食品檢驗(yàn)工(高級)第三章課件

1、第三章第三章第一節(jié)糕點(diǎn)、糖果中丙酸鈣含量的測定1.原理2.儀器、試劑3.操作步驟4.結(jié)果計(jì)算第一節(jié)糕點(diǎn)、糖果中丙酸鈣含量的測定1.原理2.儀器、試劑2.儀器、試劑(1) 儀器1) 高效液相色譜儀：配有紫外檢測器或二極管陣列檢測器。2) 水蒸氣蒸餾裝置或超聲波水浴。3) pH值計(jì)。(2) 試劑1) 磷酸溶液(1mol/L)：在50mL水中加入53.5mL磷酸(85%，體積分?jǐn)?shù))，混勻后，加水至1000mL。2) 磷酸氫二銨溶液(1.5g/L)：稱取磷酸氫二銨1.5g，加水溶解，定容至1000mL。3) 硅油。4) 丙酸標(biāo)準(zhǔn)儲備液(10mg/mL)：準(zhǔn)確稱取250mg丙酸于25mL容量瓶中，加水至

2、刻度，儲存在4冰箱內(nèi)，有效期3個(gè)月。2.儀器、試劑(1) 儀器1) 高效液相色譜儀：配有紫外檢3.操作步驟(1) 樣品的制備樣品經(jīng)組織搗碎機(jī)搗碎混勻后備用。(2) 樣品的處理準(zhǔn)確稱取5g(精確至0.01g)樣品置于100mL燒杯中，加水20mL，加入1mol/L磷酸溶液0.5mL，混勻，經(jīng)超聲浸提10min后，用1mol/L磷酸溶液調(diào)pH值至3左右，轉(zhuǎn)移試樣至50mL容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻。(3) 測定1) 高效液相色譜條件2) 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：準(zhǔn)確吸取5.0mL標(biāo)準(zhǔn)儲備液置于50mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，配制成濃度為1.0mg/mL標(biāo)準(zhǔn)工作液。3.操作步驟(1) 樣品的制備樣品經(jīng)

3、組織搗碎機(jī)搗碎混勻后備4.結(jié)果計(jì)算4.結(jié)果計(jì)算一、鋅含量的測定1.雙硫腙比色法2.雙硫腙比色法(一次萃取)3.原子吸收分光光度法第二節(jié)糕點(diǎn)、糖果中微量元素含量的測定一、鋅含量的測定1.雙硫腙比色法2.雙硫腙比色法(一次萃取1.雙硫腙比色法(1) 原理樣品經(jīng)消化后，在pH=4.05.5時(shí)，鋅離子與雙硫腙形成紫紅色配位化合物，溶于四氯化碳，加入硫代硫酸鈉，防止銅、汞、鉛、鉍、銀和鎘等離子干擾，最后與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。(2) 儀器與試劑1) 儀器：可見分光光度計(jì)。2) 試劑 2mol/L乙酸鈉溶液：稱取68g乙酸鈉(CH3COONa3H2O)，加水溶解后稀釋至250mL。 2mol/L乙酸：量取10

4、.0mL冰乙酸，加水稀釋至85mL。1.雙硫腙比色法(1) 原理樣品經(jīng)消化后，在pH=4.01.雙硫腙比色法 乙酸-乙酸鹽緩沖液：2mol/L乙酸鈉溶液與2mol/L乙酸等體積混合，此溶液pH值為4.7左右。用0.1g/L雙硫腙-四氯化碳溶液萃取數(shù)次，每次10mL，除去其中的鋅，至四氯化碳層綠色不變?yōu)橹梗瑮壢ニ穆然紝?，再用四氯化碳萃取乙?乙酸鹽緩沖液中過剩的雙硫腙，至四氯化碳層無色，棄去四氯化碳 氨水(11) 。 2mol/L鹽酸：量取10mL鹽酸，加水稀釋至60mL。 0.02mol/L鹽酸：吸取1mL 2mol/L鹽酸，加水稀釋至100mL。 1g/L酚紅指示液：稱取0.1g酚紅，將其

5、溶于100mL乙醇。1.雙硫腙比色法 乙酸-乙酸鹽緩沖液：2mol/L乙酸鈉溶1.雙硫腙比色法 200g/L鹽酸羥胺溶液：稱取20g鹽酸羥胺，加60mL水，滴加氨水(11)，調(diào)節(jié)其pH值至4.05.5，用0.1g/L雙硫腙-四氯化碳溶液萃取數(shù)次，每次10mL，除去其中的鋅，至四氯化碳層綠色不變?yōu)橹?，棄去四氯化碳層，再用四氯化碳萃取鹽酸羥胺溶液中過剩的雙硫腙，至四氯化碳層無色，棄去四氯化碳層。 250g/L硫代硫酸鈉溶液：用2mol/L乙酸調(diào)節(jié)溶液pH值至4.05.5，然后用0.1g/L雙硫腙-四氯化碳溶液萃取數(shù)次，每次10mL，除去其中的鋅，至四氯化碳層綠色不變?yōu)橹梗瑮壢ニ穆然紝?，再用四氯?/p>

6、碳萃取溶液中過剩的雙硫腙，至四氯化碳層無色，棄去四氯化碳層。 0.1g/L雙硫腙-四氯化碳溶液。(3) 操作步驟1.雙硫腙比色法 200g/L鹽酸羥胺溶液：稱取20g鹽酸1.雙硫腙比色法1) 樣品的消化：稱取5.000g(或10.000g)粉碎樣品，置于250500mL定氮瓶中，加少許水使之潤濕，加數(shù)粒玻璃珠、1015mL硝酸，放置片刻，用小火緩緩加熱，待作用緩和后，放置冷卻。2) 測定：吸取5.010.0mL樣品消化液和相同量的試劑空白液，分別置于125mL分液漏斗中，加5mL水、0.5mL 200g/L鹽酸羥胺溶液，搖勻，再加2滴1g/L酚紅指示液，用氨水(11) 調(diào)節(jié)至紅色，再多加2滴，

7、然后加5mL 0.1g/L雙硫腙-四氯化碳溶液，劇烈振搖2min，靜置分層。(4) 結(jié)果計(jì)算樣品中鋅含量的計(jì)算公式為1.雙硫腙比色法1) 樣品的消化：稱取5.000g(或10.2.雙硫腙比色法(一次萃取)(1) 原理同方法1。(2) 儀器與試劑1) 儀器：可見分光光度計(jì)。2) 試劑 乙酸-乙酸鹽緩沖液(同方法1) 。 250g/L硫代硫酸鈉溶液(同方法1) 。 0.1g/L雙硫腙-四氯化碳溶液。 1g/L甲基橙指示液：稱取0.1g甲基橙，溶于100mL乙醇。 氨水。 鋅標(biāo)準(zhǔn)使用液(同方法1) 。(3) 操作步驟1) 樣品的消化(同方法1) 。2.雙硫腙比色法(一次萃取)(1) 原理同方法1。(

8、2)2.雙硫腙比色法(一次萃取)2) 測定：吸取5.010.0mL樣品消化液和相同量的試劑空白液，分別置于125mL分液漏斗中，加水至10mL。(4) 結(jié)果計(jì)算同方法1。2.雙硫腙比色法(一次萃取)2) 測定：吸取5.010.03.原子吸收分光光度法(1) 原理樣品經(jīng)處理后，導(dǎo)入原子吸收分光光度計(jì)中，原子化以后，吸收波為213.8nm的共振線，其吸收值與鋅含量成正比，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。(2) 儀器與試劑1) 儀器：原子吸收分光光度計(jì)。2) 試劑：要求使用去離子水，優(yōu)級純或高級純試劑。 1mol/L鹽酸：量取10mL鹽酸，加水稀釋至120mL。 混合酸：硝酸和高氯酸按31混合。 鋅標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)

9、確稱取0.5000g金屬鋅(質(zhì)量分?jǐn)?shù)不應(yīng)小于99.99%)，溶于10mL鹽酸中，然后在水浴上蒸發(fā)至近干，用少量水溶解后移入1000mL容量瓶中，以水稀釋至刻度，儲存于聚乙烯瓶中。此溶液每毫升相當(dāng)于0.5mg3.原子吸收分光光度法(1) 原理樣品經(jīng)處理后，導(dǎo)入原子吸3.原子吸收分光光度法 鋅標(biāo)準(zhǔn)使用液：吸取10.0mL鋅標(biāo)準(zhǔn)溶液，置于50mL容量瓶中，以鹽酸溶液(111) 稀釋至刻度。此溶液每毫升相當(dāng)于100g鋅。(3) 操作步驟1) 樣品的處理：稱取5.010.0g樣品置于50mL瓷坩堝中，用小火炭化，然后移入高溫爐中，在500以下灰化約8h后，從坩堝中取出，放冷后再加少量混合酸，用小火加熱，

10、不使其干涸，必要時(shí)再加少許混合酸，如此反復(fù)處理，直至殘?jiān)袩o炭粒。2) 測定：吸取0.00m、0.10m、0.20m、0.40m、0.80mL鋅標(biāo)準(zhǔn)使用液(相當(dāng)于0.0、10.0、20.0、40.0、80.0鋅)，分別置于50mL容量瓶中，以鹽酸(111) 稀釋至刻度，混勻。(4) 結(jié)果計(jì)算樣品中鋅含量的計(jì)算公式為(5) 注意事項(xiàng)3.原子吸收分光光度法 鋅標(biāo)準(zhǔn)使用液：吸取10.0mL鋅標(biāo)3.原子吸收分光光度法1) 在制備鋅標(biāo)準(zhǔn)溶液的過程中，將高純度鋅溶于鹽酸溶液時(shí)，要用表面皿蓋在燒杯口，以防止產(chǎn)生的氫氣使溶液飛濺而造成損失。2) 所用的蒸餾水、試劑、玻璃器皿都可能被鋅污染，因此每次試驗(yàn)時(shí)都應(yīng)使

11、空白值達(dá)到穩(wěn)定，然后才能進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品溶液的測定。3) 樣品用干法灰化處理測得的鋅含量低于濕法處理。4) 該方法測定鋅的最低檢出量為0.4mg/kg，允許的相對誤差小于10%，適用于測定食品中鋅的含量。3.原子吸收分光光度法1) 在制備鋅標(biāo)準(zhǔn)溶液的過程中，將高純二、銅含量的測定1.二乙基二硫代氨基甲酸鈉法2.原子吸收分光光度法二、銅含量的測定1.二乙基二硫代氨基甲酸鈉法2.原子吸收分1.二乙基二硫代氨基甲酸鈉法(1) 原理樣品經(jīng)消化后，在堿性溶液中，樣品中的銅離子與二乙基二硫代氨基甲酸鈉生成棕黃色配位化合物，溶于四氯化碳，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。(2) 儀器與試劑1) 儀器：可見分光光度計(jì)。2

12、) 試劑 檸檬酸銨-乙二胺四乙酸二鈉溶液：稱取20g檸檬酸銨和5g乙二胺四乙酸二鈉溶于水中，加水稀釋至100mL。 硝酸溶液(1199)：量取0.5mL硝酸，倒入99.5mL水中，混勻。 氨水(11) 。 1g/L酚紅指示液：稱取0.1g酚紅，溶于100mL乙醇。1.二乙基二硫代氨基甲酸鈉法(1) 原理樣品經(jīng)消化后，在堿1.二乙基二硫代氨基甲酸鈉法 銅試劑溶液：1g/L二乙基二硫代氨基甲酸鈉(C2H5) 2NCS2Na3H2O溶液，必要時(shí)可過濾，儲存于冰箱中。 四氯化碳。 6mol/L硝酸：量取60mL硝酸，加水稀釋至160mL。 銅標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取1.0000g金屬銅(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為99.99

13、)，分次加入6mol/L硝酸溶解，總量不超過37mL，移入1000mL容量瓶中，用水稀釋至刻度。此溶液每毫升相當(dāng)于1mg銅。 銅標(biāo)準(zhǔn)使用液：吸取1.00mL銅標(biāo)準(zhǔn)溶液，置于100mL容量瓶中，加硝酸(1199) 稀釋至刻度。此溶液每毫升相當(dāng)于10g銅。(3) 操作步驟1.二乙基二硫代氨基甲酸鈉法 銅試劑溶液：1g/L二乙基二1.二乙基二硫代氨基甲酸鈉法1) 樣品的消化：稱取5.010.0g樣品置于50mL瓷坩堝中，加5mL硝酸，放置0.5h，用小火蒸干，繼續(xù)加熱炭化，然后移入高溫爐中，50025灰化1h后，取出坩堝，放冷后再加1mL硝酸，用小火蒸干，再移入高溫爐中，500灰化0.5h，冷卻后取

14、出，加1mL硝酸溶液(14)溶解殘?jiān)?次，移入100mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻備用。2) 測定：吸取10.0mL消化后的定容溶液和同量的試劑空白液，分別置于125mL分液漏斗中，加水稀釋至20mL。(4) 結(jié)果計(jì)算樣品中銅含量的計(jì)算公式為1.二乙基二硫代氨基甲酸鈉法1) 樣品的消化：稱取5.012.原子吸收分光光度法(1) 原理樣品處理后，導(dǎo)入原子吸收分光光度計(jì)中，原子化以后，吸收波長為324.8nm的共振線，其吸收量與銅含量成正比，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。(2) 儀器與試劑1) 儀器：原子吸收分光光度計(jì)。2) 試劑：要求使用去離子水，優(yōu)級純或高級純試劑。(3) 操作步驟1) 樣品的處理(

15、同方法1) 。2) 測定：吸取0.0m、1.0m、2.0m、4.0m、6.0m、8.0mL銅標(biāo)準(zhǔn)使用液(相當(dāng)于0.0g、10.0g、20.0g、40.0g、60.0g、80.0g銅)，分別置于100mL容量瓶中，加硝酸溶液(1199) 稀釋至刻度，混勻。2.原子吸收分光光度法(1) 原理樣品處理后，導(dǎo)入原子吸收2.原子吸收分光光度法(4) 結(jié)果計(jì)算樣品中銅含量的計(jì)算公式為2.原子吸收分光光度法(4) 結(jié)果計(jì)算樣品中銅含量的計(jì)算公三、鉛含量的測定1.雙硫腙比色法2.原子吸收分光光度法三、鉛含量的測定1.雙硫腙比色法2.原子吸收分光光度法2.原子吸收分光光度法(1) 原理同第二章第四節(jié)中鉛的測定方

16、法2。(2) 儀器與試劑同第二章第四節(jié)中鉛的測定方法2。(3) 操作步驟1) 樣品的處理：取可食部分充分混勻，稱取510g(精確到0.01g)置于瓷坩堝中，用小火炭化，然后移入電阻爐中，在500以下灰化16h后，從坩堝中取出，放冷后再加少量混合酸，用小火加熱，不使其干涸，必要時(shí)再加少許混合酸。2) 測定：同第二章第四節(jié)中鉛的測定方法2。2.原子吸收分光光度法(1) 原理同第二章第四節(jié)中鉛的測定四、砷含量的測定1.砷斑法2.銀鹽法四、砷含量的測定1.砷斑法2.銀鹽法一、沙門氏菌的檢驗(yàn)1.設(shè)備與材料2.培養(yǎng)基與試劑第三節(jié)糕點(diǎn)、糖果中致病菌的檢驗(yàn)一、沙門氏菌的檢驗(yàn)1.設(shè)備與材料2.培養(yǎng)基與試劑第三節(jié)

17、糕1.設(shè)備與材料1) 紫外光燈：波長 366nm，功率大于或等于6W。2) 放大鏡：34倍放大能力。3) 毛細(xì)滴管。1.設(shè)備與材料1) 紫外光燈：波長 366nm，功率大于或等2.培養(yǎng)基與試劑(1) 緩沖蛋白胨水成分如下：2.培養(yǎng)基與試劑(1) 緩沖蛋白胨水成分如下：1.5g(2) 氯化鎂孔雀綠(MM)增菌液成分如下：1.5g(2) 氯化鎂孔雀綠(MM)增菌液成分如下：40.0g(3) 四硫磺酸鈉煌綠(TTB)增菌液成分如下：40.0g(3) 四硫磺酸鈉煌綠(TTB)增菌液成分如下：30.0g(4) 亞硒酸鹽胱氨酸(SC)增菌液成分如下：30.0g(4) 亞硒酸鹽胱氨酸(SC)增菌液成分如下：

18、4.5g0.01g4.5g0.01g0.01g(5) SS瓊脂培養(yǎng)基含1%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))蔗糖成分如下：0.01g(5) SS瓊脂培養(yǎng)基含1%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))蔗糖1.0g0.025g1.0g0.025g13.5g(6) HE瓊脂培養(yǎng)基成分如下：13.5g(6) HE瓊脂培養(yǎng)基成分如下：1.5g0.065g1.5g0.065g14.0g(7) MUCAP試劑用 4-甲基傘形酮辛酯配成的試劑的縮寫。(8) 氧化酶試紙(9) 三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基成分如下：14.0g(7) MUCAP試劑用 4-甲基傘形酮辛酯配成(8) 氧化酶試紙1) 氧化酶試液：甲液為1%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))-萘酚乙醇溶液；乙液為1%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))二甲

19、基對苯二胺草酸鹽水溶液。2) 氧化酶試紙：先將甲液與乙液等量混合，然后取定性濾紙，浸透混合液后，于7080烘箱烘干，剪成適當(dāng)大小的紙條，密封于塑料袋或瓶中，儲存于4冰箱中，備用。(8) 氧化酶試紙1) 氧化酶試液：甲液為1%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))12.0g0.025g3.沙門氏菌的檢驗(yàn)程序(見圖3-1)4.操作步驟5.注意事項(xiàng)12.0g0.025g3.沙門氏菌的檢驗(yàn)程序(見圖3-1)4.操作步驟(1) 前增菌將樣品用均質(zhì)器以800010000r/min的轉(zhuǎn)速打碎1min，乳缽和滅菌砂磨碎。圖3-1沙門氏菌的檢驗(yàn)程序4.操作步驟(1) 前增菌將樣品用均質(zhì)器以80001004.操作步驟(2) 分離培養(yǎng)將增菌

20、培養(yǎng)液搖勻，挑取一接種環(huán)，劃線接種于SS和HE瓊脂培養(yǎng)基各一個(gè)，于 (361)培養(yǎng)2226h。4.操作步驟(2) 分離培養(yǎng)將增菌培養(yǎng)液搖勻，挑取一接種環(huán)4.操作步驟表3-1沙門氏菌的菌落特征4.操作步驟表3-1沙門氏菌的菌落特征4.操作步驟(3) 測定從培養(yǎng)的分離培養(yǎng)基上選可疑沙門氏菌菌落(盡量選較大、分離較好的單個(gè)菌落)，用玻璃筆做好標(biāo)記并編號。(4) 結(jié)果的報(bào)告對于MUCAP試驗(yàn)陰性的樣品，報(bào)告為“未檢出沙門氏菌”；對于MUCAP試驗(yàn)陽性、氧化酶試驗(yàn)陰性的樣品，繼續(xù)進(jìn)行生化和血清學(xué)試驗(yàn)。(5) 生化學(xué)鑒定挑取選擇性瓊脂平板上的可疑菌落，接種在三糖鐵瓊脂斜面和底層穿刺。4.操作步驟(3) 測

21、定從培養(yǎng)的分離培養(yǎng)基上選可疑沙門氏菌4.操作步驟表3-2腸桿菌科各菌屬生化反應(yīng)的初步鑒定4.操作步驟表3-2腸桿菌科各菌屬生化反應(yīng)的初步鑒定4.操作步驟表3-2腸桿菌科各菌屬生化反應(yīng)的初步鑒定4.操作步驟表3-2腸桿菌科各菌屬生化反應(yīng)的初步鑒定4.操作步驟表3-2腸桿菌科各菌屬生化反應(yīng)的初步鑒定4.操作步驟表3-2腸桿菌科各菌屬生化反應(yīng)的初步鑒定4.操作步驟表3-3甘露醇和山梨醇鑒定4.操作步驟表3-3甘露醇和山梨醇鑒定4.操作步驟表3-4鳥氨酸、ONPG、水楊苷、棉子糖及半固體動力試驗(yàn)4.操作步驟表3-4鳥氨酸、ONPG、水楊苷、棉子糖及半固4.操作步驟(6) 血清學(xué)分型鑒定1) 抗原的準(zhǔn)備

22、：一般采用1.5%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))瓊脂斜面培養(yǎng)物做玻片凝集試驗(yàn)用的抗原。2) 抗原的鑒定：先用AF多價(jià)血清做玻片凝集試驗(yàn)，同時(shí)用生理鹽水作為對照。3) H抗原的鑒定：根據(jù)所確定的O群，依次用表3-5所述的H因子血清檢查第1相和第2相的H抗原。4.操作步驟(6) 血清學(xué)分型鑒定1) 抗原的準(zhǔn)備：一般采4.操作步驟表3-5AF群常見菌型H抗原4.操作步驟表3-5AF群常見菌型H抗原4.操作步驟 小試管法：將兩端開口的小試管(下端開口要留一缺口，不要平齊)放在半固體瓊脂培養(yǎng)基管內(nèi)，小試管的上端應(yīng)高出培養(yǎng)基表面，滅菌后備用。熔化瓊脂，冷卻至50，挑取已知H因子血清1環(huán)，涂于套管中的瓊脂表面，在37下培養(yǎng)，

23、注意每日觀察。另一相解離后可由套管外的半固體瓊脂表面取菌檢查。 U形管法：向0.4%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))瓊脂培養(yǎng)基中加入適量血清，裝入滅菌U形管內(nèi)，在管口處塞上棉塞，凝固后由一端接種細(xì)菌，培養(yǎng)后，再由另一端取菌檢查。 簡易平板法：將0.7%0.8%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))半固體瓊脂平板的表面水分烘干，挑取H因子血清1環(huán)，滴在半固體瓊脂平板表面，放置片刻，待血清吸收到瓊脂內(nèi)，在血清部位的中央點(diǎn)種待檢細(xì)菌，培養(yǎng)后，在形成蔓延生長的菌苔邊緣取菌檢查。4.操作步驟 小試管法：將兩端開口的小試管(下端開口要留一4.操作步驟4) Vi抗原的鑒定：用Vi因子血清檢查。(7) 菌型的判斷綜合生化試驗(yàn)和血清學(xué)分型鑒定的結(jié)果，按照沙

24、門氏菌屬抗原表判定菌型，并報(bào)告結(jié)果。4.操作步驟4) Vi抗原的鑒定：用Vi因子血清檢查。(75.注意事項(xiàng)1) 沙門氏菌為需氧的革蘭氏芽孢桿菌，有周鞭毛(但存在無動力的變種)，能在普通培養(yǎng)基上生長良好，最適溫度為37，最適pH值為7.27.6。2) 當(dāng)由于Vi抗原存在而阻止O凝集時(shí)，可用生理鹽水將菌苔制成濃菌液，煮沸后再檢查。5.注意事項(xiàng)1) 沙門氏菌為需氧的革蘭氏芽孢桿菌，有周鞭毛(二、志賀氏菌的檢驗(yàn)1.設(shè)備與材料2.培養(yǎng)基與試劑二、志賀氏菌的檢驗(yàn)1.設(shè)備與材料2.培養(yǎng)基與試劑1.設(shè)備與材料1) 培養(yǎng)皿：皿底直徑為9cm。2) 均質(zhì)機(jī)或乳缽。3) 接種針和接種環(huán)。4) 顯微鏡。5) 培養(yǎng)箱。

25、1.設(shè)備與材料1) 培養(yǎng)皿：皿底直徑為9cm。2) 均質(zhì)機(jī)2.培養(yǎng)基與試劑(1) GN增菌液成分如下：2.培養(yǎng)基與試劑(1) GN增菌液成分如下：1.5g(2) HE瓊脂平板同本節(jié)沙門氏菌的檢驗(yàn)。(3) SS瓊脂培養(yǎng)基同本節(jié)沙門氏菌的檢驗(yàn)。(4) 三糖鐵瓊脂同本節(jié)沙門氏菌的檢驗(yàn)。(5) 麥康凱瓊脂成分如下：(6) 氰化鉀培養(yǎng)基成分如下：1.5g(2) HE瓊脂平板同本節(jié)沙門氏菌的檢驗(yàn)。(3)5.64g(7) 氨基酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基成分如下：(8) 伊紅美藍(lán)瓊脂(EMB)成分如下：(9) 半固體管成分如下：(10) 葡萄糖銨瓊脂成分如下：(11) 尿素瓊脂成分如下：(12) 西蒙氏檸檬酸鹽瓊脂成

26、分如下：(13) 5%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))乳糖發(fā)酵管成分如下：(14) 蛋白胨水、靛基質(zhì)試劑(15) 志賀氏菌屬診斷血清足量，備用。3.志賀氏菌的檢驗(yàn)程序(見圖3-2)4.操作步驟5.64g(7) 氨基酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基成分如下：(8)(14) 蛋白胨水、靛基質(zhì)試劑1) 蛋白胨水成分2)靛基質(zhì)試劑 柯凡試劑：將5g對二甲氨基苯甲醛溶解在75mL戊醇中，緩緩加入25mL濃鹽酸。 歐-波試劑：將1g對二甲氨基苯甲醛溶解在95mL酒精(體積分?jǐn)?shù)為95%)中，緩緩加入25mL濃鹽酸。(14) 蛋白胨水、靛基質(zhì)試劑1) 蛋白胨水成分2)靛基質(zhì)3.志賀氏菌的檢驗(yàn)程序(見圖3-2)圖3-2志賀氏菌的檢驗(yàn)程序3.志賀

27、氏菌的檢驗(yàn)程序(見圖3-2)圖3-2志賀氏菌的檢驗(yàn)4.操作步驟(1) 增菌稱取25g樣品，加入225mL GN增菌液，用均質(zhì)器打碎或用乳缽磨碎，于(361)下培養(yǎng)68h。(2) 分離取增菌液1環(huán)，接種于HE瓊脂平板或SS瓊脂平板1個(gè)，麥康凱瓊脂平板或伊紅美藍(lán)瓊脂1個(gè)，于(361)下培養(yǎng)。(3) 生化試驗(yàn)挑取上述平板上的可疑菌落，接種于三糖鐵瓊脂和葡萄糖半固體各1管(為防止遺漏，應(yīng)多挑取幾個(gè)菌落)，于(361)下培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果。4.操作步驟(1) 增菌稱取25g樣品，加入225mL G4.操作步驟表3-6志賀氏菌屬4個(gè)群的生化特性4.操作步驟表3-6志賀氏菌屬4個(gè)群的生化特性4.操作步驟(

28、4) 血清學(xué)試驗(yàn)挑取三糖鐵瓊脂上的培養(yǎng)物，做玻片凝集試驗(yàn)。4.操作步驟(4) 血清學(xué)試驗(yàn)挑取三糖鐵瓊脂上的培養(yǎng)物，做三、葡萄球菌的檢驗(yàn)1.設(shè)備與材料2.培養(yǎng)基與試劑三、葡萄球菌的檢驗(yàn)1.設(shè)備與材料2.培養(yǎng)基與試劑1.設(shè)備與材料1) 供常規(guī)平板計(jì)數(shù)用的基本設(shè)備與材料。2) L形玻璃棒。1.設(shè)備與材料1) 供常規(guī)平板計(jì)數(shù)用的基本設(shè)備與材料。2)2.培養(yǎng)基與試劑(1) 普通肉湯培養(yǎng)基成分如下：2.培養(yǎng)基與試劑(1) 普通肉湯培養(yǎng)基成分如下：1000.0mL(2) 胰蛋白胨大豆肉湯成分如下：1000.0mL(2) 胰蛋白胨大豆肉湯成分如下：1000.0mL(3) Baird-Parker培養(yǎng)基成分如下

29、：1000.0mL(3) Baird-Parker培養(yǎng)基成分950.0mL(4) 甲苯胺藍(lán)-DNA瓊脂成分如下：950.0mL(4) 甲苯胺藍(lán)-DNA瓊脂成分如下：10.0g0.083g10.0g0.083g6.1g(5) 生理鹽水成分如下：6.1g(5) 生理鹽水成分如下：1000.0mL(6) 凝固酶試驗(yàn)兔血漿臨用時(shí)取質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3.8%的檸檬酸鈉溶液(取檸檬酸鈉3.8g，加蒸餾水100mL，待溶解后過濾，121高壓滅菌15min)1份，加入新鮮兔血4份，混勻后放冰箱中使用球沉降(或以3000r/min離心30min)后取上清液進(jìn)行試驗(yàn)。3.葡萄球菌的檢驗(yàn)程序(見圖3-3)4.操作步驟100

30、0.0mL(6) 凝固酶試驗(yàn)兔血漿臨用時(shí)取質(zhì)量分?jǐn)?shù)為(6) 凝固酶試驗(yàn)兔血漿臨用時(shí)取質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3.8%的檸檬酸鈉溶液(取檸檬酸鈉3.8g，加蒸餾水100mL，待溶解后過濾，121高壓滅菌15min)1份，加入新鮮兔血4份，混勻后放冰箱中使用球沉降(或以3000r/min離心30min)后取上清液進(jìn)行試驗(yàn)。(6) 凝固酶試驗(yàn)兔血漿臨用時(shí)取質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3.8%的檸檬酸3.葡萄球菌的檢驗(yàn)程序(見圖3-3)圖3-3葡萄球菌的檢驗(yàn)程序3.葡萄球菌的檢驗(yàn)程序(見圖3-3)圖3-3葡萄球菌的檢驗(yàn)4.操作步驟(1) 樣品的制備1) 固體或半固體食品：以無菌操作稱取25g樣品，放入裝有225mL滅菌生理鹽水的滅菌

31、均質(zhì)杯內(nèi)，以8000r/min的轉(zhuǎn)速均質(zhì)12min，制成110樣品勻液。2) 液體食品：用滅菌吸管吸取25mL樣品，放入裝有225mL滅菌生理鹽水的滅菌玻璃瓶內(nèi)(瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠)，經(jīng)充分振搖制成110樣品勻液。(2) 檢驗(yàn)1) 最近似值(MPN)測定法：選三個(gè)連續(xù)稀釋度，從每個(gè)稀釋度的稀釋樣品液中分別取1mL，接種3管含10%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))氯化鈉胰蛋白胨大豆肉湯。4.操作步驟(1) 樣品的制備1) 固體或半固體食品：以無4.操作步驟2) 平板表面計(jì)數(shù)法：選三個(gè)連續(xù)稀釋度，從每個(gè)稀釋度的稀釋樣品液中分別取1mL，接種至3個(gè)表面干燥的Baird-Parker瓊脂平板上(如0.4mL，0.3

32、mL，0.3mL)。4.操作步驟2) 平板表面計(jì)數(shù)法：選三個(gè)連續(xù)稀釋度，從每個(gè)稀4.操作步驟表3-71g樣品的最近似值(MPN)表(以0.1、0.01、0.001g各用3管)4.操作步驟表3-71g樣品的最近似值(MPN)表(以0.4.操作步驟表3-71g樣品的最近似值(MPN)表(以0.1、0.01、0.001g各用3管)4.操作步驟表3-71g樣品的最近似值(MPN)表(以0.4.操作步驟3) 非選擇性增菌法：取110稀釋的樣品液10mL，接種于雙料胰蛋白胨大豆肉湯中，于(361)培養(yǎng)2h，然后加入20mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20%的氯化鈉的單料胰蛋白胨大豆肉湯，于(361)培養(yǎng)2226h。4.操作

33、步驟3) 非選擇性增菌法：取110稀釋的樣品液10四、溶血性鏈球菌的檢驗(yàn)1.設(shè)備與材料2.培養(yǎng)基與試劑0.01g3.溶血性鏈球菌的檢驗(yàn)程序(見圖3-4)4.操作步驟5.注意事項(xiàng)四、溶血性鏈球菌的檢驗(yàn)1.設(shè)備與材料2.培養(yǎng)基與試劑0.1.設(shè)備與材料1) 培養(yǎng)箱：(361)。2) 恒溫水浴鍋：(361)。3) 顯微鏡。4) 離心機(jī)。5) 滅菌培養(yǎng)皿：皿底直徑9cm。6) 均質(zhì)機(jī)。7) 接種環(huán)。1.設(shè)備與材料1) 培養(yǎng)箱：(361)。2) 恒溫水浴2.培養(yǎng)基與試劑(1) 肉浸液肉湯培養(yǎng)基成分如下：(2) 葡萄糖肉浸液肉湯培養(yǎng)基制法：在上述肉浸液肉湯培養(yǎng)基中加入1%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))葡萄糖。(3) 匹克氏肉

34、湯培養(yǎng)基成分如下：(4) 血瓊脂平板成分如下：(5) 草酸鉀人血漿成分如下：2.培養(yǎng)基與試劑(1) 肉浸液肉湯培養(yǎng)基成分如下：(2)0.01g(6) 0.25%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))氯化鈣適量，備用。(7) 滅菌生理鹽水適量，備用。(8) 桿菌肽藥敏紙片(0.04單位/片)適量，備用。0.01g(6) 0.25%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))氯化鈣適量，備用。3.溶血性鏈球菌的檢驗(yàn)程序(見圖3-4)圖3-4溶血性鏈球菌的檢驗(yàn)程序3.溶血性鏈球菌的檢驗(yàn)程序(見圖3-4)圖3-4溶血性鏈球4.操作步驟(1) 樣品的處理稱取25g樣品，加入225mL滅菌生理鹽水，研成勻漿后制成混懸液。(2) 增菌及分離培養(yǎng)吸取上述混懸液5mL

35、，接種于50mL葡萄糖肉浸液肉湯培養(yǎng)基，或直接劃線接種于血瓊脂平板。(3) 鑒定1) 形態(tài)與染色：溶血性鏈球菌是鏈狀排列的革蘭氏陽性球菌，直徑一般為0.51m，鏈的長短不一，短鏈由48個(gè)細(xì)胞組成，長鏈則由2030個(gè)細(xì)胞組成。2) 培養(yǎng)特性：溶血性鏈球菌對營養(yǎng)要求較高，在普通培養(yǎng)基上會生長不良，在加有血液、血清的培養(yǎng)基上則生長較好。4.操作步驟(1) 樣品的處理稱取25g樣品，加入225m4.操作步驟3) 鏈激酶試驗(yàn)：乙型溶血性鏈球菌能產(chǎn)生鏈激酶(溶纖維蛋白酶)，此酶能激活正常人體血液中的血漿蛋白酶原，形成血漿蛋白酶，然后溶解纖維蛋白。4) 桿菌肽藥敏試驗(yàn)：低濃度的桿菌肽能抑制乙型溶血性鏈球菌的

36、生長，除少數(shù)菌株對桿菌肽耐藥外，其敏感率可達(dá)99.5%。4.操作步驟3) 鏈激酶試驗(yàn)：乙型溶血性鏈球菌能產(chǎn)生鏈激酶(第四節(jié)糕點(diǎn)、糖果檢驗(yàn)技能訓(xùn)練1.儀器與試劑的準(zhǔn)備2.操作步驟3.數(shù)據(jù)記錄及處理1.儀器與試劑的準(zhǔn)備2.操作步驟3.數(shù)據(jù)記錄及處理1.儀器與試劑的準(zhǔn)備2.操作步驟1.儀器與試劑的準(zhǔn)備2.操作步驟1.儀器與試劑的準(zhǔn)備2.操作步驟1.儀器與試劑的準(zhǔn)備第四節(jié)糕點(diǎn)、糖果檢驗(yàn)技能訓(xùn)練1.儀器與試劑的準(zhǔn)備2.操作第四節(jié)糕點(diǎn)、糖果檢驗(yàn)技能訓(xùn)練2.操作步驟1.原子吸收分光光度法測定食品中鋅含量的原理是什么？處理樣品的方法有哪些？加入硫代硫酸鈉的目的是什么？測定時(shí)如何調(diào)整原子吸收分光光度計(jì)的測定條件

37、？2.影響糖果及糕點(diǎn)微生物超標(biāo)的因素有哪些？3.檢驗(yàn)沙門氏菌時(shí)，為什么要進(jìn)行前增菌和直接增菌？哪些方法可以將沙門氏菌屬與其他腸桿菌屬區(qū)分開來？4.葡萄球菌在血瓊脂平板上的菌落顏色和溶血特征在鑒定上有何意義？5.如果染色形態(tài)為革蘭氏陽性葡萄狀球菌，那么是否就能說明這種菌為葡萄球菌？6.如果從食物中毒標(biāo)本中分離出葡萄球菌，是否就能說明它一定是引起這次食物中毒的病原菌？7.甲、乙型鏈球菌在血瓊脂平板上的菌落特點(diǎn)及溶血特征是什么？第四節(jié)糕點(diǎn)、糖果檢驗(yàn)技能訓(xùn)練2.操作步驟1.原子吸收分光第四節(jié)糕點(diǎn)、糖果檢驗(yàn)技能訓(xùn)練8.鏈激酶試驗(yàn)的原理是什么？第四節(jié)糕點(diǎn)、糖果檢驗(yàn)技能訓(xùn)練8.鏈激酶試驗(yàn)的原理是什么？1.儀

38、器與試劑的準(zhǔn)備(1) 儀器原子吸收分光光度計(jì)。(2) 試劑銅標(biāo)準(zhǔn)溶液(每毫升相當(dāng)于1mg銅)、銅標(biāo)準(zhǔn)使用液(每毫升相當(dāng)于10g銅)。1.儀器與試劑的準(zhǔn)備(1) 儀器原子吸收分光光度計(jì)。(23.數(shù)據(jù)記錄及處理(1) 數(shù)據(jù)記錄3.數(shù)據(jù)記錄及處理(1) 數(shù)據(jù)記錄3.數(shù)據(jù)記錄及處理表格3.數(shù)據(jù)記錄及處理表格3.數(shù)據(jù)記錄及處理表格3.數(shù)據(jù)記錄及處理表格3.數(shù)據(jù)記錄及處理(2) 測定根據(jù)空白溶液和各樣品溶液的吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出空白溶液和各樣品溶液中銅的含量。(3) 結(jié)果計(jì)算樣品中銅含量的計(jì)算公式為3.數(shù)據(jù)記錄及處理(2) 測定根據(jù)空白溶液和各樣品溶液的吸1.儀器與試劑的準(zhǔn)備(1) 儀器原子吸收分光光度計(jì)。(2) 試劑1mol/L鹽酸、硝酸-高氯酸混合酸(31) 、鋅標(biāo)準(zhǔn)溶液(每毫升相當(dāng)于0.5mg鋅)、鋅標(biāo)準(zhǔn)使用液(每毫升相當(dāng)于100g鋅)。1.儀器與試劑的準(zhǔn)備(1) 儀器原子吸收分光光度計(jì)。(23.數(shù)據(jù)記錄及處理(1) 數(shù)據(jù)記錄3.數(shù)據(jù)記錄及處理(1) 數(shù)據(jù)記錄3.數(shù)據(jù)記錄及處理表格3.數(shù)據(jù)記錄及處理表格3.數(shù)據(jù)記錄及處理表格3.數(shù)據(jù)記錄及處理表格3.數(shù)據(jù)記錄及處理(2) 測定根據(jù)空白溶液和各樣品溶液的吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出空白溶液和各樣品溶液中鋅的質(zhì)量。(3) 結(jié)果計(jì)算樣品中鋅含量的計(jì)算公式為3.數(shù)據(jù)記錄