羅氏試劑盒說明書 C-Peptide03724875001V4

1、03724875001V4C肽(Connecting peptide，C-Peptide） 2007-06, V 4 中文 6/6 Elecsys 和 cobas e 分析儀03184897 190 100測試本試劑盒適用的分析儀Elecsys 1010Elecsys 2010MODULAR ANALYTICS E170cobas e 411cobas e 601主要用途用于體外定量檢測人體血清、血漿或尿液中的C肽。檢測可輔助診療胰島素異常分泌的病人。Elecsys和cobas e免疫分析儀的工作原理是電化學(xué)發(fā)光免疫分析“ECLIA”。臨床應(yīng)用C肽是由31個氨基酸（AA 33-63）組成的單鏈

2、多肽，分子量約為3021道爾頓。1,2C肽是胰島素生物合成過程中胰島素原裂解成為胰島素的伴隨產(chǎn)物。胰島素原儲存在胰腺細胞高爾基復(fù)合體的分泌顆粒中，由前胰島素原裂解產(chǎn)生。2,3C肽在構(gòu)建胰島素原分子二硫鍵和胰島素雙鏈（A鏈和B鏈）結(jié)構(gòu)中發(fā)揮重要作用。胰島素和C肽呈等量分泌并釋放到外周血循環(huán)中。4雖然是胰島素的另一半，但肝臟幾乎不攝取C肽，所以其半壽期長于胰島素，約為35分鐘；在外周血中C肽的濃度是胰島素的5到10倍，而且波動的幅度也小于胰島素。2，3，4C肽不被肝臟攝取，通過腎臟排泄，且尿液中的分泌片斷也不會發(fā)生變化。尿液中C肽的濃度是血清的2050倍。因此，腎臟疾病患者的C肽水平會升高。1,2

3、，3以往認為C肽不具有生物學(xué)活性。但是最新研究所闡明的C肽的分子學(xué)和生理學(xué)效應(yīng)，表明其是具有生物活性的多肽。有證據(jù)顯示C肽作為胰島素的替代，可阻止型糖尿病長期并發(fā)癥的進展。5，6，7，8，9，10C肽、胰島素和血糖檢測用于輔助低血糖的鑒別診斷（假性低血糖和胰島素過多引起的低血糖），以保證合理治療患者。通過空腹、刺激和抑制實驗并定量檢測C肽可反映內(nèi)源性胰島素的分泌情況。由于內(nèi)源性抗胰島素自身抗體的高發(fā)生率，對于依賴胰島素治療的糖尿病患者檢測C肽比檢測胰島素更能真實地反映胰島素的分泌情況。因此，C肽檢測可以輔助評估型糖尿病早期的胰腺細胞功能；鑒別診斷成人隱匿性自身免疫性糖尿病（LADA）與型糖尿病

4、。2，3，11，12，13，14C肽檢測也可用于胰腺移植和胰腺切除術(shù)的療效評估和監(jiān)測。2，3如果需要連續(xù)評價胰腺細胞功能或者頻繁采血有困難（例如：兒童）時，可以檢測尿液中的C肽。2尿液中的C肽排泄量可用于評估妊娠性糖尿病的胰島功能和胰島素依賴性糖尿?。↖DDM）患者的甘油三脂控制情況。15，16盡管不推薦C肽作為糖尿病的常規(guī)監(jiān)測項目，但對于需要長效控制的個性化治療方案的制訂是很有用的工具。17，18胰腺細胞活性增高引起的高胰島素血癥、腎功能不全和肥胖均可導(dǎo)致C肽水平的升高。2研究證實高C肽水平與高脂蛋白血癥和高血壓密切相關(guān)。19C肽水平降低見于饑餓、假性低血糖、胰島素分泌不足（NIDDM，ID

5、DM）、Addisons病和胰腺切除術(shù)后。檢測原理雙抗體夾心法，總檢測時間：18分鐘第一次孵育：20l樣本、生物素化的特異性C肽單克隆抗體以及釕復(fù)合物標(biāo)記a的特異性C肽單克隆抗體一起孵育，形成抗原抗體夾心復(fù)合物。第二次孵育：添加包被鏈霉素的磁珠微粒進行孵育，復(fù)合體與磁珠通過生物素和鏈霉素的作用結(jié)合。將反應(yīng)液吸入測量池中，通過電磁作用將磁珠吸附在電極表面。未與磁珠結(jié)合的物質(zhì)通過ProCell被去除。給電極加以一定的電壓，使復(fù)合體化學(xué)發(fā)光，并通過光電倍增器測量發(fā)光強度。Elecsys軟件自動通過定標(biāo)曲線計算得到檢測結(jié)果。a)Tris(2,2-bipyridyl)ruthenium(II)-comp

6、lex (Ru(bpy)三聯(lián)吡啶釕試劑工作溶液M包被鏈霉素的磁珠微粒（透明瓶蓋），每瓶6.5ml；包被鏈霉素的磁珠微粒，0.72mg/mL；防腐劑。R1生物素化的Anti-C肽抗體（灰色瓶蓋），每瓶9ml：生物素化的Anti-C肽抗體（鼠源）約1 mg/ L，磷酸鹽緩沖液50 mmol/L，Ph6.0; 防腐劑R2 釕復(fù)合物標(biāo)記a的Anti-C肽抗體（黑色瓶蓋），每瓶9ml：釕復(fù)合物標(biāo)記a的Anti-C肽抗體（鼠源）0.4mg/L；磷酸鹽緩沖液50mmol/L，pH6.0; 防腐劑警告和注意事項僅用于體外診斷。在使用本試劑盒時必需遵循所有試驗室試劑操作的注意事項。所有廢棄物必需按照當(dāng)?shù)胤ㄒ?guī)進行

7、處置。專業(yè)人員可要求獲得安全數(shù)據(jù)報告。避免試劑和樣本（樣本、定標(biāo)液和質(zhì)控品）產(chǎn)生氣泡。試劑處理試劑盒為即用型，不能分開使用。試劑相關(guān)信息可以通過試劑條形碼閱讀獲取。儲存及穩(wěn)定性存放于28請垂直擺放Elecsys C肽試劑盒，確保儀器的自動攪拌器能夠完全混勻磁珠微粒。穩(wěn)定性：未開封試劑，28有效期內(nèi)均可使用開封試劑，2812周放置分析儀MODULAR ANALYTICS E170 和cobas e 601上8周放置分析儀Elecsys 2010 和 cobas e 411上8周放置分析儀Elecsys 1010上4周（試劑交替放置于冰箱和20-25的分析儀中，持續(xù)開蓋的情況下至多20小時樣本的采

8、集和準(zhǔn)備僅以下羅列的樣本類型通過實驗符合檢測要求。血清樣本須用標(biāo)準(zhǔn)試管或有分離膠的真空管收集。肝素鋰和K3-EDTA抗凝的血漿都適用。標(biāo)準(zhǔn)：血清值回收率90-110或者斜率0.9-1.1；相關(guān)系數(shù)0.9524小時尿液：使用Elecsys Diluent MultiAssay 1：10預(yù)稀釋。血清和24小時尿液樣本穩(wěn)定性： 15-25可保存4小時；2-8可保存24小時；-20可保存30天，一次凍融。選擇合適的試管進行不同類型樣本的采集，不是所有的試管均可用于檢測。不同廠商的樣本采集系統(tǒng)可能含有不同的物質(zhì)，某些情況下會影響檢測結(jié)果。如果使用原始管進行檢測（樣本前處理系統(tǒng)）時，應(yīng)遵循生產(chǎn)商所提供的指

9、導(dǎo)。有沉淀的樣本檢測前必須先作離心處理。添加疊氮化合物的樣本和質(zhì)控品均不能使用。檢測前，樣本、定標(biāo)液及質(zhì)控品須室溫平衡(2025)。由于蒸發(fā)因素的影響，樣本、定標(biāo)液及質(zhì)控品在分析儀上的檢測必須2小時內(nèi)完成。提供的物品參閱“試劑工作溶液”章節(jié)。需要的物品（未提供）貨號03184919, C-Peptide CalSet, 規(guī)格4 x1 ml貨號03609979, PreciControl MultiAnalyte，規(guī)格2 x2 ml，分別為PreciControl MultiAnalyte 1和2貨號03609987，Diluent MultiAssay,規(guī)格2 x16 mL，樣本稀釋液實驗室基

10、礎(chǔ)設(shè)備Elecsys 1010/2010 、MODULAR ANALYTICS E170或cobas e分析儀Elecsys 1010/2010和cobas e 411分析儀所需材料：貨號11662988, ProCell, 6 x 380 mL ,系統(tǒng)緩沖液貨號11662970, CleanCell, 6 x 380 mL,測量池洗液 貨號11930346, Elecsys SysWash, 1 x 500 mL 附加洗液貨號11933159, SysClean 適配器 貨號11706829, Elecsys 1010分析杯, 12 x 32反應(yīng)管或者貨號11706802, Elecsys

11、2010 分析杯, 60 x 60 反應(yīng)管貨號11706799, Elecsys 2010 分析吸頭, 30 x 120 移液管吸頭 MODULAR ANALYTICS E170和cobas e 601分析儀所需材料：貨號04880340,ProCell M, 2 x 2 L 貨號04880293, CleanCell M, 2 x 2 L測量池洗液貨號03023141, PC/CC杯, 12個用于在檢測前預(yù)熱Procell M及Cleancell M。貨號03005712,ProbeWash M, 12 x 70 mL 清洗液，用于在檢測完畢后或更換試劑時清洗試劑針。貨號12102137,反

12、應(yīng)杯/吸頭 組合裝,84反應(yīng)杯/吸頭 組合裝48盒,廢物袋 貨號03023150, WasteLiner,廢物袋 貨號03027651,系統(tǒng)清潔適配器 M所有分析儀需要：貨號11298500, Elecsys SysClean, 5 x 100 mL 系統(tǒng)清洗液 檢測要優(yōu)化檢測性能，請遵照本說明書中有關(guān)分析儀的相關(guān)指導(dǎo)，并參照分析儀操作手冊。試劑使用前分析儀自動攪拌磁珠微粒，使其處于懸浮狀態(tài)。試劑相關(guān)信息可通過條形碼自動讀取，在特殊情況下，分析儀無法自動讀取條碼信息時，請輸入條碼標(biāo)簽上的15位數(shù)字序列。MODULAR ANALYTICS E170、Elecsys2010和cobas e分析儀：

13、將冷藏試劑室溫平衡至20C左右，放置分析儀的試劑盤（20C）內(nèi)。避免泡沫產(chǎn)生。分析儀能自動調(diào)節(jié)試劑溫度和開、關(guān)各試劑盒瓶蓋。Elecsys 1010 分析儀: 將冷藏試劑室溫平衡至20-25C左右，放置分析儀的試劑盤（20- 25C）內(nèi)。避免泡沫產(chǎn)生。使用前后手動開關(guān)試劑盒瓶蓋。使用后保存于定標(biāo)溯源性：該方法可溯源至WHO免疫測定國際參考試劑，IRR，code 84/510(NationalInstitute for Biological Standards and Control （NIBSC）于1986年制訂)。20每套Elecsys C肽試劑的條碼標(biāo)簽上均含有其批號特異的定標(biāo)信息。使用E

14、lecsys C肽定標(biāo)液可調(diào)整定標(biāo)曲線。定校頻率：新批號試劑必須進行定標(biāo)（新試劑盒在分析儀上放置不能超過24小時）。以下情況建議重新進行定標(biāo)：MODULAR ANALYTICS E170, Elecsys 2010 和cobas e 分析儀:使用同一批號試劑，1月后（28天）7天后（同一試劑盒在分析儀上使用）Elecsys 1010 分析儀:每盒試劑7天后（室溫 20-25C3天后（室溫 25-32所有儀器根據(jù)需要：如失控。質(zhì)控室內(nèi)質(zhì)控可使用Elecsys PreciControl MultiAnalyte 1和2。也可以使用其他合適的質(zhì)控品。各濃度質(zhì)控至少每24小時內(nèi)檢測一次，每次更換試劑盒

15、或定標(biāo)后也須進行質(zhì)控。每個實驗室可根據(jù)各自的情況設(shè)定合適的控制限和質(zhì)控周期。質(zhì)控值必須處于規(guī)定的控制限內(nèi)。若失控每個試驗室必須采取相應(yīng)的糾正措施。計算儀器會自動計算每個樣本中的分析物濃度，單位是nmol/L，ng/ml或pmol/L（可選擇）。轉(zhuǎn)換因子:ng/ml（g/L）0.33333=nmol/Lng/ml333.33pmol/L nmol/L3.0=ng/ml pmol/L0.003=ng/ml干擾因素檢測結(jié)果不受黃疸（膽紅素855mol/L或50 mg/dL）, 溶血（血紅蛋白0.186mmol/L或 0.3g/dL）, 脂血(脂肪乳劑 2000mg/dL)和生物素 5mg/天），必須

16、在末次生物素治療8小時后采集樣本。濃度達1200 IU/ml的類風(fēng)濕因子對檢測無影響。濃度高達60 nmol/L（180ng/ml）的C肽對檢測不產(chǎn)生hook效應(yīng)。體外分別對17種常用藥物進行血清試驗未發(fā)現(xiàn)會影響檢測結(jié)果；對13種常用藥物進行尿液試驗未發(fā)現(xiàn)會影響檢測結(jié)果。由于檢測試劑中含有單克隆鼠抗體，因此某些接受單克隆鼠抗體治療或診斷的患者樣本檢測結(jié)果可能有誤。少數(shù)病例中極高濃度的鏈霉素抗體和釕會影響檢測結(jié)果。試劑含有的添加成份減少了上述因素的影響。作為診斷指標(biāo)，必須結(jié)合患者病史，臨床檢查和其他臨床資料來綜合評估檢測結(jié)果。檢測范圍血清和血漿：0.003-13.3 nmol/L或0.01-40

17、 ng/mL（通過最低檢出限和廠商定標(biāo)曲線的最高值確定）。低于檢出限的值報告0.003nmol/L或13.3 nmol/L或40 ng/mL（如樣本10倍稀釋則為133 nmol/L或400 ng/mL）。尿液：0.03-133 nmol/L或0.1-400 ng/mL（尿液和Elecsys Diluent MultiAssay的稀釋比為1:10，通過最低檢出限和廠商定標(biāo)曲線的最高值稀釋倍數(shù)確定）。低于檢出限的值報告0.03 nmol/L或133 nmol/L或400 ng/mL或者重新使用更高的稀釋倍數(shù)進行稀釋。稀釋血清和血漿：檢測范圍已經(jīng)很寬，需要稀釋的可能性很小，如需稀釋可使用Elecs

18、ys Diluent MultiAssay進行稀釋。推薦稀釋比是1:10（MODULARANALYTICS E170, Elecsys 1010/2010 和 cobas e分析儀自動稀釋或者手工稀釋）。稀釋樣本的濃度必須1.3 nmol/L（4 ng/ml）。手工稀釋的檢測結(jié)果要乘以稀釋倍數(shù)。分析儀稀釋后MODULARANALYTICS E170，Elecsys 1010/2010 和 cobas e軟件會自動計算結(jié)果。尿液：所有尿液標(biāo)本檢測前必須使用Elecsys Diluent MultiAssay 1:10預(yù)稀釋。分析儀稀釋后MODULARANALYTICS E170，Elecsys

19、1010/2010 和 cobas e軟件會自動計算結(jié)果。高于檢測范圍的尿液樣本可以1:20或更高稀釋比稀釋檢測。稀釋樣本的濃度必須1.3 nmol/L（4 ng/ml）。手工稀釋的檢測結(jié)果要乘以稀釋倍數(shù)。分析儀稀釋后MODULARANALYTICS E170，Elecsys 1010/2010 和 cobas e軟件會自動計算結(jié)果。期望值研究數(shù)據(jù)通過Elecsys C肽檢測表面健康人群的空腹血清標(biāo)本和24小時尿液標(biāo)本。具體如下表：每個實驗室應(yīng)通過實驗確定參考范圍的適用性，必要時建立本實驗室的參考范圍。特殊的性能指標(biāo)試劑在分析儀上的性能試驗數(shù)據(jù)如下。各實驗室由于具體情況不同，所得出的數(shù)據(jù)可能會

20、稍有差異。精密度血清和血漿：使用Elecsys試劑盒、人混合血清樣本和質(zhì)控品進行重復(fù)性實驗（按照CLSI的EP5-A2執(zhí)行）：每天6次，共10天 (n=60)；人血清樣本3每天5次(n=59)。批內(nèi)精密度由 MODULAR ANALYTICS E170分析儀完成，n=21下面是獲得的結(jié)果。尿液：使用Elecsys試劑盒、當(dāng)?shù)睾拖♂屇蛞哼M行重復(fù)性實驗，批內(nèi)精密度(n=21)，批間精密度(n=10)：儀器自動對倍稀釋。下面是獲得的結(jié)果。分析靈敏度（最低檢出限）0.003 nmol/L（0.01 ng/mL）最低檢出限是最低濃度標(biāo)準(zhǔn)品+2SD得到的濃度（廠商定標(biāo)品1+2SD，批內(nèi)精密度，n=21）。

21、方法學(xué)比較血清使用臨床血清樣本比較Elecsys C肽檢測（y）和可靠的商業(yè)化試劑C肽檢測（x）。相關(guān)性數(shù)據(jù)如下：標(biāo)本數(shù)n=266Passing/Bablok21 線性回歸y = 1.07x + 0.03 y = 1.11x - 0.15r = 0.962 r = 0.996比較樣品濃度約為0.1577.26 nmol/L(0.47021.8 ng/ml)。尿液使用尿液樣本比較Elecsys C肽檢測（y）和可靠的商業(yè)化試劑C肽檢測（x）。相關(guān)性數(shù)據(jù)如下：標(biāo)本數(shù)n=72Passing/Bablok21 線性回歸y = 0.95x - 0.03 y = 1.02x 3.69r = 0.921 r

22、 = 0.992比較樣品濃度約為0.223173 nmol/L(0.670518 ng/ml)。分析特異性使用單克隆抗體，發(fā)現(xiàn)的交叉反應(yīng)如下：Elecsys C肽檢測使用兩個特異性識別人C肽的單克隆抗體。該抗體與人胰島素原中的C肽或胰島素原的裂解產(chǎn)物有交叉反應(yīng)。健康人空腹?fàn)顟B(tài)時，胰島素原和裂解產(chǎn)物的濃度比C肽低100倍，因此交叉反應(yīng)對臨床不造成明顯影響。但有報道胰島素瘤的患者其胰島素原的濃度可達正常人空腹?fàn)顟B(tài)的60倍。參考文獻1. Clark PM. Assays for insulin, proinsulin(s) and C-peptide.Ann Clin Biochem 1999;36

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