選3專題2 2-2-1動物細胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)課件

動物細胞工程主講：柯碧動物細胞培養(yǎng)動物細胞融合單克隆抗體技術(shù)核移植技術(shù)動物細胞工程常用技術(shù)其它動物細胞工程的基礎一、動物細胞培養(yǎng)

就是從動物機體中取出相關(guān)組織，將它分散成單細胞，然后,放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細胞生長和繁殖。1、概念：2.2.1動物細胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)2、原理：細胞增殖如何進行細胞培養(yǎng)?請閱讀課本P44—46，思考下列問題1、無菌、無毒的環(huán)境（培養(yǎng)液和用具的無菌處理，添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、營養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素、動物血清、微量元素等）3、溫度和PH

溫度36.5+0.5度，pH7.2～7.44、氣體環(huán)境

O2和CO2（95%空氣和5%CO2

）4、動物細胞培養(yǎng)條件離體培養(yǎng)的細胞對微生物和有毒物質(zhì)沒有防御能力不能用胃蛋白酶代替胰蛋白酶氧氣是細胞代謝必須的；CO2維持培養(yǎng)液的PH。問題3：用什么方法將組織細胞分散成單個細胞？問題1：動物細胞培養(yǎng)選擇什么材料容易成功？為什么選用它做動物細胞培養(yǎng)材料？動物胚胎或幼齡個體的器官或組織；因為其細胞生命力旺盛，分裂能力強，分化程度低。問題2：為什么培養(yǎng)前要將組織細胞分散成單個細胞？擴大細胞與培養(yǎng)液的接觸面積，利與細胞吸收營養(yǎng)和廢物的排出。

問題4：為什么用胰蛋白酶處理？動物組織細胞間隙中的物質(zhì)主要是蛋白質(zhì)；并且動物細胞培養(yǎng)的最適PH值為7.2-7.4，適宜胰蛋白酶作用注意：控制好時間！長時間處理當然會損傷細胞。胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理1.細胞貼壁：懸液中分散的細胞很快就貼附在瓶壁上（單層）。要求：培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內(nèi)表面光滑、無毒、易于貼附。2.接觸抑制：當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時，細胞就會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細胞的接觸抑制。腫瘤細胞失去接觸抑制。原代培養(yǎng)細胞特點：貼壁生長、接觸抑制：原代培養(yǎng)：人們通常將動物組織消化后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)：當原代培養(yǎng)的細胞處于接觸抑制后,貼滿瓶壁的細胞重新用胰蛋白酶處理,然后分瓶繼續(xù)培養(yǎng)，讓細胞繼續(xù)增殖。（分瓶培養(yǎng)的過程）傳代10代以內(nèi)，細胞正常生長，保持正常二倍體核型。傳代10-50代左右，細胞增殖會逐漸緩慢，以至于完全停止，部分細胞核型可能發(fā)生變化。繼續(xù)傳代培養(yǎng)少部分細胞克服細胞壽命的自然極限，獲得不死性，細胞突變，遺傳物質(zhì)已經(jīng)改變，等同于癌細胞。動物胚胎或幼齡動物的組織、器官胰蛋白酶剪碎單個細胞加培養(yǎng)液制成細胞懸浮液10代細胞部分細胞“癌變”，無限傳代動物細胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成動物體50代細胞原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細胞貼壁剝離、分瓶細胞株細胞細胞系2.動物細胞培養(yǎng)過程：胰蛋白酶5、動物細胞培養(yǎng)技術(shù)的應用（1）生產(chǎn)蛋白生物制品：病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等。（3）用于檢測有毒物質(zhì)（2）為基因工程提供受體細胞（4）用于生理、病理、藥理等方面的研究，為治療和預防疾病提供理論依據(jù)獲得細胞細胞的全能性細胞或細胞產(chǎn)品新的個體或細胞產(chǎn)品培養(yǎng)結(jié)果或細胞產(chǎn)品快速繁殖、培育無病毒植株等培養(yǎng)目的葡萄糖、動物血清蔗糖、植物激素培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)細胞增殖原理動物細胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項目6、植物細胞和動物細胞培養(yǎng)的比較3.動物細胞培養(yǎng)與植物細胞培養(yǎng)的重要區(qū)別在（

）A.培養(yǎng)基不同B.動物細胞培養(yǎng)不需要在無菌條件下進行；C.動物細胞可以傳代培養(yǎng)，而植物細胞不能；D.動物細胞能夠大量培養(yǎng)，而植物細胞只能培養(yǎng)成植株。4．一般來說，動物細胞體外培養(yǎng)需要滿足以下條件①無毒的環(huán)境②無菌的環(huán)境③合成培養(yǎng)基需加血漿④溫度與動物體溫相近⑤需要O2，不需要CO2⑥CO2能調(diào)節(jié)培養(yǎng)液pHA．①②③④⑤⑥B．①②③④C．①③④⑤⑥D(zhuǎn)．①②③④⑥5.下列關(guān)于動物細胞培養(yǎng)的敘述中，錯誤的是A、用于培養(yǎng)的細胞大多取自胚胎或幼齡動物的器官或組織B、將所取的組織先用胰蛋白酶等進行處理使其分散成單個細胞C、在培養(yǎng)瓶中要定期用胰蛋白酶使細胞從瓶壁上脫離，制成懸浮液D、動物細胞培養(yǎng)只能傳50代左右，所培養(yǎng)的細胞會衰老死亡

根據(jù)動物細胞核仍具有全能性的特點,怎樣將動物細胞的全能性表達?

再想一想利用動物體細胞核移植技術(shù)

1.概念：將動物的一個細胞的細胞核，移入一個已經(jīng)去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育成動物個體。用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物核移植（難度高）受體細胞：MⅡ期的卵母細胞三、動物體細胞核移植技術(shù)胚胎細胞核移植：體細胞核移植：細胞分化程度低，恢復全能性容易2、原理：

動物細胞核具有全能性3、種類：◆取供體細胞傳代培養(yǎng)10代以內(nèi)的細胞.為什么？◆激活方法：◆激活目的：◆促融方法：電刺激◆胚胎移植至代孕受體內(nèi)妊娠、分娩核移植流程供體：優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)奶牛受體：普通奶牛（卵母細胞的采集與培養(yǎng)）

體細胞細胞培養(yǎng)體細胞卵巢卵母細胞（MⅡ中期）去核無核卵母細胞注入重組細胞重組胚胎胚胎移植代孕母體生出與供體遺傳基本相同的個體總結(jié)：體細胞核移植過程（供核）（供質(zhì)）（受體）據(jù)上圖思考下列問題：發(fā)育1.在體細胞的細胞核移植到受體卵母細胞之前，為什么必須先去掉受體卵母細胞的核？為使核移植的胚胎或動物的核遺傳物質(zhì)全部來自有重要利用價值的動物提供的體細胞，在供體細胞的細胞核移至受體細胞之前，必須將受體細胞的遺傳物質(zhì)去掉或?qū)⑵淦茐摹?.實施細胞工程時，所需受體細胞大多采用卵母細胞的原因？體積大，易操作。含有促使細胞核表達全能性的物質(zhì)和營養(yǎng)條件。3.你認為用上述體細胞核移植方法生產(chǎn)的克隆動物，是對體細胞供體動物進行了100%的復制嗎？為什么？不是的！因為：①供體動物只提供細胞核，而細胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)（如線粒體DNA）來自于受體卵母細胞.②生物的性狀不僅與遺傳物質(zhì)有關(guān)，還受環(huán)境的影響。

5、體細胞核移植技術(shù)的應用前景1、加速家畜遺傳改良進程，促進優(yōu)良畜群繁育2、保護瀕危物種，增加存活數(shù)量3、克隆動物作為生物反應器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白4、可以作為異種移植的供體，可以用于組織器官的移植前景知識點小結(jié)動物細胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)動物細胞培養(yǎng)動物體細胞核移植技術(shù)和克隆動物概念過程條件應用體細胞核移植的過程核移植技術(shù)和克隆動物的概念體細胞核移植技術(shù)的應用前景體細胞核移植技術(shù)存在的問題練一練1.在克隆羊的培育過程中，將雄羊的體細胞核移入雌羊的去核的卵母細胞中，產(chǎn)生該克隆羊的方式及該克隆羊發(fā)育成熟后所分泌的性激素依次是（）A.無性生殖、雄性激素B.無性生殖、雌性激素C.有性生殖、雄性激素

D.有性生殖、雌性激素A2.把甲牛體細胞的細胞核移入乙牛去核的卵母細胞中，發(fā)育到一定階段植入丙牛的子宮內(nèi)發(fā)育，則出生的小牛（）A.基因型與甲相同，性別一定與乙相同B.基因型與乙相同，性別一定與乙相同C.基因型與丙相同，性別一定與甲相同D.基因型與甲相同，性別一定與甲相同D3.培育克隆牛的過程中，如果供體細胞來自同一頭牛，培育出的這些個體在性狀上也不完全相同，分析其原因，下列說法不正確的是（）A．性狀變異可由環(huán)境條件引起B(yǎng).基因可能會發(fā)生突變C.受體細胞的細胞質(zhì)基因不同D.細胞核基因發(fā)生了重組D黑面綿羊去核卵母細胞白面綿羊乳腺細胞核a重組細胞電脈沖刺激早期重組胚胎b另一頭綿羊的子宮妊娠、出生克隆羊多利（1）寫出a、b所代表工程技術(shù)名稱：a表