生物技術(shù)制藥第2版-第5章-疫苗和制備技術(shù)課件

第五章

疫苗及其制備技術(shù)第五章

疫苗及其制備技術(shù)疫苗（Vaccine）傳統(tǒng)概念：將病原微生物（細(xì)菌、病毒、真菌等）及其代謝產(chǎn)物，經(jīng)過(guò)人工減毒、滅活或利用基因工程等方法制成的用于預(yù)防傳染病的免疫制劑。世界衛(wèi)生組織的擴(kuò)大免疫措施（EPI）——兒童免疫程序表疫苗（Vaccine）傳統(tǒng)概念：將病原微生物（細(xì)菌、病毒、真、成人、成人現(xiàn)代疫苗：治療性疫苗、非感染性疾病疫苗疫苗學(xué)（Vaccinology）現(xiàn)代疫苗：治療性疫苗、非感染性疾病疫苗本章學(xué)習(xí)要求掌握：疫苗、基因工程疫苗、聯(lián)合疫苗的概念及常見(jiàn)疫苗的制備技術(shù)熟悉：疫苗的原理、類(lèi)型、特點(diǎn)及主要用途了解：疫苗發(fā)展的歷程與趨勢(shì)、疫苗產(chǎn)業(yè)的特點(diǎn)與應(yīng)用本章學(xué)習(xí)要求掌握：疫苗、基因工程疫苗、聯(lián)合疫苗的概念及常見(jiàn)疫本章內(nèi)容概述疫苗的組成、作用原理、類(lèi)型與特點(diǎn)疫苗的制備方法疫苗生產(chǎn)的質(zhì)量控制疫苗產(chǎn)業(yè)的特點(diǎn)及應(yīng)用概況本章內(nèi)容概述第一節(jié)概述一、疫苗的產(chǎn)生“12世紀(jì)，中國(guó)開(kāi)始用人痘接種預(yù)防天花”《疫苗可預(yù)防疾病的流行病學(xué)與預(yù)防學(xué)》

第6版，美國(guó)疾病控制與預(yù)防中心（CDC）2000年出版

第一節(jié)概述一、疫苗的產(chǎn)生一、疫苗的產(chǎn)生天花（Smallpox）由天花病毒引起的一種烈性傳染病天花病毒：呈磚形，能對(duì)抗干燥和低溫，在痂皮、塵土和被服上可生存數(shù)月至一年半之久臨床表現(xiàn)：主要為嚴(yán)重毒血癥狀、皮膚成批依次出現(xiàn)斑疹、丘疹、皰疹、膿皰，最后結(jié)痂、脫痂，遺留痘疤。傳播途徑：飛沫吸入或直接接觸。特點(diǎn)：發(fā)展迅速，未免疫人群感染后15-20天內(nèi)致死率高達(dá)30％。一、疫苗的產(chǎn)生天花（Smallpox）一、疫苗的產(chǎn)生天花的防治——中國(guó)宋真宗時(shí)期（998-1023年）：人痘法，吸入天花病人痂粉預(yù)防天花。明朝隆慶年間（1567-1572年）：痘衣法、痘漿法、旱痘法和水苗法等多種接種方法出現(xiàn)。清朝順治死于天花，得過(guò)天花的康熙繼位人痘法的缺點(diǎn)：有時(shí)也會(huì)引起嚴(yán)重的天花一、疫苗的產(chǎn)生天花的防治——中國(guó)一、疫苗的產(chǎn)生天花的防治——?dú)W洲1721年，人痘接種法傳入英國(guó)1796年，英國(guó)醫(yī)生E.Jenner利用牛痘防治天花1798年，醫(yī)學(xué)界正式承認(rèn)“疫苗接種確實(shí)是一種行之有效的免疫方法”。細(xì)胞培養(yǎng)法獲得天花病毒——牛痘苗一、疫苗的產(chǎn)生天花的防治——?dú)W洲生物技術(shù)制藥第2版_第5章_疫苗和制備技術(shù)課件一、疫苗的產(chǎn)生疫苗之父法國(guó)免疫學(xué)家LouisPasteur雞霍亂弧菌減毒株（第一個(gè)細(xì)菌減毒活疫苗）一、疫苗的產(chǎn)生疫苗之父法國(guó)免疫學(xué)家LouisPas一、疫苗的產(chǎn)生巴斯德與狂犬病疫苗異體傳代法：將狂犬病毒在兔體內(nèi)經(jīng)連續(xù)傳代，獲得了減毒株一、疫苗的產(chǎn)生巴斯德與狂犬病疫苗一、疫苗的產(chǎn)生巴斯德在疫苗領(lǐng)域的卓越貢獻(xiàn)細(xì)菌的分離培養(yǎng)技術(shù)減毒菌株的獲得連續(xù)傳代培養(yǎng)法高溫培養(yǎng)法異體傳代法巴氏減毒菌苗的發(fā)明：為實(shí)驗(yàn)免疫學(xué)建立了基礎(chǔ)一、疫苗的產(chǎn)生巴斯德在疫苗領(lǐng)域的卓越貢獻(xiàn)二、疫苗及其技術(shù)的發(fā)展簡(jiǎn)史（一）減毒活疫苗技術(shù)——第一次疫苗革命（二）基因重組疫苗技術(shù)——第二次疫苗革命（三）反向疫苗學(xué)技術(shù)——第三次疫苗革命二、疫苗及其技術(shù)的發(fā)展簡(jiǎn)史（一）減毒活疫苗技術(shù)——第一次疫苗二、疫苗及其技術(shù)的發(fā)展簡(jiǎn)史（一）減毒活疫苗技術(shù)——細(xì)胞水平人為處理使病原微生物失去毒力或降低毒力例：卡介苗（BacillusCalmette-Guérin,BCG，使用活的無(wú)毒牛型結(jié)核桿菌制成）、炭疽疫苗、狂犬疫苗二、疫苗及其技術(shù)的發(fā)展簡(jiǎn)史（一）減毒活疫苗技術(shù)——細(xì)胞水平二、疫苗及其技術(shù)的發(fā)展簡(jiǎn)史藥物毒理：結(jié)核菌是細(xì)胞內(nèi)寄生菌——細(xì)胞免疫用無(wú)毒卡介菌（結(jié)核菌）人工接種進(jìn)行初次感染，經(jīng)過(guò)巨噬細(xì)胞的加工處理，將其抗原信息傳遞給免疫活性細(xì)胞，使T細(xì)胞分化增殖，形成致敏淋巴細(xì)胞，當(dāng)機(jī)體再遇到結(jié)核菌感染時(shí)，巨噬細(xì)胞和致敏淋巴細(xì)胞迅速被激活，執(zhí)行免疫功能，引起特異性免疫反應(yīng)。二、疫苗及其技術(shù)的發(fā)展簡(jiǎn)史藥物毒理：二、疫苗及其技術(shù)的發(fā)展簡(jiǎn)史（二）基因重組疫苗技術(shù)——分子水平基因重組技術(shù)研究相關(guān)基因和蛋白質(zhì)產(chǎn)物例：乙肝疫苗（乙型肝炎表面抗原）二、疫苗及其技術(shù)的發(fā)展簡(jiǎn)史（二）基因重組疫苗技術(shù)——分子水平二、疫苗及其技術(shù)的發(fā)展簡(jiǎn)史血源乙肝疫苗：無(wú)癥狀HBsAg攜帶者血漿提取的HBsAg，經(jīng)純化，滅活及添加佐劑制成。基因重組（轉(zhuǎn)基因）乙肝疫苗：利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)，構(gòu)建含有乙肝病毒HBsAg基因的重組質(zhì)粒，轉(zhuǎn)入酵母（或重組CHO細(xì)胞）表達(dá)乙型肝炎表面抗原，在繁殖過(guò)程中產(chǎn)生未糖基化的HBsAg多肽，經(jīng)破碎酵母菌體，顆粒形未糖基化的HBsAg多肽釋放，經(jīng)純化，滅活，添加佐劑制成。

二、疫苗及其技術(shù)的發(fā)展簡(jiǎn)史血源乙肝疫苗：無(wú)癥狀HBsAg攜帶二、疫苗及其技術(shù)的發(fā)展簡(jiǎn)史基因工程技術(shù)在疫苗領(lǐng)域應(yīng)用構(gòu)建無(wú)毒或減毒疫苗：毒素基因突變構(gòu)建載體活疫苗：目的基因克隆至臨床常規(guī)使用的活疫苗中二、疫苗及其技術(shù)的發(fā)展簡(jiǎn)史基因工程技術(shù)在疫苗領(lǐng)域應(yīng)用二、疫苗及其技術(shù)的發(fā)展簡(jiǎn)史（三）反向疫苗學(xué)技術(shù)——蛋白質(zhì)水平全基因水平篩選具有保護(hù)性免疫反應(yīng)的候選抗原具體步驟：1.基因組信息分析結(jié)合基因芯片篩選候選疫苗成分2.高通量基因重組表達(dá)候選疫苗蛋白成分3.免疫保護(hù)性測(cè)試二、疫苗及其技術(shù)的發(fā)展簡(jiǎn)史（三）反向疫苗學(xué)技術(shù)——蛋白質(zhì)水平二、疫苗及其技術(shù)的發(fā)展簡(jiǎn)史例：B型腦膜炎球菌（meningococcusB）

先用計(jì)算機(jī)分析B型腦膜炎球菌的基因組，找到600個(gè)潛在的疫苗候補(bǔ)，將其中350個(gè)在大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá)，然后將蛋白提純用于免疫小鼠，其中找到29個(gè)蛋白能誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生抗體，從而達(dá)到預(yù)防免疫的作用。二、疫苗及其技術(shù)的發(fā)展簡(jiǎn)史例：B型腦膜炎球菌（meningo第二節(jié)

疫苗的組成、作用原理、類(lèi)型與特點(diǎn)一、疫苗組成抗原佐劑防腐劑穩(wěn)定劑滅活劑緩沖液、鹽類(lèi)等非活性成分第二節(jié)

疫苗的組成、作用原理、類(lèi)型與特點(diǎn)一、疫苗組成一、疫苗組成1.抗原（antigen，Ag）疫苗最主要的有效活性成分免疫原性（immunogenicity）：刺激機(jī)體特異性免疫細(xì)胞活化、增殖、分化并產(chǎn)生免疫效應(yīng)物。免疫反應(yīng)性（immunoreactivity）：與免疫效應(yīng)物發(fā)生特異性結(jié)合而產(chǎn)生免疫反應(yīng)。一、疫苗組成1.抗原（antigen，Ag）一、疫苗組成常用抗原包括：

滅活病毒或細(xì)菌活病毒或細(xì)菌（減毒株）病毒或菌體提純物有效蛋白成分類(lèi)毒素細(xì)菌多糖合成多肽

核酸一、疫苗組成常用抗原包括：2.佐劑（adjuvant）非特異性增強(qiáng)抗原免疫應(yīng)答或改變免疫應(yīng)答類(lèi)型的物質(zhì)。要求：安全無(wú)毒、在非冷藏條件下穩(wěn)定作用機(jī)制：

改變抗原的物理形狀，延長(zhǎng)抗原在機(jī)體內(nèi)保留時(shí)間刺激單核巨噬細(xì)胞對(duì)抗原的遞呈能力

刺激淋巴細(xì)胞分化，增加擴(kuò)大免疫應(yīng)答能力一、疫苗組成2.佐劑（adjuvant）一、疫苗組成一、疫苗組成常用佐劑：用于人體：鋁佐劑/MF59（水包油的乳劑）動(dòng)物試驗(yàn)：弗氏完全佐劑（FCA）/弗氏不完全佐劑（FIA）一、疫苗組成常用佐劑：3.防腐劑大多數(shù)的滅活疫苗都使用防腐劑目的：防止外來(lái)微生物的污染常用：0.01％～0.02％硫柳汞2-苯氧乙醇氯仿副作用：接觸性皮炎、變應(yīng)性結(jié)膜炎、耳毒性一、疫苗組成3.防腐劑一、疫苗組成4.穩(wěn)定劑目的：保證作為抗原的病毒或其他微生物存活，并保持免疫原性凍干疫苗中常用：乳糖、明膠、山梨醇等。

一、疫苗組成4.穩(wěn)定劑一、疫苗組成5.滅活劑滅活病毒或細(xì)菌抗原的方法：

物理方法（如加熱、紫外線照射等）

化學(xué)方法（丙酮、酚、甲醛等）對(duì)人體有一定毒害作用，因此在滅活抗原后必須及時(shí)從疫苗中除去，并經(jīng)嚴(yán)格檢定以保證疫苗的安全性。一、疫苗組成5.滅活劑一、疫苗組成6.緩沖液、鹽類(lèi)緩沖液的種類(lèi)、鹽類(lèi)的含量都可影響疫苗的效力、純度和安全性，因此都有嚴(yán)格的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)一、疫苗組成6.緩沖液、鹽類(lèi)一、疫苗組成二、疫苗作用原理當(dāng)機(jī)體經(jīng)過(guò)口服或注射等途徑接種疫苗后，其中的抗原分子刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生高效價(jià)特異性的免疫保護(hù)物質(zhì)當(dāng)機(jī)體再次接觸到相同病原菌抗原時(shí)，免疫系統(tǒng)依循免疫記憶，迅速制造出保護(hù)物質(zhì)來(lái)阻斷病原菌的入侵，從而使機(jī)體獲得針對(duì)病原體特異性的免疫力，使其免受侵害而獲得保護(hù)。二、疫苗作用原理當(dāng)機(jī)體經(jīng)過(guò)口服或注射等途徑接種疫苗后，其中的三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)（一）減毒活疫苗（二）滅活疫苗（三）亞單位疫苗（四）聯(lián)合疫苗（五）核酸疫苗（六）治療性疫苗三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)（一）減毒活疫苗三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)（一）減毒活疫苗（liveattenuatedvaccine）通過(guò)一定方法使病原體的致病性減弱或喪失后獲得的由完整微生物組成的疫苗制品特點(diǎn)：能引發(fā)機(jī)體感染但不發(fā)生臨床癥狀，但其免疫原性可引發(fā)機(jī)體免疫反應(yīng)，刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性的記憶B細(xì)胞和記憶T細(xì)胞，起到獲得長(zhǎng)期或終生保護(hù)的作用。

三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)（一）減毒活疫苗（liveattenu三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：接種次數(shù)少，反應(yīng)小，免疫效果好（體液免疫、細(xì)胞免疫、黏膜免疫），成本低缺點(diǎn)：穩(wěn)定性差，有毒力返祖現(xiàn)象，污染環(huán)境，免疫缺陷者不能接種三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)（二）滅活疫苗（inactivatedvaccine）將病原體經(jīng)培養(yǎng)增殖、滅活、純化處理后獲得的保留病原體幾乎全部組分的疫苗制品。特點(diǎn)：失去了病原體的感染性，但保留了較強(qiáng)的免疫原性和較好的安全性三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)（二）滅活疫苗（inactivated三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：穩(wěn)定性好，反應(yīng)小，免疫缺陷者也可接種缺點(diǎn)：需多次接種，免疫效果較差（體液免疫），需要量大三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)（三）亞單位疫苗（subunitvaccine）

利用微生物的某種表面結(jié)構(gòu)成分制成的能誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生抗體的疫苗制品。分類(lèi)：純化亞單位疫苗：?jiǎn)蝹€(gè)蛋白或寡糖組成、佐劑合成肽亞單位疫苗：抗病毒/腫瘤/細(xì)菌、寄生蟲(chóng)感染基因工程亞單位疫苗三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)（三）亞單位疫苗（subunitvac三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)基因工程亞單位疫苗（geneticengineeringsubunitvaccine）在分離出病原體特異抗原編碼基因的基礎(chǔ)上，將外源基因轉(zhuǎn)入非致病性微生物內(nèi)表達(dá)產(chǎn)物，然后通過(guò)分離純化獲得的特異蛋白質(zhì)。原核細(xì)胞（大腸桿菌）、真核細(xì)胞（酵母）活載體疫苗（細(xì)菌、病毒）、轉(zhuǎn)基因植物疫苗三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)基因工程亞單位疫苗（geneticen三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)（四）聯(lián)合疫苗（combinedvaccine）兩種或兩種以上抗原物理混合后制成的疫苗制劑。多聯(lián)疫苗（multi-combinedvaccine）：預(yù)防不同病原微生物引起的傳染?。ɡ喊侔灼疲┒鄡r(jià)疫苗（multivalentvaccine）：預(yù)防由同一病原微生物不同亞型引起的傳染?。ɡ?3價(jià)肺炎多糖疫苗）三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)（四）聯(lián)合疫苗（combinedvac三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)（五）核酸疫苗（nucleicacidvaccine）也稱基因疫苗（geneticvaccine），包括DNA疫苗和RNA疫苗。由抗原的編碼基因和載體組成，導(dǎo)入機(jī)體細(xì)胞后可通過(guò)宿主細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)表達(dá)蛋白抗原，誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生細(xì)胞和體液免疫應(yīng)答的疫苗制劑。三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)（五）核酸疫苗（nucleicacid三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)DNA疫苗（DNAvaccine）將編碼外源性抗原的基因插入到含真核表達(dá)系統(tǒng)的質(zhì)粒上，導(dǎo)入宿主細(xì)胞內(nèi)表達(dá)抗原蛋白，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答。特點(diǎn)：免疫效果好，制備方便，可重復(fù)使用，可用于免疫治療和聯(lián)合免疫三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)DNA疫苗（DNAvaccine）三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)（六）治療性疫苗（therapeuticvaccine）在已感染病原微生物或已患有某些疾病的機(jī)體中，通過(guò)誘導(dǎo)特異性的免疫應(yīng)答，達(dá)到治療或防止疾病惡化的疫苗制品。最早的治療性疫苗：狂犬病疫苗三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)（六）治療性疫苗（therapeutic三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)1.基于組成成分及性質(zhì)的分類(lèi)（1）蛋白質(zhì)復(fù)合重構(gòu)的治療性疫苗改造靶抗原的結(jié)構(gòu)或組合，使其相似而又有異于傳統(tǒng)疫苗的靶抗原，重新喚起患者的功能性免疫應(yīng)答，進(jìn)而打破和逆轉(zhuǎn)患者的免疫耐受狀態(tài)。改造方法：蛋白修飾，結(jié)構(gòu)/構(gòu)型改造，蛋白復(fù)合/多肽偶聯(lián)三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)1.基于組成成分及性質(zhì)的分類(lèi)三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)（2）基因疫苗DNA疫苗：埃博拉（Ebola）疫苗、乙型肝炎（HBV）疫苗、丙型肝炎（HCV）疫苗、人免疫缺陷病毒（HIV）疫苗等RNA疫苗：RNA修飾的樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）疫苗等三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)（2）基因疫苗三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)（3）多水平基因修飾細(xì)胞疫苗腫瘤治療性疫苗：腫瘤細(xì)胞/DC細(xì)胞疫苗制備過(guò)程：三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)（3）多水平基因修飾細(xì)胞疫苗三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)2.基于治療疾病種類(lèi)的分類(lèi)（1）感染性疾病的治療性疫苗（2）腫瘤治療性疫苗（3）自身免疫性疾病的治療性疫苗（4）移植用治療性疫苗三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)2.基于治療疾病種類(lèi)的分類(lèi)三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)預(yù)防性疫苗治療性疫苗病原體蛋白不需改造需經(jīng)分子設(shè)計(jì)和重新構(gòu)建受用者健康人體患者監(jiān)測(cè)手段保護(hù)性抗體產(chǎn)生情況疾病改善情況激發(fā)免疫應(yīng)答類(lèi)型體液免疫為主細(xì)胞免疫為主三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)預(yù)防性疫苗治療性疫苗病原體蛋白不需改造需第三節(jié)疫苗的制備方法滅活全毒疫苗——流感全病毒滅活疫苗減毒活疫苗——皮內(nèi)注射用卡介苗基因工程重組亞單位疫苗——重組乙型肝炎疫苗生化提取亞單位組分疫苗——吸附破傷風(fēng)疫苗治療性疫苗——前列腺癌疫苗Sipuleucel-T第三節(jié)疫苗的制備方法滅活全毒疫苗——流感全病毒滅活疫苗疫苗生產(chǎn)的一般流程疫苗生產(chǎn)的一般流程一、滅活全毒疫苗——流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluenzawholevirionvaccine）本品系用世界衛(wèi)生組織（WHO）推薦的并經(jīng)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的流感病毒株，分別接種雞胚，經(jīng)培養(yǎng)、收獲病毒液，病毒滅活、濃縮和純化后制成。用于預(yù)防本株病毒引起的流行性感冒一、滅活全毒疫苗——流感全病毒滅活疫苗（inactiated一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluenzawholevirionvaccine）The

influenzavaccineisanannualvaccinationusingavaccinethatisspecificforagivenyeartoprotectagainstthehighlyvariable

influenzavirus.

Eachseasonalinfluenzavaccinecontainsantigensrepresentingthree(trivalentvaccine)orfour(quadrivalentvaccine)influenza

virusstrains:twoinfluenzatypeAvirusstrains,andeitheroneortwoinfluenzatypeBvirusstrains.

一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluen流感病毒甲型流感病毒（InfluenzaAvirus）最容易發(fā)生變異（抗原轉(zhuǎn)變、抗原漂移）世界性流感大流行：甲型流感病毒出現(xiàn)新亞型或舊亞型重現(xiàn)引起甲型流感病毒根據(jù)H(hemagglutinin，血凝素)和N(neuraminidase，神經(jīng)氨酸酶)抗原不同分為許多亞型，H有17個(gè)亞型（H1～H17），N有10個(gè)亞型（N1～N10）。H1、H5、H7亞型為高致病性流感病毒甲型流感病毒（InfluenzaAvirus）流感病毒乙型流感病毒（InfluenzaBvirus）抗原變異很慢局限性流行，對(duì)人類(lèi)致病性較低丙型流感病毒（InfluenzaCvirus）抗原穩(wěn)定致病力較弱，主要侵犯幼兒和免疫力低下的人群，只引起人類(lèi)不明顯的或輕微的上呼吸道感染流感病毒乙型流感病毒（InfluenzaBvirus）一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluenzawholevirionvaccine）Influenzavaccinesmaybe

administered

asaninjection

orasanasalspray.TheU.S.

CentersforDiseaseControlandPreventionrecommendthateveryoneovertheagesof6monthsshouldreceivetheseasonalinfluenzavaccine.

Vaccinationcampaigns

usuallyfocusonpeoplewhoareathighriskof

seriouscomplications

iftheycatchtheflu,suchastheelderlyandpeoplelivingwithchronicillness

orthosewith

weakenedimmunesystems,aswellashealthcareworkers.一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluen一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluenzawholevirionvaccine）（一）制備方法1.生產(chǎn)用原材料雞胚是分離各類(lèi)病毒的較為理想的材料尿囊腔一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluen一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluenzawholevirionvaccine）（1）雞胚毒種傳代和制備：來(lái)源于SPF（SpecificpathogenFree）雞群疫苗生產(chǎn)：來(lái)源于封閉式房舍內(nèi)飼養(yǎng)的健康雞群、9-11日齡無(wú)畸形、血管清晰、活動(dòng)（2）毒種WHO推薦并提供的甲型和乙型流感病毒株一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluen一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluenzawholevirionvaccine）2.毒種種子批的建立及檢定符合“生物制品生產(chǎn)檢定用菌毒種管理規(guī)程”規(guī)定一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluen一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluenzawholevirionvaccine）2.毒種種子批的建立及檢定建立：以毒種為基礎(chǔ)傳代（5代以內(nèi)得成品疫苗）血凝素型別鑒定試驗(yàn)血凝抑制試驗(yàn)

單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)病毒滴度：雞胚半數(shù)感染劑量法血凝滴度：血凝法無(wú)菌檢查、支原體檢查外源性禽白血病病毒、禽腺病毒檢測(cè)：ELISA保存：凍干毒種-20℃以下，液體毒種-60℃以下檢定一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluen一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluenzawholevirionvaccine）3.單價(jià)原液的制備各流感病毒工作種子批分別接種（尿囊腔），33-35℃培養(yǎng)48-72h病毒收獲（尿囊液）收獲液檢定

微生物限度：菌數(shù)<105CFU/ml，沙門(mén)氏菌為陰性血凝滴度收獲液合并一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluen一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluenzawholevirionvaccine）3.單價(jià)原液的制備病毒滅活（甲醛≤200μg/ml）、驗(yàn)證及內(nèi)毒素含量測(cè)定濃縮（超濾）、純化（柱色譜法、蔗糖密度區(qū)帶離心）及過(guò)濾除菌（硫柳汞）單價(jià)原液保存（2-8℃）一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluen一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluenzawholevirionvaccine）4.半成品的制備對(duì)單價(jià)原液根據(jù)相同血凝素含量進(jìn)行配制：15-18μg/劑補(bǔ)加硫柳汞5.成品的制備半成品分批、分裝及凍干后包裝：0.5-1.0ml/劑，含各型流感病毒株血凝素為15μg/劑一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluen一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluenzawholevirionvaccine）（二）檢定要求1.單價(jià)原液的檢定鑒別試驗(yàn)：血凝抑制試驗(yàn)、單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)病毒滅活驗(yàn)證試驗(yàn)：雞胚存活率、血凝試驗(yàn)血凝素含量檢測(cè)：?jiǎn)蜗蛎庖邤U(kuò)散試驗(yàn)一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluen一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluenzawholevirionvaccine）2.半成品的檢定游離甲醛含量≤50μg/劑硫柳汞含量≤50μg/劑血凝素含量：配制量的80%-120%無(wú)菌檢查一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluen一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluenzawholevirionvaccine）3.成品的檢定鑒別：?jiǎn)蜗蛎庖邤U(kuò)散試驗(yàn)外觀：乳白色液體，無(wú)異物pH值：6.8-8.0硫柳汞含量≤50μg/劑蛋白質(zhì)含量≤200μg/劑血凝素含量：配制量的80%-120%卵清蛋白含量≤250ng/劑抗生素殘留量≤50ng/劑一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluen一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluenzawholevirionvaccine）一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluen二、減毒活疫苗——皮內(nèi)注射用卡介苗（BCGvaccineforintradermalinjection）本品系用卡介菌經(jīng)培養(yǎng)后，收集菌體，加入穩(wěn)定劑凍干制成二、減毒活疫苗——皮內(nèi)注射用卡介苗（BCGvaccine二、皮內(nèi)注射用卡介苗（BCGvaccineforintradermalinjection）（一）基本要求生產(chǎn)車(chē)間、設(shè)備及器具專用制造、包裝過(guò)程避光工作人員：身體健康、無(wú)結(jié)核病二、皮內(nèi)注射用卡介苗（BCGvaccineforint二、皮內(nèi)注射用卡介苗（BCGvaccineforintradermalinjection）（二）制備方法1.生產(chǎn)用菌種：符合“生物制品生產(chǎn)檢定用菌毒種管理規(guī)程”規(guī)定卡介菌D2PB302菌株二、皮內(nèi)注射用卡介苗（BCGvaccineforint二、皮內(nèi)注射用卡介苗（BCGvaccineforintradermalinjection）2.種子批的建立及檢定(<12代)培養(yǎng)特性：菌落特征（多皺、微黃菌膜）毒力試驗(yàn)（豚鼠腹腔注射）：體重不減輕，解剖觀察無(wú)有毒分枝桿菌試驗(yàn)（豚鼠皮下注射）：體重不減輕，解剖觀察免疫力試驗(yàn)（豚鼠皮下注射）：解剖分析保存：凍干，8℃以下二、皮內(nèi)注射用卡介苗（BCGvaccineforint二、皮內(nèi)注射用卡介苗（BCGvaccineforintradermalinjection）3.原液的制備生產(chǎn)用種子：工作種子批生產(chǎn)用培養(yǎng)基：液體蘇通培養(yǎng)基等接種與培養(yǎng)：37-39℃靜止培養(yǎng)收獲和合并：收集菌膜，壓干，研磨，加入穩(wěn)定劑稀釋二、皮內(nèi)注射用卡介苗（BCGvaccineforint二、皮內(nèi)注射用卡介苗（BCGvaccineforintradermalinjection）4.半成品的制備穩(wěn)定劑稀釋：0.5-1.0mg/ml5.成品的制備分裝、凍干、封口保存二、皮內(nèi)注射用卡介苗（BCGvaccineforint二、皮內(nèi)注射用卡介苗（BCGvaccineforintradermalinjection）（三）檢定要求1.原液檢定純菌檢查：涂片鏡檢濃度測(cè)定：參照標(biāo)準(zhǔn)品，分光光度法檢測(cè)2.半成品的檢定沉降率測(cè)定：靜置，分光光度法檢測(cè)活菌數(shù)測(cè)定≥1.0×107CFU/mg活力測(cè)定：XTT法二、皮內(nèi)注射用卡介苗（BCGvaccineforint二、皮內(nèi)注射用卡介苗（BCGvaccineforintradermalinjection）3.成品的檢定鑒別試驗(yàn)：抗酸染色涂片外觀：白色疏松體或粉末狀，加水成均勻懸液水分≤3.0%效力測(cè)定（豚鼠皮下注射）：局部硬結(jié)反應(yīng)活菌數(shù)測(cè)定≥1.0×106CFU/mg無(wú)有毒分支桿菌試驗(yàn)（豚鼠皮下注射）：體重不減輕，解剖觀察熱穩(wěn)定性試驗(yàn)：37℃放置28天，計(jì)算活菌率二、皮內(nèi)注射用卡介苗（BCGvaccineforint三、基因工程亞單位疫苗——重組乙型肝炎疫苗（recombinantHepatitisBvaccine）由重組酵母細(xì)胞表達(dá)的乙型肝炎表面抗原，經(jīng)純化、滅活及加入佐劑吸附制成。三、基因工程亞單位疫苗——重組乙型肝炎疫苗（recombin三、重組乙型肝炎疫苗（recombinantHepatitisBvaccine）（一）制備方法1.生產(chǎn)用菌種：基因重組構(gòu)建的表達(dá)HBsAg的重組釀酒酵母原始菌種三、重組乙型肝炎疫苗（recombinantHepatit三、重組乙型肝炎疫苗（recombinantHepatitisBvaccine）2.種子批的建立及檢定符合“生物制品生產(chǎn)檢定用菌毒種管理規(guī)程”規(guī)定建立：原始菌種傳代培養(yǎng)物純度：無(wú)細(xì)菌和其他真菌檢出HBsAg基因序列測(cè)定檢定質(zhì)粒保有率：平板復(fù)制法活菌率：血細(xì)胞計(jì)數(shù)板抗原表達(dá)率：蛋白質(zhì)含量、HBsAg含量保存：工作種子批-70℃保存，其余液氮保存三、重組乙型肝炎疫苗（recombinantHepatit三、重組乙型肝炎疫苗（recombinantHepatitisBvaccine）3.原液的制備發(fā)酵：錐形瓶、種子罐、生產(chǎn)罐三級(jí)發(fā)酵純化：細(xì)胞破碎（TritonX-100）、硅膠吸附、疏水色譜純化、硫氰酸鹽處理、稀釋、過(guò)濾除菌保存：2-8℃，不超過(guò)3個(gè)月三、重組乙型肝炎疫苗（recombinantHepatit三、重組乙型肝炎疫苗（recombinantHepatitisBvaccine）4.半成品的制備甲醛處理：100μg/ml鋁吸附配制：與鋁佐劑等量混合5.成品的制備分批、分裝及凍干后包裝三、重組乙型肝炎疫苗（recombinantHepatit三、重組乙型肝炎疫苗（recombinantHepatitisBvaccine）（二）檢定要求1.原液檢定特異蛋白帶：SDS，20-25kD蛋白帶N-端氨基酸序列測(cè)定：氨基酸序列分析儀純度：免疫印跡法、高效液相色譜法2.半成品的檢定吸附完全性≥95%硫氰酸鹽含量＜1.0μg/mlTritonX-100含量＜15.0μg/ml三、重組乙型肝炎疫苗（recombinantHepatit三、重組乙型肝炎疫苗（recombinantHepatitisBvaccine）3.成品的檢定鑒別試驗(yàn)：ELISA外觀：乳白色混懸液pH值：5.5-7.2鋁含量:0.35-0.62mg/ml三、重組乙型肝炎疫苗（recombinantHepatit四、生化提取亞單位組分疫苗——吸附破傷風(fēng)疫苗（adsorbedtetanusvaccine）本品系采用破傷風(fēng)梭狀芽孢桿菌，在適宜的培養(yǎng)基中培養(yǎng)后提取破傷風(fēng)毒素蛋白經(jīng)甲醛脫毒、精制，加入氫氧化鋁佐劑制成。四、生化提取亞單位組分疫苗——吸附破傷風(fēng)疫苗（adsorbe四、吸附破傷風(fēng)疫苗（adsorbedtetanusvaccine）（一）制備方法1.生產(chǎn)用菌種：產(chǎn)毒效價(jià)高、免疫力強(qiáng)的破傷風(fēng)梭狀芽孢桿菌四、吸附破傷風(fēng)疫苗（adsorbedtetanusvac四、吸附破傷風(fēng)疫苗（adsorbedtetanusvaccine）2.種子批的建立及檢定符合“生物制品生產(chǎn)檢定用菌毒種管理規(guī)程”規(guī)定建立：原始菌種傳代培養(yǎng)特性：專性厭氧菌、培養(yǎng)觀察染色鏡檢：革蘭氏染色檢定生化反應(yīng)：不發(fā)酵糖類(lèi)、不還原硝酸鹽等產(chǎn)毒試驗(yàn)(小鼠皮下注射)：觀察癥狀特異性中和試驗(yàn)(小鼠皮下注射)：觀察癥狀保存：2-8℃四、吸附破傷風(fēng)疫苗（adsorbedtetanusvac四、吸附破傷風(fēng)疫苗（adsorbedtetanusvaccine）3.類(lèi)毒素原液的制備毒素的獲得：微生物培養(yǎng)，離心上清，除菌過(guò)濾脫毒（甲醛）及檢定（豚鼠皮下注射）：體重、癥狀精制：等電點(diǎn)沉淀、鹽析、超濾等，加硫柳汞保存：2-8℃四、吸附破傷風(fēng)疫苗（adsorbedtetanusvac四、吸附破傷風(fēng)疫苗（adsorbedtetanusvaccine）4.半成品的制備佐劑配制：氫氧化鋁吸附類(lèi)毒素的配制：7-10Lf/ml5.成品的制備分批、分裝、凍干后包裝四、吸附破傷風(fēng)疫苗（adsorbedtetanusvac四、吸附破傷風(fēng)疫苗（adsorbedtetanusvaccine）（二）檢定要求1.類(lèi)毒素原液檢定pH值：6.6-7.4純度：1500Lf/mg蛋白氮特異性毒性檢查（豚鼠皮下注射）：體重、癥狀毒性逆轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)（豚鼠皮下注射）：體重、癥狀2.半成品的檢定無(wú)菌檢查四、吸附破傷風(fēng)疫苗（adsorbedtetanusvac四、吸附破傷風(fēng)疫苗（adsorbedtetanusvaccine）3.成品的檢定鑒別試驗(yàn)：動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、絮狀試驗(yàn)、凝膠免疫沉淀外觀：乳白色懸液化學(xué)檢定：pH、氫氧化鋁、硫柳汞、甲醛等含量效價(jià)測(cè)定≥40IU/劑特異性毒性檢查（豚鼠皮下注射）：體重、癥狀四、吸附破傷風(fēng)疫苗（adsorbedtetanusvac五、治療性疫苗——前列腺癌疫苗Sipuleucel-TDENDREON公司的自體細(xì)胞免疫療法2010年批準(zhǔn)上市，首個(gè)被FDA批準(zhǔn)的治療性癌癥疫苗五、治療性疫苗——前列腺癌疫苗Sipuleucel-TDEN五、治療性疫苗——前列腺癌疫苗Sipuleucel-T基本步驟:采集患者的外周血單個(gè)核細(xì)胞，培養(yǎng)生成抗原提呈細(xì)胞（樹(shù)枝狀細(xì)胞)樹(shù)枝狀細(xì)胞在培養(yǎng)條件下用基因工程制備的融合蛋白（PA2024）孵育,這種融合蛋白由兩部分組成:抗原-前列腺酸性磷酸酶（PAP），PAP能在95%的前列腺癌細(xì)胞中表達(dá);粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子（GM-CSF),一種能幫助樹(shù)枝狀細(xì)胞成熟和激活的免疫信號(hào)因子收集經(jīng)融合蛋白孵育刺激的樹(shù)枝狀細(xì)胞等免疫活性細(xì)胞重新注入患者體內(nèi),激發(fā)體內(nèi)產(chǎn)生針對(duì)攜帶PAP抗原的前列腺癌細(xì)胞的抗腫瘤免疫反應(yīng)五、治療性疫苗——前列腺癌疫苗Sipuleucel-T基本步第四節(jié)疫苗生產(chǎn)的質(zhì)量控制第四節(jié)疫苗生產(chǎn)的質(zhì)量控制生物技術(shù)制藥第2版_第5章_疫苗和制備技術(shù)課件生物技術(shù)制藥第2版_第5章_疫苗和制備技術(shù)課件生物技術(shù)制藥第2版_第5章_疫苗和制備技術(shù)課件生物技術(shù)制藥第2版_第5章_疫苗和制備技術(shù)課件生物技術(shù)制藥第2版_第5章_疫苗和制備技術(shù)課件一、原材料的質(zhì)量控制（一）生產(chǎn)用水（二）器材、溶液等原材料（三）動(dòng)物源的原材料：SPF級(jí)（四）菌種和毒種（五）細(xì)胞一、原材料的質(zhì)量控制（一）生產(chǎn)用水（四）菌種和毒種（四）菌種和毒種生物技術(shù)制藥第2版_第5章_疫苗和制備技術(shù)課件二、生產(chǎn)過(guò)程質(zhì)量控制《中國(guó)生物制品規(guī)程》GMP人員素質(zhì)、衛(wèi)生及無(wú)菌的要求二、生產(chǎn)過(guò)程質(zhì)量控制《中國(guó)生物制品規(guī)程》生物技術(shù)制藥第2版_第5章_疫苗和制備技術(shù)課件生物技術(shù)制藥第2版_第5章_疫苗和制備技術(shù)課件三、疫苗產(chǎn)品的質(zhì)量控制（一）理化檢定檢測(cè)疫苗中的有效成分和無(wú)效有害成分物理性狀檢查蛋白質(zhì)含量測(cè)定：基因工程疫苗防腐劑含量測(cè)定純度檢查其他：水分、佐劑等三、疫苗產(chǎn)品的質(zhì)量控制（一）理化檢定三、疫苗產(chǎn)品的質(zhì)量控制（二）安全性檢定菌、毒種和主要原材料的檢查半成品檢查成品檢查三、疫苗產(chǎn)品的質(zhì)量控制（二）安全性檢定三、疫苗產(chǎn)品的質(zhì)量控制（三）效力檢定免疫力試驗(yàn)活疫苗的效力測(cè)定血清學(xué)試驗(yàn)三、疫苗產(chǎn)品的質(zhì)量控制（三）效力檢定生物技術(shù)制藥第2版_第5章_疫苗和制備技術(shù)課件生物技術(shù)制藥第2版_第5章_疫苗和制備技術(shù)課件第五節(jié)疫苗產(chǎn)業(yè)特點(diǎn)及應(yīng)用概況疫苗行業(yè)是生物醫(yī)藥領(lǐng)域中比較高端的細(xì)分領(lǐng)域，具有較高的技術(shù)壁壘、資金壁壘和政策壁壘。

全球疫苗85%的疫苗市場(chǎng)被葛蘭素史克、賽諾菲安萬(wàn)特、默克、惠氏和諾華這五家跨國(guó)制藥企業(yè)所壟斷。我國(guó)疫苗市場(chǎng)規(guī)模已接近100億元，全世界排名前10位的制藥公司已全部進(jìn)軍中國(guó)市場(chǎng)。第五節(jié)疫苗產(chǎn)業(yè)特點(diǎn)及應(yīng)用概況疫苗行業(yè)是生物醫(yī)藥領(lǐng)域中比較高一、疫苗研發(fā)生產(chǎn)特點(diǎn)需全程監(jiān)管研發(fā)是疫苗供應(yīng)體系的核心周期長(zhǎng)、投入高、風(fēng)險(xiǎn)大：10年以上一條生產(chǎn)線只生產(chǎn)一種產(chǎn)品對(duì)大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)技術(shù)的需求高投入產(chǎn)出比高一、疫苗研發(fā)生產(chǎn)特點(diǎn)需全程監(jiān)管二、我國(guó)疫苗分類(lèi)及需求政府免費(fèi)向公民提供、公民依照政府規(guī)定接種公民自愿接種、自費(fèi)負(fù)擔(dān)二、我國(guó)疫苗分類(lèi)及需求政府免費(fèi)向公民提供、公民依照政府規(guī)定接三、我國(guó)疫苗行業(yè)現(xiàn)狀流通領(lǐng)域的開(kāi)放和計(jì)劃免疫范圍的擴(kuò)大，加強(qiáng)計(jì)劃疫苗需求，激活有價(jià)疫苗市場(chǎng)加大傳統(tǒng)疫苗的技術(shù)改良與新型疫苗品種的開(kāi)發(fā)力度展開(kāi)從產(chǎn)品競(jìng)爭(zhēng)到企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)的雙重競(jìng)爭(zhēng)三、我國(guó)疫苗行業(yè)現(xiàn)狀流通領(lǐng)域的開(kāi)放和計(jì)劃免疫范圍的擴(kuò)大，加強(qiáng)四、接種疫苗的效果1.人用疫苗徹底消滅天花基本消滅脊髓灰質(zhì)炎麻疹、百日咳、白喉、流行性乙腦炎、流行性腦脊髓膜炎等發(fā)病率大幅下降2.獸用疫苗四、接種疫苗的效果1.人用疫苗五、面臨的形勢(shì)和挑戰(zhàn)全球性需求和發(fā)展加快關(guān)鍵技術(shù)、裝備研發(fā)、大規(guī)模生產(chǎn)措施及人獸共患病方面較薄弱管理分散、整體保障水平與實(shí)際需求有差距供應(yīng)能力大而不強(qiáng)五、面臨的形勢(shì)和挑戰(zhàn)全球性需求和發(fā)展加快TED（technology,entertainment,design）美國(guó)的一家私有非營(yíng)利機(jī)構(gòu)以每年3月的TED大會(huì)著稱，會(huì)議宗旨是“用思想的力量來(lái)改變世界”。在美國(guó)召集科學(xué)、設(shè)計(jì)、文學(xué)、音樂(lè)等領(lǐng)域的杰出人物，分享關(guān)於技術(shù)、社會(huì)、人的思考和探索。TED演講的特點(diǎn)是毫無(wú)繁雜冗長(zhǎng)的專業(yè)講座，觀點(diǎn)響亮，開(kāi)門(mén)見(jiàn)山，種類(lèi)繁多，看法新穎。TED（technology,entertainment,血凝抑制實(shí)驗(yàn)一種測(cè)定抗原或抗體的技術(shù)血凝現(xiàn)象：有血凝素的病毒能凝集人或動(dòng)物紅細(xì)胞血凝抑制試驗(yàn)：血凝現(xiàn)象被相應(yīng)抗體抑制血凝抑制實(shí)驗(yàn)一種測(cè)定抗原或抗體的技術(shù)單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)將一定量抗體混于瓊脂凝膠中制成瓊脂板，在適當(dāng)位置打孔后將抗原加入孔中，抗原擴(kuò)散過(guò)程中與板中抗體相遇，形成以抗原孔為中心的沉淀環(huán)沉淀環(huán)直徑或面積與抗原濃度呈正相關(guān)用標(biāo)準(zhǔn)抗原或國(guó)際參考蛋白制成標(biāo)準(zhǔn)曲線，即定量檢測(cè)未知標(biāo)本的抗原濃度單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)將一定量抗體混于瓊脂凝膠中制成瓊脂板，在適當(dāng)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（Enzyme-LinkedImmunoSorbentAssay,ELISA）將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使酶標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行的反應(yīng)用于檢測(cè)特異性抗原和抗體特點(diǎn)：快速、靈敏、簡(jiǎn)便、載體易于標(biāo)準(zhǔn)化等分類(lèi)：間接法、夾心法、競(jìng)爭(zhēng)法酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（Enzyme-LinkedImmuno間接法ELISA檢測(cè)——檢測(cè)抗體

用特異性抗原包被固相載體，加入待測(cè)的抗體樣品反應(yīng)后，再加入酶標(biāo)二抗，經(jīng)底物顯色后測(cè)定。間接法ELISA檢測(cè)——檢測(cè)抗體用特異性抗原包被固相載體，夾心法ELISA檢測(cè)——檢測(cè)大分子抗原

用抗體包被固相載體，加入待測(cè)的抗原反應(yīng)后，再加入酶標(biāo)的第二抗原或抗體，經(jīng)底物顯色后測(cè)定，即可計(jì)算出待測(cè)抗原的量。夾心法ELISA檢測(cè)——檢測(cè)大分子抗原用抗體包被固相載體，競(jìng)爭(zhēng)法ELISA檢測(cè)——檢測(cè)小分子抗原用特異性抗體包被固相載體，同時(shí)加入酶標(biāo)抗原和待測(cè)抗原的混合物樣本，待測(cè)抗原將與酶標(biāo)抗原競(jìng)爭(zhēng)與固相上抗體結(jié)合。經(jīng)底物顯色后測(cè)定，計(jì)算兩組數(shù)值之差即可推出待測(cè)抗原的量。競(jìng)爭(zhēng)法ELISA檢測(cè)——檢測(cè)小分子抗原用特異性抗體包被固相載抗酸染色涂片分枝桿菌的細(xì)胞壁內(nèi)含有大量的脂質(zhì)，包圍在肽聚糖的外面，所以分枝桿菌一般不易著色，要經(jīng)過(guò)加熱和延長(zhǎng)染色時(shí)間來(lái)促使其著色。但分枝桿菌中的分枝菌酸與染料結(jié)合后，就很難被酸性脫色劑脫色

在加熱條件下使分枝菌酸與石炭酸復(fù)紅牢固結(jié)合成復(fù)合物，用鹽酸酒精處理也不脫色。當(dāng)再加堿性美蘭復(fù)染后，分枝桿菌仍然為紅色，而其他細(xì)菌及背景中的物質(zhì)為藍(lán)色?？顾崛旧科种U菌的細(xì)胞壁內(nèi)含有大量的脂質(zhì)，包圍在肽聚糖的免疫印跡法（Westernblotting）根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測(cè)復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法具有SDS的高分辨力和固相免疫測(cè)定的高特異性和敏感性，現(xiàn)已成為蛋白分析的一種常規(guī)技術(shù)常用于鑒定某種蛋白，并能對(duì)蛋白進(jìn)行定性和半定量分析。結(jié)合化學(xué)發(fā)光檢測(cè)，可以同時(shí)比較多個(gè)樣品同種蛋白的表達(dá)量差異。免疫印跡法（Westernblotting）根據(jù)抗原抗體高效液相色譜法（HighPerformanceLiquidChromatography，HPLC）以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析。高效液相色譜法（HighPerformanceLiqui思考題1.簡(jiǎn)述疫苗的概念、組成及作用原理。2.簡(jiǎn)述各類(lèi)疫苗的主要特點(diǎn)及制備方法。3.何為治療性疫苗？與預(yù)防性疫苗的區(qū)別？4.設(shè)計(jì)并簡(jiǎn)述禽流感H5N1疫苗的主要制備流程。思考題1.簡(jiǎn)述疫苗的概念、組成及作用原理。知識(shí)回顧KnowledgeReview祝您成功！知識(shí)回顧KnowledgeReview祝您成功！第五章

疫苗及其制備技術(shù)第五章

疫苗及其制備技術(shù)疫苗（Vaccine）傳統(tǒng)概念：將病原微生物（細(xì)菌、病毒、真菌等）及其代謝產(chǎn)物，經(jīng)過(guò)人工減毒、滅活或利用基因工程等方法制成的用于預(yù)防傳染病的免疫制劑。世界衛(wèi)生組織的擴(kuò)大免疫措施（EPI）——兒童免疫程序表疫苗（Vaccine）傳統(tǒng)概念：將病原微生物（細(xì)菌、病毒、真、成人、成人現(xiàn)代疫苗：治療性疫苗、非感染性疾病疫苗疫苗學(xué)（Vaccinology）現(xiàn)代疫苗：治療性疫苗、非感染性疾病疫苗本章學(xué)習(xí)要求掌握：疫苗、基因工程疫苗、聯(lián)合疫苗的概念及常見(jiàn)疫苗的制備技術(shù)熟悉：疫苗的原理、類(lèi)型、特點(diǎn)及主要用途了解：疫苗發(fā)展的歷程與趨勢(shì)、疫苗產(chǎn)業(yè)的特點(diǎn)與應(yīng)用本章學(xué)習(xí)要求掌握：疫苗、基因工程疫苗、聯(lián)合疫苗的概念及常見(jiàn)疫本章內(nèi)容概述疫苗的組成、作用原理、類(lèi)型與特點(diǎn)疫苗的制備方法疫苗生產(chǎn)的質(zhì)量控制疫苗產(chǎn)業(yè)的特點(diǎn)及應(yīng)用概況本章內(nèi)容概述第一節(jié)概述一、疫苗的產(chǎn)生“12世紀(jì)，中國(guó)開(kāi)始用人痘接種預(yù)防天花”《疫苗可預(yù)防疾病的流行病學(xué)與預(yù)防學(xué)》

第6版，美國(guó)疾病控制與預(yù)防中心（CDC）2000年出版

第一節(jié)概述一、疫苗的產(chǎn)生一、疫苗的產(chǎn)生天花（Smallpox）由天花病毒引起的一種烈性傳染病天花病毒：呈磚形，能對(duì)抗干燥和低溫，在痂皮、塵土和被服上可生存數(shù)月至一年半之久臨床表現(xiàn)：主要為嚴(yán)重毒血癥狀、皮膚成批依次出現(xiàn)斑疹、丘疹、皰疹、膿皰，最后結(jié)痂、脫痂，遺留痘疤。傳播途徑：飛沫吸入或直接接觸。特點(diǎn)：發(fā)展迅速，未免疫人群感染后15-20天內(nèi)致死率高達(dá)30％。一、疫苗的產(chǎn)生天花（Smallpox）一、疫苗的產(chǎn)生天花的防治——中國(guó)宋真宗時(shí)期（998-1023年）：人痘法，吸入天花病人痂粉預(yù)防天花。明朝隆慶年間（1567-1572年）：痘衣法、痘漿法、旱痘法和水苗法等多種接種方法出現(xiàn)。清朝順治死于天花，得過(guò)天花的康熙繼位人痘法的缺點(diǎn)：有時(shí)也會(huì)引起嚴(yán)重的天花一、疫苗的產(chǎn)生天花的防治——中國(guó)一、疫苗的產(chǎn)生天花的防治——?dú)W洲1721年，人痘接種法傳入英國(guó)1796年，英國(guó)醫(yī)生E.Jenner利用牛痘防治天花1798年，醫(yī)學(xué)界正式承認(rèn)“疫苗接種確實(shí)是一種行之有效的免疫方法”。細(xì)胞培養(yǎng)法獲得天花病毒——牛痘苗一、疫苗的產(chǎn)生天花的防治——?dú)W洲生物技術(shù)制藥第2版_第5章_疫苗和制備技術(shù)課件一、疫苗的產(chǎn)生疫苗之父法國(guó)免疫學(xué)家LouisPasteur雞霍亂弧菌減毒株（第一個(gè)細(xì)菌減毒活疫苗）一、疫苗的產(chǎn)生疫苗之父法國(guó)免疫學(xué)家LouisPas一、疫苗的產(chǎn)生巴斯德與狂犬病疫苗異體傳代法：將狂犬病毒在兔體內(nèi)經(jīng)連續(xù)傳代，獲得了減毒株一、疫苗的產(chǎn)生巴斯德與狂犬病疫苗一、疫苗的產(chǎn)生巴斯德在疫苗領(lǐng)域的卓越貢獻(xiàn)細(xì)菌的分離培養(yǎng)技術(shù)減毒菌株的獲得連續(xù)傳代培養(yǎng)法高溫培養(yǎng)法異體傳代法巴氏減毒菌苗的發(fā)明：為實(shí)驗(yàn)免疫學(xué)建立了基礎(chǔ)一、疫苗的產(chǎn)生巴斯德在疫苗領(lǐng)域的卓越貢獻(xiàn)二、疫苗及其技術(shù)的發(fā)展簡(jiǎn)史（一）減毒活疫苗技術(shù)——第一次疫苗革命（二）基因重組疫苗技術(shù)——第二次疫苗革命（三）反向疫苗學(xué)技術(shù)——第三次疫苗革命二、疫苗及其技術(shù)的發(fā)展簡(jiǎn)史（一）減毒活疫苗技術(shù)——第一次疫苗二、疫苗及其技術(shù)的發(fā)展簡(jiǎn)史（一）減毒活疫苗技術(shù)——細(xì)胞水平人為處理使病原微生物失去毒力或降低毒力例：卡介苗（BacillusCalmette-Guérin,BCG，使用活的無(wú)毒牛型結(jié)核桿菌制成）、炭疽疫苗、狂犬疫苗二、疫苗及其技術(shù)的發(fā)展簡(jiǎn)史（一）減毒活疫苗技術(shù)——細(xì)胞水平二、疫苗及其技術(shù)的發(fā)展簡(jiǎn)史藥物毒理：結(jié)核菌是細(xì)胞內(nèi)寄生菌——細(xì)胞免疫用無(wú)毒卡介菌（結(jié)核菌）人工接種進(jìn)行初次感染，經(jīng)過(guò)巨噬細(xì)胞的加工處理，將其抗原信息傳遞給免疫活性細(xì)胞，使T細(xì)胞分化增殖，形成致敏淋巴細(xì)胞，當(dāng)機(jī)體再遇到結(jié)核菌感染時(shí)，巨噬細(xì)胞和致敏淋巴細(xì)胞迅速被激活，執(zhí)行免疫功能，引起特異性免疫反應(yīng)。二、疫苗及其技術(shù)的發(fā)展簡(jiǎn)史藥物毒理：二、疫苗及其技術(shù)的發(fā)展簡(jiǎn)史（二）基因重組疫苗技術(shù)——分子水平基因重組技術(shù)研究相關(guān)基因和蛋白質(zhì)產(chǎn)物例：乙肝疫苗（乙型肝炎表面抗原）二、疫苗及其技術(shù)的發(fā)展簡(jiǎn)史（二）基因重組疫苗技術(shù)——分子水平二、疫苗及其技術(shù)的發(fā)展簡(jiǎn)史血源乙肝疫苗：無(wú)癥狀HBsAg攜帶者血漿提取的HBsAg，經(jīng)純化，滅活及添加佐劑制成?；蛑亟M（轉(zhuǎn)基因）乙肝疫苗：利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)，構(gòu)建含有乙肝病毒HBsAg基因的重組質(zhì)粒，轉(zhuǎn)入酵母（或重組CHO細(xì)胞）表達(dá)乙型肝炎表面抗原，在繁殖過(guò)程中產(chǎn)生未糖基化的HBsAg多肽，經(jīng)破碎酵母菌體，顆粒形未糖基化的HBsAg多肽釋放，經(jīng)純化，滅活，添加佐劑制成。

二、疫苗及其技術(shù)的發(fā)展簡(jiǎn)史血源乙肝疫苗：無(wú)癥狀HBsAg攜帶二、疫苗及其技術(shù)的發(fā)展簡(jiǎn)史基因工程技術(shù)在疫苗領(lǐng)域應(yīng)用構(gòu)建無(wú)毒或減毒疫苗：毒素基因突變構(gòu)建載體活疫苗：目的基因克隆至臨床常規(guī)使用的活疫苗中二、疫苗及其技術(shù)的發(fā)展簡(jiǎn)史基因工程技術(shù)在疫苗領(lǐng)域應(yīng)用二、疫苗及其技術(shù)的發(fā)展簡(jiǎn)史（三）反向疫苗學(xué)技術(shù)——蛋白質(zhì)水平全基因水平篩選具有保護(hù)性免疫反應(yīng)的候選抗原具體步驟：1.基因組信息分析結(jié)合基因芯片篩選候選疫苗成分2.高通量基因重組表達(dá)候選疫苗蛋白成分3.免疫保護(hù)性測(cè)試二、疫苗及其技術(shù)的發(fā)展簡(jiǎn)史（三）反向疫苗學(xué)技術(shù)——蛋白質(zhì)水平二、疫苗及其技術(shù)的發(fā)展簡(jiǎn)史例：B型腦膜炎球菌（meningococcusB）

先用計(jì)算機(jī)分析B型腦膜炎球菌的基因組，找到600個(gè)潛在的疫苗候補(bǔ)，將其中350個(gè)在大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá)，然后將蛋白提純用于免疫小鼠，其中找到29個(gè)蛋白能誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生抗體，從而達(dá)到預(yù)防免疫的作用。二、疫苗及其技術(shù)的發(fā)展簡(jiǎn)史例：B型腦膜炎球菌（meningo第二節(jié)

疫苗的組成、作用原理、類(lèi)型與特點(diǎn)一、疫苗組成抗原佐劑防腐劑穩(wěn)定劑滅活劑緩沖液、鹽類(lèi)等非活性成分第二節(jié)

疫苗的組成、作用原理、類(lèi)型與特點(diǎn)一、疫苗組成一、疫苗組成1.抗原（antigen，Ag）疫苗最主要的有效活性成分免疫原性（immunogenicity）：刺激機(jī)體特異性免疫細(xì)胞活化、增殖、分化并產(chǎn)生免疫效應(yīng)物。免疫反應(yīng)性（immunoreactivity）：與免疫效應(yīng)物發(fā)生特異性結(jié)合而產(chǎn)生免疫反應(yīng)。一、疫苗組成1.抗原（antigen，Ag）一、疫苗組成常用抗原包括：

滅活病毒或細(xì)菌活病毒或細(xì)菌（減毒株）病毒或菌體提純物有效蛋白成分類(lèi)毒素細(xì)菌多糖合成多肽

核酸一、疫苗組成常用抗原包括：2.佐劑（adjuvant）非特異性增強(qiáng)抗原免疫應(yīng)答或改變免疫應(yīng)答類(lèi)型的物質(zhì)。要求：安全無(wú)毒、在非冷藏條件下穩(wěn)定作用機(jī)制：

改變抗原的物理形狀，延長(zhǎng)抗原在機(jī)體內(nèi)保留時(shí)間刺激單核巨噬細(xì)胞對(duì)抗原的遞呈能力

刺激淋巴細(xì)胞分化，增加擴(kuò)大免疫應(yīng)答能力一、疫苗組成2.佐劑（adjuvant）一、疫苗組成一、疫苗組成常用佐劑：用于人體：鋁佐劑/MF59（水包油的乳劑）動(dòng)物試驗(yàn)：弗氏完全佐劑（FCA）/弗氏不完全佐劑（FIA）一、疫苗組成常用佐劑：3.防腐劑大多數(shù)的滅活疫苗都使用防腐劑目的：防止外來(lái)微生物的污染常用：0.01％～0.02％硫柳汞2-苯氧乙醇氯仿副作用：接觸性皮炎、變應(yīng)性結(jié)膜炎、耳毒性一、疫苗組成3.防腐劑一、疫苗組成4.穩(wěn)定劑目的：保證作為抗原的病毒或其他微生物存活，并保持免疫原性凍干疫苗中常用：乳糖、明膠、山梨醇等。

一、疫苗組成4.穩(wěn)定劑一、疫苗組成5.滅活劑滅活病毒或細(xì)菌抗原的方法：

物理方法（如加熱、紫外線照射等）

化學(xué)方法（丙酮、酚、甲醛等）對(duì)人體有一定毒害作用，因此在滅活抗原后必須及時(shí)從疫苗中除去，并經(jīng)嚴(yán)格檢定以保證疫苗的安全性。一、疫苗組成5.滅活劑一、疫苗組成6.緩沖液、鹽類(lèi)緩沖液的種類(lèi)、鹽類(lèi)的含量都可影響疫苗的效力、純度和安全性，因此都有嚴(yán)格的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)一、疫苗組成6.緩沖液、鹽類(lèi)一、疫苗組成二、疫苗作用原理當(dāng)機(jī)體經(jīng)過(guò)口服或注射等途徑接種疫苗后，其中的抗原分子刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生高效價(jià)特異性的免疫保護(hù)物質(zhì)當(dāng)機(jī)體再次接觸到相同病原菌抗原時(shí)，免疫系統(tǒng)依循免疫記憶，迅速制造出保護(hù)物質(zhì)來(lái)阻斷病原菌的入侵，從而使機(jī)體獲得針對(duì)病原體特異性的免疫力，使其免受侵害而獲得保護(hù)。二、疫苗作用原理當(dāng)機(jī)體經(jīng)過(guò)口服或注射等途徑接種疫苗后，其中的三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)（一）減毒活疫苗（二）滅活疫苗（三）亞單位疫苗（四）聯(lián)合疫苗（五）核酸疫苗（六）治療性疫苗三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)（一）減毒活疫苗三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)（一）減毒活疫苗（liveattenuatedvaccine）通過(guò)一定方法使病原體的致病性減弱或喪失后獲得的由完整微生物組成的疫苗制品特點(diǎn)：能引發(fā)機(jī)體感染但不發(fā)生臨床癥狀，但其免疫原性可引發(fā)機(jī)體免疫反應(yīng)，刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性的記憶B細(xì)胞和記憶T細(xì)胞，起到獲得長(zhǎng)期或終生保護(hù)的作用。

三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)（一）減毒活疫苗（liveattenu三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：接種次數(shù)少，反應(yīng)小，免疫效果好（體液免疫、細(xì)胞免疫、黏膜免疫），成本低缺點(diǎn)：穩(wěn)定性差，有毒力返祖現(xiàn)象，污染環(huán)境，免疫缺陷者不能接種三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)（二）滅活疫苗（inactivatedvaccine）將病原體經(jīng)培養(yǎng)增殖、滅活、純化處理后獲得的保留病原體幾乎全部組分的疫苗制品。特點(diǎn)：失去了病原體的感染性，但保留了較強(qiáng)的免疫原性和較好的安全性三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)（二）滅活疫苗（inactivated三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：穩(wěn)定性好，反應(yīng)小，免疫缺陷者也可接種缺點(diǎn)：需多次接種，免疫效果較差（體液免疫），需要量大三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)（三）亞單位疫苗（subunitvaccine）

利用微生物的某種表面結(jié)構(gòu)成分制成的能誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生抗體的疫苗制品。分類(lèi)：純化亞單位疫苗：?jiǎn)蝹€(gè)蛋白或寡糖組成、佐劑合成肽亞單位疫苗：抗病毒/腫瘤/細(xì)菌、寄生蟲(chóng)感染基因工程亞單位疫苗三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)（三）亞單位疫苗（subunitvac三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)基因工程亞單位疫苗（geneticengineeringsubunitvaccine）在分離出病原體特異抗原編碼基因的基礎(chǔ)上，將外源基因轉(zhuǎn)入非致病性微生物內(nèi)表達(dá)產(chǎn)物，然后通過(guò)分離純化獲得的特異蛋白質(zhì)。原核細(xì)胞（大腸桿菌）、真核細(xì)胞（酵母）活載體疫苗（細(xì)菌、病毒）、轉(zhuǎn)基因植物疫苗三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)基因工程亞單位疫苗（geneticen三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)（四）聯(lián)合疫苗（combinedvaccine）兩種或兩種以上抗原物理混合后制成的疫苗制劑。多聯(lián)疫苗（multi-combinedvaccine）：預(yù)防不同病原微生物引起的傳染病（例：百白破）多價(jià)疫苗（multivalentvaccine）：預(yù)防由同一病原微生物不同亞型引起的傳染?。ɡ?3價(jià)肺炎多糖疫苗）三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)（四）聯(lián)合疫苗（combinedvac三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)（五）核酸疫苗（nucleicacidvaccine）也稱基因疫苗（geneticvaccine），包括DNA疫苗和RNA疫苗。由抗原的編碼基因和載體組成，導(dǎo)入機(jī)體細(xì)胞后可通過(guò)宿主細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)表達(dá)蛋白抗原，誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生細(xì)胞和體液免疫應(yīng)答的疫苗制劑。三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)（五）核酸疫苗（nucleicacid三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)DNA疫苗（DNAvaccine）將編碼外源性抗原的基因插入到含真核表達(dá)系統(tǒng)的質(zhì)粒上，導(dǎo)入宿主細(xì)胞內(nèi)表達(dá)抗原蛋白，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答。特點(diǎn)：免疫效果好，制備方便，可重復(fù)使用，可用于免疫治療和聯(lián)合免疫三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)DNA疫苗（DNAvaccine）三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)（六）治療性疫苗（therapeuticvaccine）在已感染病原微生物或已患有某些疾病的機(jī)體中，通過(guò)誘導(dǎo)特異性的免疫應(yīng)答，達(dá)到治療或防止疾病惡化的疫苗制品。最早的治療性疫苗：狂犬病疫苗三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)（六）治療性疫苗（therapeutic三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)1.基于組成成分及性質(zhì)的分類(lèi)（1）蛋白質(zhì)復(fù)合重構(gòu)的治療性疫苗改造靶抗原的結(jié)構(gòu)或組合，使其相似而又有異于傳統(tǒng)疫苗的靶抗原，重新喚起患者的功能性免疫應(yīng)答，進(jìn)而打破和逆轉(zhuǎn)患者的免疫耐受狀態(tài)。改造方法：蛋白修飾，結(jié)構(gòu)/構(gòu)型改造，蛋白復(fù)合/多肽偶聯(lián)三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)1.基于組成成分及性質(zhì)的分類(lèi)三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)（2）基因疫苗DNA疫苗：埃博拉（Ebola）疫苗、乙型肝炎（HBV）疫苗、丙型肝炎（HCV）疫苗、人免疫缺陷病毒（HIV）疫苗等RNA疫苗：RNA修飾的樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）疫苗等三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)（2）基因疫苗三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)（3）多水平基因修飾細(xì)胞疫苗腫瘤治療性疫苗：腫瘤細(xì)胞/DC細(xì)胞疫苗制備過(guò)程：三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)（3）多水平基因修飾細(xì)胞疫苗三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)2.基于治療疾病種類(lèi)的分類(lèi)（1）感染性疾病的治療性疫苗（2）腫瘤治療性疫苗（3）自身免疫性疾病的治療性疫苗（4）移植用治療性疫苗三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)2.基于治療疾病種類(lèi)的分類(lèi)三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)預(yù)防性疫苗治療性疫苗病原體蛋白不需改造需經(jīng)分子設(shè)計(jì)和重新構(gòu)建受用者健康人體患者監(jiān)測(cè)手段保護(hù)性抗體產(chǎn)生情況疾病改善情況激發(fā)免疫應(yīng)答類(lèi)型體液免疫為主細(xì)胞免疫為主三、疫苗的類(lèi)型與特點(diǎn)預(yù)防性疫苗治療性疫苗病原體蛋白不需改造需第三節(jié)疫苗的制備方法滅活全毒疫苗——流感全病毒滅活疫苗減毒活疫苗——皮內(nèi)注射用卡介苗基因工程重組亞單位疫苗——重組乙型肝炎疫苗生化提取亞單位組分疫苗——吸附破傷風(fēng)疫苗治療性疫苗——前列腺癌疫苗Sipuleucel-T第三節(jié)疫苗的制備方法滅活全毒疫苗——流感全病毒滅活疫苗疫苗生產(chǎn)的一般流程疫苗生產(chǎn)的一般流程一、滅活全毒疫苗——流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluenzawholevirionvaccine）本品系用世界衛(wèi)生組織（WHO）推薦的并經(jīng)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的流感病毒株，分別接種雞胚，經(jīng)培養(yǎng)、收獲病毒液，病毒滅活、濃縮和純化后制成。用于預(yù)防本株病毒引起的流行性感冒一、滅活全毒疫苗——流感全病毒滅活疫苗（inactiated一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluenzawholevirionvaccine）The

influenzavaccineisanannualvaccinationusingavaccinethatisspecificforagivenyeartoprotectagainstthehighlyvariable

influenzavirus.

Eachseasonalinfluenzavaccinecontainsantigensrepresentingthree(trivalentvaccine)orfour(quadrivalentvaccine)influenza

virusstrains:twoinfluenzatypeAvirusstrains,andeitheroneortwoinfluenzatypeBvirusstrains.

一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluen流感病毒甲型流感病毒（InfluenzaAvirus）最容易發(fā)生變異（抗原轉(zhuǎn)變、抗原漂移）世界性流感大流行：甲型流感病毒出現(xiàn)新亞型或舊亞型重現(xiàn)引起甲型流感病毒根據(jù)H(hemagglutinin，血凝素)和N(neuraminidase，神經(jīng)氨酸酶)抗原不同分為許多亞型，H有17個(gè)亞型（H1～H17），N有10個(gè)亞型（N1～N10）。H1、H5、H7亞型為高致病性流感病毒甲型流感病毒（InfluenzaAvirus）流感病毒乙型流感病毒（InfluenzaBvirus）抗原變異很慢局限性流行，對(duì)人類(lèi)致病性較低丙型流感病毒（InfluenzaCvirus）抗原穩(wěn)定致病力較弱，主要侵犯幼兒和免疫力低下的人群，只引起人類(lèi)不明顯的或輕微的上呼吸道感染流感病毒乙型流感病毒（InfluenzaBvirus）一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluenzawholevirionvaccine）Influenzavaccinesmaybe

administered

asaninjection

orasanasalspray.TheU.S.

CentersforDiseaseControlandPreventionrecommendthateveryoneovertheagesof6monthsshouldreceivetheseasonalinfluenzavaccine.

Vaccinationcampaigns

usuallyfocusonpeoplewhoareathighriskof

seriouscomplications

iftheycatchtheflu,suchastheelderlyandpeoplelivingwithchronicillness

orthosewith

weakenedimmunesystems,aswellashealthcareworkers.一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluen一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluenzawholevirionvaccine）（一）制備方法1.生產(chǎn)用原材料雞胚是分離各類(lèi)病毒的較為理想的材料尿囊腔一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluen一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluenzawholevirionvaccine）（1）雞胚毒種傳代和制備：來(lái)源于SPF（SpecificpathogenFree）雞群疫苗生產(chǎn)：來(lái)源于封閉式房舍內(nèi)飼養(yǎng)的健康雞群、9-11日齡無(wú)畸形、血管清晰、活動(dòng)（2）毒種WHO推薦并提供的甲型和乙型流感病毒株一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluen一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluenzawholevirionvaccine）2.毒種種子批的建立及檢定符合“生物制品生產(chǎn)檢定用菌毒種管理規(guī)程”規(guī)定一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluen一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluenzawholevirionvaccine）2.毒種種子批的建立及檢定建立：以毒種為基礎(chǔ)傳代（5代以內(nèi)得成品疫苗）血凝素型別鑒定試驗(yàn)血凝抑制試驗(yàn)

單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)病毒滴度：雞胚半數(shù)感染劑量法血凝滴度：血凝法無(wú)菌檢查、支原體檢查外源性禽白血病病毒、禽腺病毒檢測(cè)：ELISA保存：凍干毒種-20℃以下，液體毒種-60℃以下檢定一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluen一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluenzawholevirionvaccine）3.單價(jià)原液的制備各流感病毒工作種子批分別接種（尿囊腔），33-35℃培養(yǎng)48-72h病毒收獲（尿囊液）收獲液檢定

微生物限度：菌數(shù)<105CFU/ml，沙門(mén)氏菌為陰性血凝滴度收獲液合并一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluen一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluenzawholevirionvaccine）3.單價(jià)原液的制備病毒滅活（甲醛≤200μg/ml）、驗(yàn)證及內(nèi)毒素含量測(cè)定濃縮（超濾）、純化（柱色譜法、蔗糖密度區(qū)帶離心）及過(guò)濾除菌（硫柳汞）單價(jià)原液保存（2-8℃）一、流感全病毒滅活疫苗（inactiatedinfluen一