人教版微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用（48張）-完整版課件

課題一

微生物的實(shí)驗室培養(yǎng)

了解有關(guān)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識，進(jìn)行無菌技術(shù)的操作，進(jìn)行微生物的培養(yǎng)。

一、課題目標(biāo)：

掌握培養(yǎng)基的制備、高壓蒸氣滅菌和平板劃線法等基本操作技術(shù)，熟練、規(guī)范地進(jìn)行無菌操作，成功地培養(yǎng)微生物。無菌技術(shù)的操作。二、課題重點(diǎn)和難點(diǎn)：三、技能目標(biāo)：微生物特點(diǎn)：結(jié)構(gòu)都相當(dāng)簡單,個體多數(shù)十分微小.通常要用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu).

原核生物界

原生生物界真菌界病毒（一）微生物的結(jié)構(gòu)(細(xì)菌、放線菌、藍(lán)藻)(酵母菌、霉菌、大型真菌)(草履蟲、變形蟲、衣藻)(噬菌體、艾滋病毒)一、基礎(chǔ)知識：細(xì)菌的結(jié)構(gòu)基本結(jié)構(gòu)細(xì)胞壁：肽聚糖。保護(hù)細(xì)胞膜：細(xì)胞質(zhì)：(核糖體、質(zhì)粒:小型環(huán)狀DNA分子)擬核：大型環(huán)狀DNA分子，控制細(xì)菌的主要遺傳形狀。特殊結(jié)構(gòu)莢膜：多糖。保護(hù)作用鞭毛：運(yùn)動芽孢：細(xì)菌休眠體，對惡劣的環(huán)境有抵抗力芽孢

有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個橢圓形的休眠體，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強(qiáng)的抵抗力。例如，有的細(xì)菌的芽孢，煮沸3小時以后才死亡。芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散。當(dāng)環(huán)境適宜（如溫度、水分適宜）的時候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個細(xì)菌.培養(yǎng)基：

培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工方法配制而成的，專供微生物生長繁殖使用的混合營養(yǎng)基質(zhì)。（二）培養(yǎng)微生物根據(jù)物理性質(zhì)分固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基1、培養(yǎng)基的種類液體培養(yǎng)基+瓊脂→（半固體培養(yǎng)基）↓固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基主要用于微生物的分離、計數(shù)等主要用于觀察微生物的運(yùn)動、鑒定菌種等主要用于工業(yè)生產(chǎn)需加入凝固劑，如瓊脂半固體培養(yǎng)基：無動力有動力(彌散)(是否運(yùn)動)

單個微生物在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，會形成一個肉眼可見的、具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌落。(一種微生物形成一種菌落。)微生物的菌落

每種細(xì)菌在一定條件下所形成的菌落，可以作為菌種鑒定的重要依據(jù)。特征：大小、形狀、光澤度、顏色、硬度、透明度等。功能：定義：有鞭毛細(xì)菌菌落無鞭毛細(xì)菌菌落無鞭毛的球菌，常形成較小較厚邊緣較整齊的菌落，有鞭毛細(xì)菌形成大而扁平、邊緣波浪或鋸齒狀菌落菌落細(xì)菌的菌落特征因種而異根據(jù)化學(xué)成分分合成培養(yǎng)基——成分明確,常用于分類,鑒定天然培養(yǎng)基——成分不明確,常用于工業(yè)生產(chǎn)（加牛肉膏、蛋白胨、酵母膏等）牛肉膏是用新鮮牛肉經(jīng)過剔除脂肪、消化、過濾、濃縮而得到的一種棕黃色至棕褐色的膏狀物。蛋白胨用新鮮牛骨及牛肉混合提取，經(jīng)過消化、過濾、濃縮、噴霧干燥而得到的一種淺黃色至類白色的干燥粉末。易溶于水，水溶液呈淡黃色。酵母膏采用新鮮酵母乳液自溶、酶解、分離、濃縮等現(xiàn)代生物高新技術(shù)精制而成的一種棕黃色可溶性膏狀純天然制品。。選擇培養(yǎng)基——在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì),以抑制不需要的微生物的生長,促進(jìn)所需要的微生物的生長。根據(jù)用途分鑒別培養(yǎng)基——在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品,用以鑒別不同種類的微生物。伊紅和美藍(lán),和大腸桿菌的代謝產(chǎn)物結(jié)合,使菌落呈深紫色選擇培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基分離金黃色葡萄球菌（耐鹽細(xì)菌）不加氮源的無氮培養(yǎng)基分離固氮菌不加含碳有機(jī)物的無碳培養(yǎng)基分離自養(yǎng)型微生物1、培養(yǎng)基的種類根據(jù)物理性質(zhì)分固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基根據(jù)化學(xué)成分分合成培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基根據(jù)用途分鑒別培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基營養(yǎng)物質(zhì)的種類

碳源、氮源、生長因子、水和無機(jī)鹽

2、微生物的營養(yǎng)概念來源作用碳源凡是能為微生物提供所需碳元素的營養(yǎng)物質(zhì)無機(jī)碳源

CO2NaHCO3等有機(jī)碳源糖類（主要）脂肪酸石油等①構(gòu)成細(xì)胞物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物②異養(yǎng)微生物的能源（1）微生物的碳源自養(yǎng)型和異養(yǎng)型微生物分別能利用哪類碳源物質(zhì)？思考概念來源作用氮源無機(jī)氮源

N2、NH4+、

NO3-、NH3等有機(jī)氮源尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等凡是能夠為微生物提供N元素的營養(yǎng)物質(zhì)主要用于合成蛋白質(zhì)、核酸及含N的代謝產(chǎn)物（2）微生物的氮源思考哪些微生物能夠利用氨氣？氮源能否為微生物提供能量？概念常見的生長因子為什么不可缺少？微生物生長不可缺少的微量有機(jī)物維生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等天然物質(zhì)包括：酵母膏，蛋白胨，動植物組織提取液缺乏合成這些物質(zhì)所需酶或合成能力有限（3）生長因子

請判斷下列說法的正確性同一種物質(zhì)不能既做碳源，又做氮源。碳源都能提供能量。NaHCO3只能提供碳源。無機(jī)氮源也能提供能量。微生物都需要生長因子。常見微生物主要的碳源、氮源、代謝類型微生物碳源氮源代謝類型藍(lán)藻CO2無機(jī)氮自養(yǎng)需氧型硝化細(xì)菌CO2NH3自養(yǎng)需氧型酵母菌葡萄糖有機(jī)氮、無機(jī)氮異養(yǎng)兼性厭氧型①、目的要明確根據(jù)所培養(yǎng)的微生物的種類、培養(yǎng)的目的配制②、營養(yǎng)要協(xié)調(diào)注意各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例。③、pH要適宜

細(xì)菌pH6.5~7.5

真菌pH5.0~6.03、培養(yǎng)基的配制原則（二）無菌技術(shù)

無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。無論是隨后將要學(xué)到的倒平板、平板劃線操作，還是平板稀釋涂布法，其操作中的每一步都需要做到“無菌”，即防止外來雜菌入侵。只有熟練、規(guī)范地進(jìn)行無菌操作，才可能成功地培養(yǎng)微生物。1）清潔和消毒2）滅菌3）酒精燈附近進(jìn)行4)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品接觸1.注意事項：（二）無菌技術(shù)2.消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別

消毒使用較溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。滅菌使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)所有的微生物，包括芽孢和孢子。1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min3、化學(xué)藥劑消毒法:用75%酒精進(jìn)行皮膚消毒;氯氣消毒水源4、紫外線30min消毒，照射前，可噴石炭酸或煤酚皂等消毒液加強(qiáng)消毒效果(1)消毒的方法：3.常用的消毒與滅菌的方法1、灼燒滅菌：接種環(huán)、接種針、試管口、瓶口2、干熱滅菌：玻璃器皿和金屬用具3、高壓蒸氣滅菌：100kPa、121℃下維持15-30min.(2)滅菌的方法：1.無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？

答：無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。旁欄思考2.請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。（1）培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2）玻棒、試管、燒瓶和吸管（3）實(shí)驗操作者的雙手答：（1）、（2）需要滅菌；（3）需要消毒。1.器具的滅菌2.培養(yǎng)基的配制3.培養(yǎng)基的滅菌4.倒平板5.微生物接種6.恒溫箱中培養(yǎng)7.菌種的保存二、實(shí)驗操作二、實(shí)驗操作(一)制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基(用于培養(yǎng)細(xì)菌)牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基配方牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g瓊脂20.0g將上述物質(zhì)溶解后，添加自來水，定容至1000mL1．計算2.稱量3．溶化（注意稱量紙）操作步驟4．滅菌:

將培養(yǎng)基用玻棒轉(zhuǎn)移至三角錐瓶中，加棉塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌鍋。將培養(yǎng)皿用舊報紙包裹，放入干熱滅菌箱內(nèi)，在160～170℃下滅菌2h。5．倒平板:

待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時，在酒精燈附近倒平板。1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？

可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進(jìn)行倒平板了。2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？在培養(yǎng)箱里，倒置平板可以減少培養(yǎng)基表面的空氣流動，是培養(yǎng)基水分蒸發(fā)減慢，減慢培養(yǎng)基出現(xiàn)干裂的時間?？諝庵械奈⑸锟赡茉诿笊w與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。1、平板劃線法:通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)畫線的操作,將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面.

在數(shù)次畫線后,可以分離到由一個細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體,這就是菌落.（二）純化大腸桿菌微生物接種的方法：平板劃線法和稀釋涂布平板法1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？

操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種。使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。3.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？

劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能