食品微生物學(xué)檢驗(yàn)GB-4789-系列知識(shí)點(diǎn)匯總

食品微生物學(xué)檢驗(yàn)GB4789系列知識(shí)點(diǎn)匯總GB4789.1-2023食品衛(wèi)生學(xué)檢驗(yàn)總那么一、2023版總那么變更內(nèi)容1.刪除了標(biāo)準(zhǔn)中的英文名稱、起草單位變更為中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生和方案生育委員會(huì)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局。2.刪除了標(biāo)準(zhǔn)性引用文件。3.修改了實(shí)驗(yàn)室根本要求：應(yīng)具有相應(yīng)的微生物專業(yè)教育或培訓(xùn)經(jīng)歷〔如生物學(xué)、植物學(xué)、醫(yī)學(xué)、食品科學(xué)與工程、食品質(zhì)量與平安等與微生物有關(guān)的相關(guān)專業(yè)〕，具備相應(yīng)的資質(zhì)〔應(yīng)有崗位上崗證、生物平安上崗證和壓力容器上崗證〕，能夠理解并正確實(shí)施檢驗(yàn)。=1\*GB3①人員修改為檢驗(yàn)人員應(yīng)掌握實(shí)驗(yàn)室生物平安操作和消毒知識(shí)〔相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)及培訓(xùn)，如GB19489-2023實(shí)驗(yàn)室生物平安通用要求、消毒技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)〔2002〕〕。應(yīng)在檢驗(yàn)過(guò)程中保持個(gè)人整潔與衛(wèi)生，防止人為污染樣品。應(yīng)在檢驗(yàn)過(guò)程中遵守相關(guān)平安措施的規(guī)定，確保自身平安。有顏色視覺(jué)障礙的人員不能從事涉及辨色的實(shí)驗(yàn)〔即無(wú)顏色視覺(jué)障礙〕。=2\*GB3②環(huán)境與設(shè)施--突出溫度、濕度和潔凈度。生物危害程度應(yīng)與實(shí)驗(yàn)室生物防護(hù)水平相適應(yīng):第一類：引起人和動(dòng)物非常嚴(yán)重疾病，國(guó)家未發(fā)現(xiàn)或已宣布消滅的微生物，如天花病毒。第二類：引起任何動(dòng)物比擬嚴(yán)重疾病，在人和人、人和動(dòng)物之間傳播如霍亂弧菌。病原微生物分類第三類：引起疾病，但對(duì)人、動(dòng)物或者環(huán)境不構(gòu)成嚴(yán)重危害如沙門氏菌、單增李斯特氏菌。第四類：通常不會(huì)引起人或動(dòng)物疾病的微生物。一級(jí)〔BSL-1〕：操作第四類病原微生物〔屬于正壓，適用范圍如大腸埃希氏菌、枯草芽孢桿菌等。重要設(shè)備是超凈工作臺(tái)，它可以保護(hù)樣品不受污染?！硨?shí)驗(yàn)室生物平安級(jí)別二級(jí)〔BSL-2〕：操作第三類病原微生物〔屬于負(fù)壓，適用范圍如沙門氏菌、等致病菌。重要設(shè)備是=2\*ROMANII級(jí)生物平安柜?！橙?jí)〔BSL-3〕：操作第二類病原微生物四級(jí)〔BSL-4〕：操作第一類病原微生物消毒：是殺死微生物的物理或化學(xué)手段，但不一定殺死其中的孢子。滅菌：是殺死和去除所有微生物及其中孢子的過(guò)程。紫外線消毒〔臭氧〕環(huán)境：潔凈室消毒空間熏蒸〔如空間被霉菌污染可用甲醛熏蒸法消毒〕消毒劑外表消毒微生物實(shí)驗(yàn)濕熱滅菌或常用室消毒滅菌方式平皿工器具滅菌和設(shè)備消毒高壓滅菌干熱滅菌〔180℃1h或170℃2h〕濕熱滅菌或高壓滅菌培養(yǎng)基和試劑滅菌煮沸滅菌過(guò)濾除菌紫外線消毒法：紫外燈管放射一定波長(zhǎng)，破壞細(xì)菌或病毒的DNA和RNA，使他們喪失生存能力和繁殖能力，從而到達(dá)滅菌目的。紫外線的特點(diǎn)是對(duì)芽孢和營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞都能起作用，但細(xì)菌芽孢和霉菌芽孢對(duì)其抵抗力大，且紫外線穿透力極低，所以只能用于外表滅菌，對(duì)固體物質(zhì)滅菌不徹底。微生物實(shí)驗(yàn)室消毒處理方法：最正確殺菌波長(zhǎng)：260nm，需定期更換。有效殺菌距離物品：25-60cm空氣：＜2m照射時(shí)間：燈亮5-7min后開(kāi)始計(jì)算，＞30min〔無(wú)人條件下翻開(kāi)〕適用范圍：室內(nèi)空氣、物體外表。考前須知：人員需在關(guān)閉紫外燈至少30min前方可入內(nèi)作業(yè)。=3\*GB3③檢驗(yàn)用品--增加附錄A和一次性用品。附錄A微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢驗(yàn)用品和設(shè)備高壓鍋滅菌效果評(píng)價(jià)方法化學(xué)指示劑：即化學(xué)指示卡/膠帶，使用方便，高壓后可立即得知檢測(cè)結(jié)果。生物指示劑：準(zhǔn)確性高，高壓后需要培養(yǎng)后才得知檢測(cè)結(jié)果。=4\*GB3④培養(yǎng)基和試劑質(zhì)控-GB4789.28-2023。=5\*GB3⑤質(zhì)控菌株-新增實(shí)驗(yàn)室別離、鑒定的野生菌株。4.修改了樣品采集=1\*GB3①采樣原那么：樣品的采集應(yīng)遵循隨機(jī)性、代表性的原那么；采樣過(guò)程遵循無(wú)菌操作程序，防止一切可能的外來(lái)污染。=2\*GB3②采樣方案：根據(jù)檢驗(yàn)?zāi)康?、食品特點(diǎn)、批量、檢驗(yàn)方法、微生物的威海程度等確定采樣方案。采樣方案分為二級(jí)好三級(jí)采樣方案。二級(jí)采樣方案設(shè)有n、c和m值，三級(jí)采樣方案設(shè)有n、c、m和M值?！财渲衝表示桶一批次產(chǎn)品應(yīng)采集的樣品件數(shù)；c表示最大可允許超出m值得樣品數(shù)；m表示微生物指標(biāo)可接受水平限量值(三級(jí)采樣方案)或最高平安限量值(二級(jí)采樣方案)；M表示微生物指標(biāo)的最高平安限量值?！晨记绊氈喊凑斩?jí)采樣方案設(shè)定的指標(biāo)，在n個(gè)樣品中，允許有≤c個(gè)樣品其相應(yīng)微生物指標(biāo)檢驗(yàn)值大于m值。按照三級(jí)采樣方案設(shè)定的指標(biāo)，在n個(gè)樣品中，允許全部樣品中相應(yīng)微生物指標(biāo)檢驗(yàn)值≤m值；允許有≤c個(gè)樣品其相應(yīng)微生物指標(biāo)檢驗(yàn)值在m值和M值之間；不允許有樣品相應(yīng)微生物指標(biāo)檢驗(yàn)值大于M值。5.修改了檢驗(yàn)—“樣品檢驗(yàn)〞6.修改了生物平安和質(zhì)量控制〔優(yōu)化〕7.修改了記錄與報(bào)告檢驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)即時(shí)、客觀地記錄觀察到的現(xiàn)象、結(jié)果和數(shù)據(jù)等信息。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)按照檢驗(yàn)方法中規(guī)定的要求，準(zhǔn)確、客觀地報(bào)告檢驗(yàn)結(jié)果。8.修改了檢驗(yàn)后樣品的處理檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告后，被檢樣品方能處理；檢出致病菌的樣品要經(jīng)過(guò)無(wú)害化處理；檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告后，剩余樣品和同批產(chǎn)品不進(jìn)行微生物工程的復(fù)檢。二、2023版總那么具體要求各種微生物危害分類采樣分級(jí)危害程度微生物學(xué)指標(biāo)三級(jí)食品保質(zhì)期菌落總數(shù)、霉菌和酵母間接指示菌大腸菌群、糞大腸菌群、大腸埃希氏菌、腸桿菌科、金黃色葡萄球菌中等程度局限傳播葡萄球菌腸毒素、副溶血性弧菌、蠟樣芽孢桿菌、產(chǎn)氣夾饃梭菌二級(jí)中等程度廣泛傳播沙門氏菌、諾如病毒、腸出血大腸埃希氏菌嚴(yán)重程度O1型霍亂、肉毒梭菌單核細(xì)胞增生李斯特氏菌嬰兒食品沙門氏菌赫爾阪崎腸桿菌在中等以上甚至嚴(yán)重危害的情況下，使用二級(jí)采樣方案。對(duì)健康危害低的，那么建議使用三級(jí)采樣方案。分級(jí)抽樣方案：同批食品總微生物數(shù)量一般是正態(tài)分布，說(shuō)明同批次具有均一性。但對(duì)于單一檢樣來(lái)說(shuō)，微生物分布或數(shù)量一般不會(huì)均勻〔液態(tài)食品除外〕。這樣的不均一型造成檢驗(yàn)結(jié)果判讀困難。N越大越準(zhǔn)確，但是應(yīng)考慮適度嚴(yán)格性的要求。三、2023版總那么相關(guān)質(zhì)量控制檢驗(yàn)人員的質(zhì)量控制〔實(shí)施考核、監(jiān)督方式〕：1.問(wèn)答、試題2.盲樣測(cè)試3.加標(biāo)測(cè)試4.實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部人員比照r≤0.25參考BSENISO4833-2003，其中對(duì)結(jié)果重復(fù)性的規(guī)定為：用相同的方法，同一試驗(yàn)材料，在相同的條件〔同一操作者、相同的設(shè)備、同一實(shí)驗(yàn)室和短暫的時(shí)間間隔〕下，所測(cè)得的兩個(gè)獨(dú)立測(cè)試結(jié)果只差的絕對(duì)值不能大于重復(fù)性極限〔r=0.25〕。舉例：第一次測(cè)試結(jié)果為105=100000CFU/g(ml)第二次測(cè)試結(jié)果應(yīng)在第一次結(jié)果的±0.25log10單位范圍內(nèi)即在log104.75-og105.25范圍內(nèi)即第二次測(cè)試結(jié)果在56000-178000CFU/g(ml)范圍內(nèi)視為無(wú)差異。5.實(shí)驗(yàn)室間比照R≤0.45參考BSENISO4833-2003，其中對(duì)結(jié)果重復(fù)性的規(guī)定為：用相同的方法，同一試驗(yàn)材料，在不同的條件〔不同的操作者、不同的設(shè)備、不同的實(shí)驗(yàn)、不同或相同的時(shí)間〕下，所得的兩個(gè)測(cè)試結(jié)果只差絕對(duì)值不能大于再現(xiàn)性極限，即R=0.45。舉例：第一次測(cè)試結(jié)果為105=100000CFU/g(ml)第二次測(cè)試結(jié)果應(yīng)在第一次結(jié)果的±0.45log10單位范圍內(nèi)即在log104.55-og105.45范圍內(nèi)即第二次測(cè)試結(jié)果在36000-280000CFU/g(ml)范圍內(nèi)視為無(wú)差異。GB4789.2-2023食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測(cè)定一、菌落總數(shù)的定義食品檢樣經(jīng)過(guò)處理，在一定條件下〔如培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間等〕培養(yǎng)后，所得每g(ml)檢樣中形成的微生物菌落總數(shù)。在GB4789.2-2023的培養(yǎng)條件下所得結(jié)果，只包括一群在平板計(jì)數(shù)瓊脂上生長(zhǎng)發(fā)育的嗜中溫需氧菌或兼性厭氧菌的菌落總數(shù)。注意：有的平板計(jì)數(shù)瓊脂上長(zhǎng)一片霉菌，那么此次試驗(yàn)結(jié)果作廢，需重新檢測(cè)〔霉菌屬于真菌類，它產(chǎn)生的霉菌毒素一直普通菌的生長(zhǎng)，所以假設(shè)有一大片霉菌生長(zhǎng)需重新檢測(cè)，并清理實(shí)驗(yàn)室?！扯⒕淇倲?shù)測(cè)定的衛(wèi)生學(xué)意義檢測(cè)食品本身的新鮮程度和加工、貯存運(yùn)輸過(guò)程中是否受到污染。必須配合大腸菌群的檢驗(yàn)和其他病原菌工程的檢驗(yàn)，才能作出比擬全面準(zhǔn)確的判定。三、2023版國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的主要變動(dòng)=1\*GB3①拍擊式均質(zhì)：方便，只需購(gòu)置一次性無(wú)菌均質(zhì)袋；快捷，1-2min內(nèi)完成均質(zhì)；科學(xué)，均質(zhì)過(guò)程中不會(huì)產(chǎn)生高溫；均質(zhì)均勻，可使樣品菌完全稀釋出來(lái)；此方法不適合均質(zhì)堅(jiān)硬樣品，如魚骨類樣品。=2\*GB3②培養(yǎng)基---平板計(jì)數(shù)瓊脂營(yíng)養(yǎng)瓊脂NA營(yíng)養(yǎng)瓊脂NA2003版蛋白胨10.0g牛肉膏3.0g氯化鈉5.0g瓊脂15.0g蒸餾水1000ml平板計(jì)數(shù)瓊脂PCA2023版和2023版胰蛋白胨5.0g酵母浸膏2.5g葡萄糖1.0g瓊脂15.0g蒸餾水1000ml培養(yǎng)基改變依據(jù)：國(guó)外食品微生物檢驗(yàn)的權(quán)威方法〔ISO、FDA、AOCAC〕均采用PCA，它的營(yíng)養(yǎng)更優(yōu)化。=3\*GB3③計(jì)數(shù)和報(bào)告-----平板和菌落選取原那么●選取每個(gè)平皿菌落數(shù)在30-300CFU之間、無(wú)蔓延菌落生長(zhǎng)的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。每個(gè)稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個(gè)平板的平均數(shù)?！裼休^大片狀生長(zhǎng)菌落的平板不易采用。●如片狀菌落缺乏平板一般，而另一半平板菌落分布均勻，可計(jì)分布均勻的一半，再乘以2。●如平板上出現(xiàn)菌落間無(wú)明顯界限的鏈狀生長(zhǎng)時(shí)，那么每條單鏈作為一個(gè)菌落計(jì)算。=4\*GB3④計(jì)數(shù)和報(bào)告-----菌落總數(shù)計(jì)算方法●如果只有一個(gè)稀釋度平板的菌落數(shù)在30-300CFU適宜范圍內(nèi)，那么計(jì)算該稀釋度兩個(gè)平板菌落平均數(shù)，再乘以稀釋倍數(shù)，作為每g〔ml〕樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。●假設(shè)有兩個(gè)連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)均在30-300CFU適宜范圍內(nèi)，按公式N=∑C/(n1+0.1n2)d計(jì)算。N:樣品中菌落數(shù)，∑C：含適宜范圍CFU的平板菌落數(shù)之和，n1：第一稀釋度〔低稀釋度〕平板個(gè)數(shù)，n2：第二稀釋度〔高稀釋度〕，d：稀釋因子〔第一稀釋度〕?！袼衅桨寰鋽?shù)均＞300，計(jì)最高稀釋度平板的平均菌落數(shù)?！袼衅桨寰鋽?shù)均＜30，計(jì)最低稀釋度平板的平均菌落數(shù)。●樣品原液和所有稀釋度平板均無(wú)菌生長(zhǎng)，以＜1乘以最低稀釋倍數(shù)計(jì)算?！袼邢♂尪绕桨寰鋽?shù)均不在20-300之間，有些＜30，有些＞300，那么最接近30-300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。=5\*GB3⑤計(jì)數(shù)和報(bào)告-----結(jié)果報(bào)告〔采取四舍五入法〕編號(hào)菌落總數(shù)報(bào)告方式單位195.596CFU/g或CFU/ml〔單位需大寫CFU〕216801700或1.7X1033均為蔓延菌落無(wú)法計(jì)數(shù)報(bào)告“菌落蔓延〞4空白對(duì)照有菌結(jié)果無(wú)效四、2023版國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的檢驗(yàn)流程檢樣25g檢樣25g〔ml〕樣品+225ml稀釋液，均質(zhì)1010倍系列稀釋選擇2-3選擇2-3個(gè)適宜稀釋度樣品均液，各取1ml分別參加無(wú)菌培養(yǎng)皿中每個(gè)培養(yǎng)皿中參加每個(gè)培養(yǎng)皿中參加15-20ml平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基，混勻。培養(yǎng)培養(yǎng)計(jì)數(shù)各平板菌落數(shù)計(jì)數(shù)各平板菌落數(shù)計(jì)算菌落總數(shù)計(jì)算菌落總數(shù)報(bào)告報(bào)告五、其他考前須知1.如樣品〔干調(diào)、面粉、脫水蔬菜〕中可能含有在瓊脂外表蔓延生長(zhǎng)的菌落，可在凝固后的瓊脂外表再覆蓋一層〔4ml〕培養(yǎng)基。這樣可以有效防止菌落蔓延的現(xiàn)象出現(xiàn)。2.稀釋液選擇磷酸鹽緩沖液：適用于偏酸或偏堿性樣品的稀釋。生理鹽水：適用于常規(guī)樣品的稀釋。3.傾注平板計(jì)數(shù)瓊脂在15-20ml，一般要求到達(dá)18ml以上，即瓊脂高度＞3mm。假設(shè)傾注的培養(yǎng)基太薄，菌需要的營(yíng)養(yǎng)成分不夠，使菌生長(zhǎng)的不完好，不便于觀察結(jié)果。4.樣品與培養(yǎng)基一定要混合均勻，建議混勻方法：上下?lián)u晃-左右搖晃-順時(shí)針搖晃-逆時(shí)針搖晃。假設(shè)混合不均勻，有的菌落會(huì)長(zhǎng)到平板邊緣，不便于觀察，影響最終結(jié)果。5.培養(yǎng)基水浴溫度和傾注溫度在46±1℃。培養(yǎng)基的冷卻方法：要在恒溫水浴鍋中通過(guò)水來(lái)冷卻；不可直接放到試驗(yàn)臺(tái)或地面上冷卻，因這樣培養(yǎng)基底部容易先凝固，傾注培養(yǎng)基時(shí)，有凝固塊到處，導(dǎo)致培養(yǎng)基有結(jié)塊，即不美觀，有影響觀察結(jié)果。6.培養(yǎng)條件：一般樣品36±1℃培養(yǎng)48±2h，水產(chǎn)品〔指原生態(tài)、未經(jīng)過(guò)加工的水產(chǎn)品原料〕，它的培養(yǎng)溫度要接近原生態(tài)的溫度，即30±1℃，培養(yǎng)72±3h。7.樣品稀釋液有時(shí)會(huì)帶有細(xì)碎的食物顆?！踩缒谭?、堅(jiān)果〕，為防止這些顆粒與菌落發(fā)生混淆，可將樣品稀釋液與PCA混合，單做培養(yǎng)，置于4℃冰箱放置同樣時(shí)間，以便在計(jì)數(shù)時(shí)作為對(duì)照?！矤I(yíng)養(yǎng)瓊脂可加紅四氮唑來(lái)區(qū)別菌和顆粒，一般不建議使用〕8.必須做空白對(duì)照：檢測(cè)培養(yǎng)基、平皿、稀釋液的無(wú)菌程度。同時(shí)，應(yīng)在工作臺(tái)內(nèi)翻開(kāi)一塊空白PCA〔其暴露時(shí)間應(yīng)與檢樣時(shí)間相當(dāng)〕，以了解樣品在檢驗(yàn)過(guò)程中有無(wú)受到來(lái)自環(huán)境的污染。GB4789.3-2023食品微生物學(xué)檢驗(yàn)大腸菌群計(jì)數(shù)一、大腸菌群定義1.定義：在一定培養(yǎng)條件下能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣的需氧和兼性厭氧革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌。2.該菌主要來(lái)源于人畜糞便，作為糞便污染指標(biāo)評(píng)價(jià)食品的衛(wèi)生狀況，推斷食品中腸道致病菌污染的可能。即大腸菌群為衛(wèi)生學(xué)指標(biāo)。3.這些細(xì)菌在生化及血清學(xué)方面并非完全一致。根據(jù)進(jìn)一步的生化鑒定試驗(yàn)，可將大腸菌群細(xì)分為大腸埃希氏菌〔俗稱大腸桿菌〕、弗氏檸檬酸桿菌、肺炎克雷伯氏菌和腸桿菌等。二、2023年國(guó)標(biāo)主要修訂內(nèi)容1.標(biāo)準(zhǔn)替代：GB4789.3-2023；GB/T4789.32-2002；SN/T0169-20232.增加檢驗(yàn)原理MPN法：是統(tǒng)計(jì)學(xué)和微生物學(xué)結(jié)合的一種定量檢測(cè)法，待測(cè)樣品經(jīng)系列稀釋并培養(yǎng)后，根據(jù)其未生長(zhǎng)的最低稀釋度與生長(zhǎng)的最高稀釋度，應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)概率論推算出待測(cè)樣品中大腸菌群的最大可能數(shù)。平板計(jì)數(shù)法：大腸菌群在固體培養(yǎng)基中發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸，在指示劑的作用下形成可計(jì)數(shù)的紅色或紫色，帶有或不帶有沉淀環(huán)的菌落。3.修改典型菌落描述：如菌落直徑較典型菌落小，為可疑菌落，也要挑取進(jìn)行驗(yàn)證。4.修改第二法平板菌落數(shù)的選擇：最低稀釋度平板低于15CFU的記錄具體菌落數(shù)。5.修改第二法驗(yàn)證試驗(yàn)：假設(shè)少于10個(gè)菌落的挑取全部典型和可疑菌落進(jìn)行驗(yàn)證。假設(shè)大于10個(gè)菌落，那么挑取10個(gè)典型和可疑菌落進(jìn)行驗(yàn)證。三、大腸菌群檢測(cè)流程●MPN法PH應(yīng)在之間，必要時(shí)可用PH應(yīng)在之間，必要時(shí)可用1mol/L的NAOH或HCL調(diào)節(jié)檢樣25g〔ml〕+225ml稀釋液，均質(zhì)10倍梯度稀釋10倍梯度稀釋選擇適宜三個(gè)連續(xù)稀釋度的稀釋液，接種到選擇適宜三個(gè)連續(xù)稀釋度的稀釋液，接種到LST肉湯中24h為預(yù)判假設(shè)產(chǎn)氣進(jìn)行驗(yàn)證；假設(shè)未產(chǎn)氣繼續(xù)培養(yǎng)至24h為預(yù)判假設(shè)產(chǎn)氣進(jìn)行驗(yàn)證；假設(shè)未產(chǎn)氣繼續(xù)培養(yǎng)至48h查看結(jié)果。BGLB肉湯產(chǎn)氣不產(chǎn)氣BGLB肉湯產(chǎn)氣不產(chǎn)氣36±1℃48±2h產(chǎn)氣不產(chǎn)氣產(chǎn)氣不產(chǎn)氣大腸菌群陽(yáng)性大腸菌群陰性大腸菌群陽(yáng)性大腸菌群陰性查MPN表，報(bào)告結(jié)果查MPN表，報(bào)告結(jié)果1.初發(fā)酵試驗(yàn)：A、月桂基硫酸鹽胰蛋白胨LST〔成分：胰蛋白胨或胰酪胨、氯化鈉、乳糖、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、月桂基硫酸鈉〕作用：=1\*GB3①胰酪胨在培養(yǎng)基中作為根底營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)提供細(xì)菌生長(zhǎng)所需的氮源、維生素、氨基酸等生長(zhǎng)因子。=2\*GB3②乳糖作為可發(fā)酵的碳源。=3\*GB3③NaCl維持體系滲透壓平衡。=4\*GB3④磷酸鹽為菌體生長(zhǎng)提供一個(gè)相對(duì)穩(wěn)定的酸堿緩沖體系。=5\*GB3⑤月桂基硫酸鈉抑制非大腸菌群類細(xì)菌的生長(zhǎng)。大腸菌群類細(xì)菌利用培養(yǎng)基中的乳糖產(chǎn)氣而與其它不產(chǎn)氣的細(xì)菌相區(qū)別。B、接種方式：1ml稀釋液+10mlLST；10ml稀釋液+10ml雙料LST。C、培養(yǎng)條件：36℃，培養(yǎng)24-48±2h。D、結(jié)果觀察：小導(dǎo)管是否產(chǎn)氣。2.復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)：A、煌綠乳糖膽鹽肉湯BGLB〔成分：蛋白胨、乳糖、牛膽粉溶液、0.1%煌綠水溶液〕的作用：=1\*GB3①蛋白胨在培養(yǎng)基中作為根底營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)提供細(xì)菌生長(zhǎng)所需的碳源、氮源。=2\*GB3②牛膽鹽和煌綠抑制革蘭氏陽(yáng)性菌及非大腸菌群的革蘭氏陰性菌的生長(zhǎng)。=3\*GB3③乳糖作為可發(fā)酵的碳水化合物。B、接種方式：1環(huán)產(chǎn)氣的LST+10mlBGLG。C、培養(yǎng)條件：36℃，48±2h。D、結(jié)果觀察：小導(dǎo)管是否產(chǎn)氣。3.結(jié)果報(bào)告表大腸菌群最可能數(shù)MPN檢索表陽(yáng)性管數(shù)MPN95%可信限陽(yáng)性管數(shù)MPN95%可信限0.100.010.001下限上限0.100.010.001下限上限000<0.3-9.5220214.5420013.00.159.6221288.7940103.00.1511222358.7940116.11.218230298.7940206.21.218231368.7940309.43.638300234.6941003.60.1718301388.71101017.21.3183026417180102113.6383104391801107.41.3203117517200111113.63831212037420120113.64231316040420121154.5423209318420130164.542321150374202009.21.43832221040430201153.642323290901000202204.542330240421000210153.742331460902000211204.54233211001804100212278.794333>1100420-注1：本表采用3個(gè)稀釋度0.1g〔ml〕、0.01g〔ml〕、0.001g〔ml〕，每個(gè)稀釋度接種3管。注2：表內(nèi)所列檢樣量如改用1g〔ml〕、0.1g〔ml〕、0.01g〔ml〕時(shí)，表內(nèi)數(shù)字應(yīng)相應(yīng)降低10倍；如改用0.01g〔ml〕、0.001g〔ml〕、0.0001g〔ml〕時(shí)，那么表內(nèi)數(shù)字應(yīng)相應(yīng)增高10倍，其余類推。根據(jù)陽(yáng)性管數(shù)的出現(xiàn)率，用概率論來(lái)推算樣品中含菌量的最近似數(shù)值。MPN檢索表只給了三個(gè)稀釋度，如改用其他稀釋度，那么表內(nèi)數(shù)字應(yīng)相應(yīng)降低或增加10倍。檢樣25g〔檢樣25g〔ml〕+225ml稀釋液，均質(zhì)需同時(shí)用生理鹽水做空白對(duì)照10倍梯度稀釋需同時(shí)用生理鹽水做空白對(duì)照10倍梯度稀釋選擇2-3選擇2-3個(gè)適宜連續(xù)稀釋度的樣品勻液，接種VRBA平板上計(jì)數(shù)典型和可疑菌落36±1℃18-24h計(jì)數(shù)典型和可疑菌落BGLB肉湯BGLB肉湯報(bào)告結(jié)果36±1℃24-48h報(bào)告結(jié)果1.培養(yǎng)基：結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂〔VRBA〕=1\*GB3①原理：乳糖作為可發(fā)酵碳源；膽鹽和結(jié)晶紫抑制革蘭氏陽(yáng)性菌生長(zhǎng)；中性紅為酸堿指示劑。=2\*GB3②大腸菌群特點(diǎn)：紫紅色菌落，周圍紅色膽鹽沉淀環(huán)，菌落直徑為0.5mm或更大。=3\*GB3③培養(yǎng)基傾注方法：每個(gè)平皿傾注15-20ml，凝固后再加3-4ml覆蓋，防止菌落蔓延生長(zhǎng)，影響結(jié)果。2.平板菌落數(shù)的選擇=1\*GB3①選取菌落數(shù)在15-150CFU之間的平板計(jì)數(shù)。=2\*GB3②分別計(jì)數(shù)平板上出現(xiàn)的典型和可疑菌落〔如菌落直徑較典型菌落小〕。=3\*GB3③最低稀釋度平板低于15CFU的記錄具體菌落數(shù)。3.驗(yàn)證試驗(yàn)=1\*GB3①?gòu)腣RBA平板上挑取10個(gè)不同類型的典型和可疑菌落，少于10個(gè)菌落的挑取全部典型和可疑菌落。=2\*GB3②移種于BGLB肉湯管，36±1℃培養(yǎng)24-48h，觀察產(chǎn)氣=3\*GB3③凡BGLB肉湯管產(chǎn)氣，即可報(bào)告為大腸菌群陽(yáng)性。4.平板計(jì)數(shù)的報(bào)告BGLB陽(yáng)性管數(shù)比例乘以計(jì)數(shù)的平板菌落數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)，即為每g〔ml〕樣品中大腸菌群數(shù)。例如：樣品稀釋度典型和可疑菌落數(shù)選取驗(yàn)證菌落BGLB陽(yáng)性管結(jié)果CFU/g(ml)10-4100106100*(6/10)*104=6.0*10510-1000<10考前須知：=1\*GB3①樣品PH調(diào)節(jié)方法：添加NaOH調(diào)節(jié)=2\*GB3②在36±1℃培養(yǎng)24-48h的意義：24h為預(yù)判，假設(shè)預(yù)判未產(chǎn)氣繼續(xù)培養(yǎng)到48h最終確定結(jié)果。=3\*GB3③假設(shè)典型菌落和可疑菌落超過(guò)10個(gè)，應(yīng)挑取10個(gè)典型和可疑菌落接種驗(yàn)證；假設(shè)少于10個(gè)菌落的那么挑取全部典型和可疑菌落接種進(jìn)行驗(yàn)證。=4\*GB3④大腸菌群類細(xì)菌可發(fā)酵乳糖產(chǎn)氣，因此主要看小導(dǎo)管產(chǎn)氣情況來(lái)確定大腸菌群。假設(shè)BGLB肉湯變成黃綠色，那么產(chǎn)酸導(dǎo)致。=4\*GB3④在乳糖發(fā)酵試驗(yàn)中，經(jīng)?？梢钥吹皆谛?dǎo)管內(nèi)有極微小的氣泡，有時(shí)可以看到沿管壁有緩緩上浮的小氣泡。如果對(duì)產(chǎn)氣不明顯的乳糖發(fā)酵現(xiàn)象有疑問(wèn)，可以輕輕拍打試管，如有氣泡沿管壁上浮，即可能有氣體產(chǎn)生。GB4789.4-2023食品微生物學(xué)檢驗(yàn)沙門氏菌檢驗(yàn)一、沙門氏菌簡(jiǎn)介1.細(xì)菌學(xué)分類：腸桿菌科沙門氏菌屬下設(shè)6個(gè)亞屬：=1\*ROMANI、=2\*ROMANII、=4\*ROMANIV、=5\*ROMANV、=6\*ROMANVI及=3\*ROMANIII〔原亞利桑那菌屬〕。2.致病性：胃腸炎、傷寒、敗血癥〔傷寒氏沙門易患敗血癥〕等人類疾病，嚴(yán)重時(shí)能導(dǎo)致死亡。3.種類：種類繁多，抗原結(jié)果復(fù)雜，在?ANTIGENICFORMULAEOFTHESALMONELLASEROVARS?(20079thedition)中已公布了2579個(gè)血清型。4.感染途徑：食物，主要是生肉和生蛋。5.生物學(xué)特征：=1\*GB3①形態(tài)特征：革蘭氏陰性、短桿菌，無(wú)芽孢，一般無(wú)莢膜；除雞沙門氏菌和雛沙門氏菌外都有周身鞭毛，運(yùn)動(dòng)力特強(qiáng)。=2\*GB3②需氧或兼性厭氧，10-42℃都可以生長(zhǎng)，最適生長(zhǎng)溫度為37℃，最適PH為。綜上所述：沙門氏