植入前遺傳學診斷課件

植入前遺傳學診斷新進展

preimplantationgeneticdiagnosis(PGD)′s latestprogress

主講：吳振楠2009041101組員：王芳，吳明瑤PGD的定義，應(yīng)用及分類植入前遺傳學診斷(preimplantationgeneticdiagnosis/PGD)是輔助生殖技術(shù)與遺傳學診斷技術(shù)相結(jié)合的一種植入前診斷技術(shù)，為遺傳病高危夫婦提供盡可能大的選擇范圍，把對某些疾病發(fā)現(xiàn)和診斷的時機提前到胚胎發(fā)育的最早階段，阻斷一些單基因疾病及染色體異常疾病的發(fā)生是輔助生殖技術(shù)的一個重要方面。PGD的常規(guī)方法目前應(yīng)用于PGD的常規(guī)方法有聚合酶鏈反應(yīng)(polymerasechainreaction，PCR)和熒光原位雜交(fluorescenceinsituhybridization．FISH)常用的PCR類型有巢式PCR、多重PCR、熒光PCR、熒光定量PCR等。PCR擴增后，用于后續(xù)基因診斷的方法主要有：①根據(jù)特異性目的條帶的有無做出診斷，主要用于由基因缺失而引起的疾病的診斷。②多態(tài)性分析，即在致病基因附近尋找?guī)讉€與其緊密連鎖的DNA多態(tài)性位點。通過連鎖分析進行診斷和攜帶者檢測。③等位基因寡核苷酸特異探針(allele．specificoligonucleotide。ASO)斑點雜交及反向斑點雜交(reversedotblot，RDB)。④單鏈構(gòu)象多態(tài)性(single．strandconformationpolymorphismanalysis。SSCP)及變性梯度凝膠電泳(denaturinggradientgelelectrophoresis，DGGE)等FISH是用帶有熒光標記的特異性探針與染色體結(jié)合后，在熒光顯微鏡下觀察特定染色體的情況。常用于PGD的FISH探針有染色體記數(shù)探針(CEP)、染色體特異單一序列探針(CSI)等，針對不同的需要可以選用不同的探針。除了上述方法外，一些新方法、新技術(shù)不斷出現(xiàn)并應(yīng)用到臨床PGD中。一、微陣列比較基因組雜交二、微測序技術(shù)三、多重置換擴增二、微測序技術(shù)微測序技術(shù)，又稱為單核苷酸引物延伸法(singlenucleotideprimerextension，SnuPE)，是一種有多種用途的新技術(shù)，已經(jīng)廣泛應(yīng)用于法醫(yī)學、人口遺傳學等領(lǐng)域。其原理是設(shè)計一對針對突變位點的特異性引物，退火后直接結(jié)合于突變位點附近，同時加入與野生型及突變型模板互補的一種熒光雙脫氧核苷酸，分別用不同的顏色標記4種雙脫氧核苷酸，經(jīng)過多輪的延伸與鏈終止過程，產(chǎn)生許多帶有熒光標記的核苷酸片段，經(jīng)毛細管電泳從而實現(xiàn)對模板序列的推導。微測序技術(shù)具有快速、敏感的特點，結(jié)合毛細管電泳技術(shù)可以一次實現(xiàn)對多個突變位點的檢測而實現(xiàn)高通量分析。微測序技術(shù)開始主要用于檢測單核苷酸多態(tài)性(·singlenucleotidepolymorphism，SNP)的突變位點。三、多重置換擴增多重置換擴增(multipledisplacementamplification，MDA)MDA是一種基于酶促反應(yīng)而不依賴熱循環(huán)的DNA體外等溫擴增技術(shù)，可用于質(zhì)粒、細菌人工染色體(bacterialartificialchromosome，BAC)及全基因組DNA的擴增。認為用MDA進行全基因組擴增(wholegenomeamplification，WGA)是當前效率最高的全基因組擴增方法?；蚪M中不同位置的各個位點都能通過MDA實現(xiàn)相似的擴增效率。Hellani等報道首例應(yīng)用MDA診斷地中海貧血及囊眭纖維化的PGD。后來用于其他疾病的報道逐漸增多，如Marfan綜合征等。MDA的缺陷有嵌合性DNA重排，包括序列倒位、序列重新拼結(jié)等。用于PGD時，MDA的主要缺點是等位基因脫手13(alleledropout，ADO)。不同位點的ADO大致在13％～36％左右。雖然ADO發(fā)生率較高，但誤診的風險僅為0．02％，這是因為在同時分析多個診斷性相關(guān)的位點的情況下，即使MDA有較高的ADO率，但不可能同時干擾所有的診斷位點，從而保證其有較低的誤診率。THANKYOUFORLISTENLING!IVF/invitrofertilization(試管嬰兒、體外受精)又稱試管嬰兒，是指分別將卵子與精子取出后，置于試管內(nèi)使其受精，再將胚胎前體---受精卵移植回母體子宮內(nèi)發(fā)育成胎兒。試管嬰兒是用人工方法讓卵子和精子在體外受精并進行早期胚胎發(fā)育，然后移植到母體子宮內(nèi)發(fā)育而誕生的嬰兒。一例試管嬰兒退火（annealing）兩條單鏈多核苷酸通過互補堿基之間的氫鍵形成雙鏈分子的過程?？砂l(fā)生在同一來源或不同來源核酸鏈之間，可以形成雙鏈DNA分子、雙鏈RNA或DNA-RNA雜交分子。

遺傳印記（geneticimprinting