(guó)內(nèi)內(nèi)上

11、市銷銷售的藥藥品：（1）已在國(guó)國(guó)外上市市銷售的的原料藥藥及其制制劑；（2）已在國(guó)國(guó)外上市市銷售的的復(fù)方制制劑；（3）改變給給藥途徑徑并已在在國(guó)外上上市銷售售的制劑劑。4、改變變已上市市銷售鹽鹽類藥物物的酸根根、堿基基（或者者金屬元元素），但不改改變其藥藥理作用用的原料料藥及其其制劑。5、改變變國(guó)內(nèi)已已上市銷銷售藥品品的劑型型，但不不改變給給藥途徑徑的制劑劑。6、已有有國(guó)家藥藥品標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)的原料料藥或者者制劑。中藥、天天然藥物物1、未在在國(guó)內(nèi)上上市銷售售的從中中藥、天天然藥物物中提取取的有效效成份及及其制劑劑。2、未在在國(guó)內(nèi)上上市銷售售的來(lái)源源于植物物、動(dòng)物物、礦物物等藥用用物質(zhì)制制成的制制劑。3、

12、中中藥材的的代用品品。4、未在在國(guó)內(nèi)上上市銷售售的中藥藥材新的的藥用部部位制成成的制劑劑。5、未在在國(guó)內(nèi)上上市銷售售的從中中藥、天天然藥物物中提取取的有效效部位制制成的制制劑。6、未未在國(guó)內(nèi)內(nèi)上市銷銷售的由由中藥、天然藥藥物制成成的復(fù)方方制劑。7、未在國(guó)國(guó)內(nèi)上市市銷售的的由中藥藥、天然然藥物制制成的注注射劑。8、改變國(guó)國(guó)內(nèi)已上上市銷售售藥品給給藥途徑徑的制劑劑。9、改變變國(guó)內(nèi)已已上市銷銷售藥品品劑型的的制劑。10、改變變國(guó)內(nèi)已已上市銷銷售藥品品工藝的的制劑。11、已有有國(guó)家標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)的中中成藥和和天然藥藥物制劑劑。生物制品品1、未在在國(guó)內(nèi)外外上市銷銷售的生生物制品品。2、單克克隆抗體體。3、基因因

13、治療、體細(xì)胞胞治療及及其制品品。4、變態(tài)態(tài)反應(yīng)原原制品。5、由人人的、動(dòng)動(dòng)物的組組織或者者體液提提取的，或者通通過(guò)發(fā)酵酵制備的的具有生生物活性性的多組組份制品品。6、由已已上市銷銷售生物物制品組組成新的的復(fù)方制制品。7、已在在國(guó)外上上市銷售售但尚未未在國(guó)內(nèi)內(nèi)上市銷銷售的生生物制品品。8、含未未經(jīng)批準(zhǔn)準(zhǔn)菌種制制備的微微生態(tài)制制品。9、與已已上市銷銷售制品品結(jié)構(gòu)不不完全相相同且國(guó)國(guó)內(nèi)外均均未上市市銷售的的制品（包括氨氨基酸位位點(diǎn)突變變、缺失失，因表表達(dá)系統(tǒng)統(tǒng)不同而而產(chǎn)生、消除或或者改變變翻譯后后修飾，對(duì)產(chǎn)物物進(jìn)行化化學(xué)修飾飾等）。10、與與已上市市銷售制制品制備備方法不不同的制制品（例例如采用用不

14、同表表達(dá)體系系、宿主主細(xì)胞等等）。11、首首次采用用DNA重組技技術(shù)制備備的制品品（例如如以重組組技術(shù)替替代合成成技術(shù)、生物組組織提取取或者發(fā)發(fā)酵技術(shù)術(shù)等）。12、國(guó)國(guó)內(nèi)外尚尚未上市市銷售的的由非注注射途徑徑改為注注射途徑徑給藥，或者由由局部用用藥改為為全身給給藥的制制品。13、改改變已上上市銷售售制品的的劑型但但不改變變給藥途途徑的生生物制品品。14、改改變給藥藥途徑的的生物制制品（不不包括上上述12項(xiàng)）。15、已已有國(guó)家家藥品標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)的生生物制品品?；瘜W(xué)藥品品申報(bào)資資料項(xiàng)目目（一）綜綜述資料料1、藥品名名稱。2、證證明性文文件。3、立立題目的的與依據(jù)據(jù)。4、對(duì)主主要研究究結(jié)果的的總結(jié)及及評(píng)價(jià)

15、。5、藥品說(shuō)說(shuō)明書樣樣稿、起起草說(shuō)明明及最新新參考文文獻(xiàn)。6、包包裝、標(biāo)標(biāo)簽設(shè)計(jì)計(jì)樣稿。（二）藥藥學(xué)研究究資料7、藥學(xué)學(xué)研究資資料綜述述。8、原料料藥生產(chǎn)產(chǎn)工藝的的研究資資料及文文獻(xiàn)資料料；制劑劑處方及工藝的的研究資資料及文文獻(xiàn)資料料。9、確證證化學(xué)結(jié)結(jié)構(gòu)或者者組份的的試驗(yàn)資資料及文文獻(xiàn)資料料。10、質(zhì)質(zhì)量研究究工作的的試驗(yàn)資資料及文文獻(xiàn)資料料。11、藥藥品標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)草案及及起草說(shuō)說(shuō)明，并并提供標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品或或者對(duì)照照品。12、樣品的的檢驗(yàn)報(bào)報(bào)告書。13、輔料料的來(lái)源源及質(zhì)量量標(biāo)準(zhǔn)。14、藥物物穩(wěn)定性性研究的的試驗(yàn)資資料及文文獻(xiàn)資料料。15、直直接接觸觸藥品的的包裝材材料和容容器的選選擇依據(jù)據(jù)及質(zhì)量量

16、標(biāo)準(zhǔn)。（三）藥藥理毒理理研究資資料16、藥藥理毒理理研究資資料綜述述。17、主主要藥效效學(xué)試驗(yàn)驗(yàn)資料及及文獻(xiàn)資資料。18、一般藥藥理研究究的試驗(yàn)驗(yàn)資料及及文獻(xiàn)資資料。19、急性毒毒性試驗(yàn)驗(yàn)資料及及文獻(xiàn)資資料。20、長(zhǎng)期毒毒性試驗(yàn)驗(yàn)資料及及文獻(xiàn)資資料。21、過(guò)敏性性（局部部、全身身和光敏敏毒性）、溶血血性和局局部（血血管、皮皮膚、粘膜、肌肉等等）刺激激性等主主要與局局部、全全身給藥藥相關(guān)的的特殊安安全性試試驗(yàn)研究究和文獻(xiàn)獻(xiàn)資料。22、復(fù)方方制劑中中多種成成份藥效效、毒性性、藥代代動(dòng)力學(xué)學(xué)相互影影響的試試驗(yàn)資料料及文獻(xiàn)獻(xiàn)資料。23、致突突變?cè)囼?yàn)驗(yàn)資料及及文獻(xiàn)資資料。24、生殖毒毒性試驗(yàn)驗(yàn)資料及及文

17、獻(xiàn)資資料。25、致癌試試驗(yàn)資料料及文獻(xiàn)獻(xiàn)資料。26、依賴賴性試驗(yàn)驗(yàn)資料及及文獻(xiàn)資資料。27、動(dòng)物藥藥代動(dòng)力力學(xué)試驗(yàn)驗(yàn)資料及及文獻(xiàn)資資料。（四）臨臨床研究究資料28、國(guó)內(nèi)外外相關(guān)的的臨床研研究資料料綜述。29、臨床研研究計(jì)劃劃及研究究方案。30、臨床研研究者手手冊(cè)。31、知情同同意書樣樣稿、倫倫理委員員會(huì)批準(zhǔn)準(zhǔn)件。32、臨床研研究報(bào)告告。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)研究的的意義和和要求制定藥品品質(zhì)量標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)的意意義達(dá)到安全全、有效效、可控控的目的的對(duì)藥品質(zhì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)方法學(xué)學(xué)的要求求藥物分析析、分析析化學(xué)的的各種方方法但應(yīng)成熟熟、可靠靠、可操操作性強(qiáng)強(qiáng)ICHQualityGuidelinesNDA/MAA compo

18、nentsQuality (CMC)SafetyEfficacyICHQualityGuidelinesQ1:Stability(3)Q2:Analyticalmethod(2)Q3:Impurities(3)Q4Pharmacopoeia monographs(nonepublished)Q5Biotechnology (4)Q6Specifications(2)Q7Good manufacturingPractice(1)新藥研究究的主要要技術(shù)要要求和指指導(dǎo)原則則ICH人用藥品品注冊(cè)技技術(shù)要求求國(guó)際協(xié)協(xié)調(diào)會(huì)International ConferenceonHarmonisationofT

19、echnicalRequirements forRegistrationofPharmaceuticals forHumanUse在1990年由由美國(guó)、日本、歐盟三三方政府府的藥品品監(jiān)督管管理部門門和制藥藥企業(yè)聯(lián)聯(lián)合發(fā)起起成立的的。新藥研究究指導(dǎo)原原則（我我國(guó)）主要內(nèi)容容性狀及理理化性質(zhì)質(zhì)鑒別檢查含量測(cè)定定穩(wěn)定性研研究性狀及理理化性質(zhì)質(zhì)溶解度熔點(diǎn)油水分配配系數(shù)紫外吸收收光譜和和吸收系系數(shù)旋光度溶解度硫酸胍丁丁胺在水水中極易溶溶解，在在冰醋酸、甲醇、乙醇、丙酮、二二甲亞砜砜、N,N-二甲基甲甲酰胺、氯仿中中幾乎不不溶，在在0.1mol/L鹽酸溶液液、0.1mol/L氫氧化鈉鈉溶液中中極易溶溶解。

20、這是由于于胍丁胺胺以硫酸酸鹽的形形式存在在，且分分子含有有易于質(zhì)質(zhì)子化的的氨基和和胍基，具有極極強(qiáng)的親親水性，這一性性質(zhì)與硫硫酸胍丁丁胺油水水分配系系數(shù)的研研究結(jié)論論是一致致的。熔點(diǎn)毛細(xì)管法法按照中國(guó)國(guó)藥典(2000年版二部部)的方法測(cè)測(cè)量其熔熔點(diǎn)。實(shí)實(shí)驗(yàn)中隨隨溫度升升高，硫硫酸胍丁丁胺的顏顏色開始始呈棕黃黃，然后后逐漸變變棕褐色色，固相相消失不不明顯，無(wú)法獲獲得本品品的準(zhǔn)確確熔點(diǎn)。差示掃描描量熱法法（DSC）熔點(diǎn)DSC曲線記錄錄了維持持樣品和和參比物物溫度相相同所需需的能量量差隨溫溫度的變變化。DSC曲線有助助于熔點(diǎn)點(diǎn)的確定定，同時(shí)時(shí)從DSC曲線上的的吸熱或或放熱峰峰的位置置、形狀狀、數(shù)目目

21、可以估估計(jì)樣品品的純度度，而峰峰面積與與反應(yīng)熱熱焓有關(guān)關(guān)，可用用來(lái)測(cè)定定反應(yīng)熱熱、比熱熱容等熱熱化學(xué)參參數(shù)。DSC測(cè)定熔點(diǎn)點(diǎn)油水分配配系數(shù)采用正辛辛醇-水體系，研究了了不同濃濃度硫酸酸胍丁胺胺在兩相相中的分分配情況況，研究究表明硫硫酸胍丁丁胺幾乎乎全部存存在于水水相中，這是由由于硫酸酸胍丁胺胺具有極強(qiáng)強(qiáng)的親水水性；由于其其游離堿堿不能穩(wěn)穩(wěn)定存在在，故無(wú)無(wú)法求取取其游離離堿的油油水分配配系數(shù)。紫外吸收收光譜紫外最大大吸收波波長(zhǎng)和吸吸收系數(shù)數(shù)儀器型號(hào)測(cè)定室溫()(max)nmE原液稀釋一倍水溶劑2512182 島津UV-250219520.8528.9 島津UV-260218520.7530.6

22、島津UV-160A219520.6531.3 島津UV-160A218520.4532.8 惠普HP-8453218520.0529.7Ex=525.6SD=5.45RSD=1.04%紫外吸收收度比值值測(cè)定儀器型號(hào)比值325nm/218nm 325nm/234nm 島津UV-250 1.350 1.778 島津UV-260 1.353 1.790 島津UV-160A 1.353 1.790 島津UV-150 1.349 1.790 惠普HP-8453 1.352 1.790平均值 1.351 1.788RSD(%) 0.13 0.30鑒 別化學(xué)鑒別別法HPLC方法紅外光譜譜法紫外光譜譜法化學(xué)鑒

23、別別取本品約約10mg，加甲醇醇1mL，滴加三三氯化鐵鐵試液二二滴，搖搖勻后，呈綠色色溶液。即本品品中的酚酚羥基與與三氯化化鐵形成成綠色絡(luò)絡(luò)合物。HPLC方法a.硫酸胍丁丁胺（購(gòu)購(gòu)自Sigma）b.硫酸胍丁丁胺精制品紅外光譜譜法（紫紫外光譜譜法類似似）檢 查無(wú)機(jī)雜質(zhì)質(zhì)檢查a.干燥失重重b.灼燒殘?jiān)點(diǎn).重金屬d.砷鹽酸度溶液顏色色與澄清清度熱原等等等有機(jī)雜質(zhì)質(zhì)檢查a.有機(jī)溶劑劑殘留量量b.有關(guān)物質(zhì)質(zhì)高效液相相色譜法法薄層色譜譜法ICHGuidanceonImpuritiesinDrug SubstanceImpurities in DrugSubstance (ICH) Q3A(R)Class

24、ificationofimpuritiesOrganic Impurities(Processand drugrelated)StartingmaterialBy-productsIntermediateDegradationProductsReagents,ligands,and catalystsInorganicImpuritiesReagents,ligands,and catalystsHeavymetalsorotherresidualmetalsInorganicsaltsOthermaterials(eg.Filteraids,charcoal)Solvents:Organic

25、 or inorganicliquids usedasvehiclesfor thepreparationofsolutionsorsuspensionsinthe synthesis無(wú)機(jī)雜質(zhì)質(zhì)檢查批 號(hào)干燥失重?zé)胱茪堅(jiān)亟饘偕辂}酸度0401120.21%0.015%10ppm2ppm4.240401130.06%0.028%10ppm2ppm4.970401150.13%0.080%1020ppm2ppm 4.90按藥典常常規(guī)方法法進(jìn)行有機(jī)溶劑劑殘留量量的檢查查分類(riskbasedassessment)1類:避免使用用的溶劑劑(should notbeused)2類:限制使用用的溶劑劑(

26、0.1 mg/day,or10ppm)3類:低毒性溶溶劑(50mg/dayor0.5 %)殘留溶劑劑限量（ppm）1類：苯（2）、四氯氯化碳（4）、1,2-二氯乙烷烷（5）、1,1-二氯乙烷烷（8）、1,1,1-三氯乙烷烷（1500）2類：甲苯苯（890）、乙腈腈（410）、氯仿仿（60）、二氯氯甲烷（600）、正己己烷（290）、甲醇醇（3000）、吡啶啶（200）等等3類：醋酸酸、丙酮酮、乙醇醇、乙醚醚、乙酸酸乙酯、甲酸、苯甲醚醚、丁醇醇、醋酸酸丁醇、四氫呋呋喃、正正庚烷、丙醇、甲乙酮酮、戊烷烷（5000）無(wú)足夠毒毒性數(shù)據(jù)據(jù)的溶劑劑：異辛辛烷、石石油醚、三氯乙乙酸、三三氟乙酸酸、2,2-二

27、甲丙烷烷等有機(jī)溶劑劑殘留量量檢查儀器及主主要色譜譜條件美國(guó)HP5890型氣相色色譜儀色譜柱：DB-624，30m0.32mm1.8m載氣：N2進(jìn)樣方式式：250C（柱前壓50kPa分流進(jìn)樣樣）柱溫：50C，20C /min至230C。檢測(cè)器：FID250C硫酸胍丁丁胺在合合成和提提取過(guò)程程中曾用用甲醇、乙醇，因此我我們對(duì)樣樣品中甲甲醇、乙乙醇兩種種溶劑的的殘留量量采用氣氣相色譜譜法進(jìn)行行檢查。分離圖及及最低檢檢出限量量圖最低檢出出限量圖圖（甲醇0.1，乙醇0.1）分離圖方法分析析特性甲醇乙醇線性范圍19.6491 g/ml20.2505g/ml線性方程Y=- 0.00309+0.0102x r

28、=0.9964Y=-0.278+0.0155x r=0.9968精密度(RSD)(n=5)49.1g/ml,4.54%50.5g/ml,4.39%98.2g/ml,3.88%101g/ml,4.38 %344g/ml,4.17%354g/ml,4.02%準(zhǔn)確度(回收率%)49.1g/ml,82.0%50.5g/ml,114%98.2g/ml,112%101g/ml,117 %344g/ml,107%354g/ml,104%定量限最小檢出限量5.0 g/ml5.0g/ml 1g0.05%IdentificationThresholdMaximum Daily DoseThreshold10mg-

29、2g0.2 %or2mgTDI 2g0.1%Qualification ThresholdMaximum Daily DoseThreshold10mg 1g0.2%IPAC-RS Proposed ExtractablesReportingThresholdsExtractableLevelinComponent(g/g)AssignmentCategory 100g/gStructureConfirmed20 100g/gConfident20g/gTentativeStructureconfirmed: Identification categoriesA,B(orC), andD (o

30、rE)arepositive.Confident: sufficientdatatoprecludeallbut themost closelyrelatedstructures.Tentative: dataisconsistentwith aclassofmoleculeonly有關(guān)物質(zhì)質(zhì)對(duì)原料藥藥進(jìn)行有有關(guān)物質(zhì)質(zhì)檢查，主要應(yīng)應(yīng)考慮反反應(yīng)過(guò)程程中涉及及的中間體、付產(chǎn)物物、降解解物等。采用HPLC和和TLC進(jìn)行本本品原料料藥中有有關(guān)物質(zhì)質(zhì)的檢查查。胍丁胺是是我所合合成的類新藥，具有增增強(qiáng)阿片片類藥物物鎮(zhèn)痛作作用、抑抑制阿片片類藥物物所致耐耐受和身身體依賴賴等藥效效。為了了對(duì)該藥藥物進(jìn)行行有效

31、地地質(zhì)量控控制，研研究建立立符合新新藥報(bào)批批要求的的雜質(zhì)檢檢查和含含量測(cè)定定方法存存在以下下技術(shù)難難題：胍丁胺的的紫外吸吸收在200nm以下，無(wú)無(wú)法采用用常規(guī)的的高效液液相色譜譜-紫外檢測(cè)測(cè)的方法法對(duì)該藥藥進(jìn)行有有效地質(zhì)質(zhì)量控制制胍丁胺及及其共存存雜質(zhì)結(jié)結(jié)構(gòu)相似似，研究究建立兩種不同的雜雜質(zhì)分離離及檢查查方法具具有相當(dāng)當(dāng)?shù)碾y度度胍丁胺及及其共存存雜質(zhì)胍丁胺丁二胍丁二胺甲基異硫硫脲OPA柱前衍生生化高效效液相色色譜法-紫外檢測(cè)測(cè)衍生化的的反應(yīng)原原理OPA柱前衍生生色譜分分離圖1.丁二胺衍衍生物；2.硫酸胍丁丁胺衍生生物衍生物的的穩(wěn)定性性考察OPA衍生化方方法的不不足之處處通過(guò)研究究表明衍衍生物的

32、的穩(wěn)定性性不好，這一特特點(diǎn)要求求操作必必須盡量量平行以以獲得好好的重現(xiàn)現(xiàn)性。胍丁胺及及其共存存物中僅僅胍丁胺胺、丁二二胺可以以與OPA衍生試劑劑發(fā)生衍衍生化反反應(yīng)，丁丁二胍和和甲基異異硫脲均均未能檢檢出，這這是由于于其結(jié)構(gòu)構(gòu)中沒有有可以發(fā)發(fā)生衍生生化反應(yīng)應(yīng)的基團(tuán)團(tuán)。該方法對(duì)對(duì)原料丁丁二胺的的相對(duì)檢檢出限為為1%，尚不能能滿足一一類新藥藥質(zhì)量標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)的要要求。衍生化的的步驟較較為煩瑣瑣。離子對(duì)高高效液相色譜法法示差折光光檢測(cè)硫酸胍丁丁胺及其其共存物物（丁二二胍、丁丁二胺、甲基異異硫脲）在酸性性條件下下均顯示示正電荷荷，若在在流動(dòng)相相中添加加離子對(duì)對(duì)試劑樟樟腦磺酸酸鈉，與與上述化化合物通通過(guò)靜電電作

33、用生生成離子子對(duì)，采采用通用用型檢測(cè)測(cè)器示差折折光檢測(cè)測(cè)器進(jìn)行行檢測(cè)，可以對(duì)對(duì)胍丁胺胺及其共共存物均均產(chǎn)生響響應(yīng)，從從而克服服衍生化化方法存存在的缺缺陷。色譜條件件的選擇擇對(duì)離子對(duì)對(duì)試劑濃濃度、溫溫度、pH、甲醇比例例、三乙乙胺濃度度、等因因素進(jìn)行行逐步優(yōu)優(yōu)化，研研究表明明：離子對(duì)試試劑的濃濃度研究表明明不含離離子對(duì)試試劑的流流動(dòng)相對(duì)對(duì)硫酸胍胍丁胺及及其共存存雜質(zhì)的的保留很很弱，出出峰很早早，無(wú)法法實(shí)現(xiàn)四四種物質(zhì)質(zhì)良好的的色譜分分離。離離子對(duì)試試劑濃度度較低時(shí)時(shí)，色譜譜峰前伸伸；濃度度過(guò)高，色譜峰峰拖尾。另外，離子對(duì)對(duì)試劑的的適宜濃濃度與硫硫酸胍丁丁胺的上上樣量有有關(guān)，為為保持色色譜峰的的對(duì)稱

34、性性，增大大硫酸胍胍丁胺的的上樣量量，應(yīng)適適當(dāng)提高高離子對(duì)對(duì)試劑的的濃度。色譜條件件的選擇擇溫度柱溫和示示差檢測(cè)測(cè)器溫度度升高，柱壓降降低，tR減小，色色譜峰面面積略有有增大，其對(duì)稱稱性明顯顯提高。pH根據(jù)離子子對(duì)生成成的原理理，流動(dòng)動(dòng)相必須須在酸性性條件下下才能與與胍丁胺胺及其共共存物生生成離子子對(duì)。在在較高的的pH條件下，tR較小，色色譜峰擁?yè)頂D，分分離效果果差，考考慮到色色譜柱自自身的酸酸度適用用范圍，我們選選擇pH為3.0。甲醇比例例和三乙乙胺濃度度通過(guò)改變變有機(jī)相相甲醇的的比例調(diào)調(diào)節(jié)tR，同時(shí)通過(guò)過(guò)改變?nèi)野返牡谋壤徊粩喔纳粕品逍巍ＩV條件件的選擇擇胍丁胺及及其共存存物的色色譜分

35、離離圖1甲基異硫硫脲；2丁二胺；3胍丁胺；4丁二胍色譜分離離機(jī)理tR= 4.010min tR= 5.462mintR = 6.265mintR = 8.002min方法學(xué)考考察線性方程Y=-59.39+2374X, r=0.9999精密度RSD（n=5）0.50mg/ml, 2.49%1.0mg/ml, 0.379%5.0mg/ml, 0.867%準(zhǔn)確度回收率（ n=5 ）0.50mg/ml, 100.3%1.0mg/ml, 101.8%5.0mg/ml, 95.20%檢出限0.062 g重現(xiàn)性高效液相相色譜ThermoSeparationProductSpectrasystemP2000示

36、差折光光檢測(cè)器器：Waters410 DifferentialRefractomer其它條件件同限量圖及及樣品檢檢查圖丁二胺0.5%,丁二胍0.5%樣品檢查查圖薄層色譜譜法展開劑的的選擇對(duì)展開劑劑的種類類和配比比進(jìn)行優(yōu)優(yōu)化選擇擇，通過(guò)過(guò)實(shí)驗(yàn)確確定最終終的展開開劑條件件為：甲甲醇:正己烷:冰醋酸:氨水=10:1.0:0.2: 1.0。在此條條件下，硫酸胍胍丁胺及及其共存存雜質(zhì)獲獲得良好好分離，且具有有較高的的顯色靈靈敏度。薄層板的的選擇實(shí)驗(yàn)選擇擇國(guó)產(chǎn)青青島海洋洋高效硅硅膠板、MerckDC-硅膠G60板（5721）、MerckHPTLC-硅膠G60板（5641），從分分離度、靈敏度度等方面面進(jìn)行

37、對(duì)比考察察，研究表表明MerckDC-硅膠G60板的檢出出靈敏度度高于國(guó)國(guó)產(chǎn)硅膠膠板一倍倍以上，本底干干擾少。薄層色譜譜法顯色方法法的選擇擇實(shí)驗(yàn)對(duì)比比研究了了1-萘酚+NaOH+NaCl+雙乙酰、碘蒸汽熏熏、碘化化鉍鉀等等三種顯顯色方法法，研究究表明碘碘熏顯色色具有更更高的靈靈敏度，干燥的的環(huán)境以以及烘過(guò)過(guò)的薄層層板對(duì)顯顯色有利利。薄層色譜譜法薄層色譜譜分離圖圖MERCK硅膠板青島海洋洋硅膠板板兩種薄層層板靈敏敏度比較較靈敏度Merck硅膠板青島海洋硅膠板HPLC檢出限(g)檢出限量（%）檢出限(g)檢出限量（%）檢出限(g)檢出限量（%）胍丁胺0.250.500.062丁二胺0.0750.40%0.150.50%0.032 0.50%甲基異硫脲0.400.40%1.81.0%0.240.50%丁二胍0.0750.24%0.150.50%0.10 0.50%四批樣品品的純度度檢查圖圖薄層板的的左側(cè)為為0.5%的限量圖圖樣品純度度檢查影響因素素樣品檢檢查圖有關(guān)物質(zhì)質(zhì)發(fā)現(xiàn)本品品溶液在在光線照照射下，會(huì)呈現(xiàn)現(xiàn)三個(gè)色色譜峰，為研究究確證其其是否為為光互變變異構(gòu)體體，試驗(yàn)驗(yàn)采用HPLC、LC-MS、UV等技術(shù)術(shù)手段進(jìn)進(jìn)行研究究。手性異構(gòu)構(gòu)體（手性柱柱分離、高效毛毛細(xì)管電電泳）光互變異異構(gòu)體光照條件件下，本本品溶液液的HPLC圖（不同同時(shí)間連連續(xù)進(jìn)樣樣）固體光照照或加熱