血清學鑒定實驗課件

血清學實驗

《臨床微生物學檢驗》實驗1血清學實驗

《臨床微生物學檢驗》實驗1血清學診斷：是指用已知細菌的特異性抗原檢測患者血清中相應抗體的方法，以診斷感染性疾病。（用已知抗原檢測血清中的特異性抗體）血清學鑒定：即采用含有已知特異性抗體的免疫血清（診斷血清）與分離培養(yǎng)出的未知純種細菌或標本中的抗原進行血清學反應，以確定病原菌的種或型。（用已知抗體鑒定未知的細菌或標本中的抗原）2血清學診斷：是指用已知細菌的特異性抗原檢測患者血清中相應抗體微生物抗原成分-----細菌抗原成分菌體抗原:革蘭氏陰性菌的菌體抗原稱O抗原---脂多糖蛋白質(zhì)的復合物鞭毛抗原稱為H抗原表面抗原:不同細菌的表抗原名稱不同.大腸桿菌的表面抗原稱為封套抗原或K抗原,肺炎雙球菌的叫莢膜抗原,傷寒沙門氏菌的表面抗原稱為Vi抗原3微生物抗原成分-----細菌抗原成分菌體抗原:革蘭氏陰性菌的細菌抗原細菌的各種抗原4細菌抗原細菌的各種抗原4

抗原抗體反應抗原抗體反應（antigen-antibodyreaction）是指抗原與相應抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應?？砂l(fā)生于體內(nèi)（invivo），也可發(fā)生于體外(invitro)。體內(nèi)反應可介導吞噬、溶菌、殺菌、中和毒素等作用；體外反應則根據(jù)抗原的物理性狀、抗體的類型及參與反應的介質(zhì)（例如電解質(zhì)、補體、固相載體等）不同，可出現(xiàn)凝集反應、沉淀反應、補體參與的反應及中和反應等各種不同的反應類型。因抗體主要存在于血清中，在抗原或抗體的檢測中多采用血清作試驗，所以體外抗原抗體反應亦稱為血清反應（erologicreaction）。5抗原抗體反應抗原抗體反應（antigen-antibody抗原抗體反應條件抗原抗體3.環(huán)境因素：（1）電介質(zhì)：0.85%NaCI；（2）溫度：37或56（3）pH值：7.0（4）振蕩：適當?shù)臋C械振（5）反應時間6抗原抗體反應條件抗原3.環(huán)境因素：6抗原抗體反應的特點特異性和交叉性若兩種抗原之間含有部分共同抗原時，則發(fā)生交叉反應。親緣關(guān)系越近，交叉反應的程度也越高。反應的可逆性

抗原與抗體的結(jié)合為分子表面的結(jié)合，結(jié)合的適宜溫度為0～40℃、pH在4.0～9.0范圍內(nèi)。如溫度超過60℃或pH降到3.0以下，或加入解離劑臺硫氰化鉀、尿素等，則抗原抗體復合物又可重新解離，解離后的抗原或抗體性質(zhì)不改變。7抗原抗體反應的特點特異性和交叉性7抗原抗體反應特點最適比和帶現(xiàn)象只有抗原與抗體呈適當比例時，才可出現(xiàn)可見的結(jié)合反應。當抗原過多或抗體過多，則抗原抗體的結(jié)合不能形成大的復合物，因而抑制可見反應的出現(xiàn)，這一現(xiàn)象稱為帶現(xiàn)象?？贵w過多出現(xiàn)的抑制現(xiàn)象稱前帶現(xiàn)象，而抗原過多出現(xiàn)的抑制現(xiàn)象稱后帶現(xiàn)象。為了克服帶現(xiàn)象，在進行血清學試驗時，需將抗原或抗體作適當稀釋。8抗原抗體反應特點最適比和帶現(xiàn)象8抗原抗體反應特點反應的二階段性結(jié)合階段-----反應發(fā)生快，幾秒鐘至幾分鐘。反應階段-----較慢，需幾分鐘、幾十分鐘或更長時間。9抗原抗體反應特點反應的二階段性9凝集反應顆粒性抗原（如細菌、紅血球等）或吸附在乳膠、白陶土、離子交換樹脂和紅細胞的抗原與其特異性抗體結(jié)合后，在有電介質(zhì)存在時，凝聚成肉眼可見的凝集小塊。凝集原——凝集素直接凝集反應玻片法試管法抗原抗體反應類型-----凝集反應10凝集反應顆粒性抗原（如細菌、紅血球等）或吸附在乳膠、白陶土、血清學鑒定

掌握細菌的血清學鑒定法。實驗目的11血清學鑒定掌握細菌的血清學鑒定法。實驗目的11實驗原理

根據(jù)抗原抗體反應具有高度特異性的特點，用已知抗體來檢測未知抗原（細菌）。12實驗原理根據(jù)抗原抗體反應具有高度特異實驗材料1.菌種待檢細菌2.試劑多價沙門菌O(A-F)診斷血清3.其他載玻片13實驗材料1.菌種待檢細菌13沙門氏菌診斷血清（11種）14沙門氏菌診斷血清（11種）14O抗原、H抗原和Vi抗原O抗原:是一種沙門氏菌細胞壁表面的耐熱多糖抗原，100℃，2.5h不被破壞，它的特異性依賴于細胞壁脂多糖側(cè)鏈多糖的組成。

H抗原:是一種蛋白質(zhì)性鞭毛抗原，共有63種，60℃加熱30～60min及酒精作用均可破壞其抗原性，但能抵抗甲醛。Vi抗原:是一種N-乙酰-D-半乳糖胺糖醛酸聚合物，60℃加熱1h即破壞其凝集性和免疫原性。15O抗原、H抗原和Vi抗原O抗原:是一種沙門氏菌細胞壁表面的沙門氏菌的主要抗原組成O抗原：至少58種,

含相同抗原組分歸為一組，引起人類疾病的沙門菌大多數(shù)在A~F組。H抗原：分為Ⅰ、Ⅱ相，Ⅰ相以a、b、c等表示，Ⅱ相以1、2、3等表示。Vi抗原：抗原性弱，不穩(wěn)定，可阻止O抗原與其相應抗體的凝集反應。16沙門氏菌的主要抗原組成O抗原：至少58種,含相同抗原組分歸沙門氏菌菌型的表示方法血清型以數(shù)字和字母表示.

例如:查考夫曼-懷特沙門氏菌屬抗原表.鼠傷寒沙門氏菌:O抗（1，4，[5]，12），第Ⅰ相H抗原（i）第Ⅱ相H抗原(1,2)。它的血清型應表示為:鼠傷寒沙門氏菌（1，4，[5]，12：i：1，2）[]內(nèi)的O抗原可能存在或不存在。[]內(nèi)的H抗原可能是罕見的，正常情況下一般不存在。17沙門氏菌菌型的表示方法血清型以數(shù)字和字母表示.17沙門氏菌的血清鑒定的方法用O、H和Vi因子血清與待檢的菌株作玻片凝聚試驗。1.先用O因子血清確定菌株所屬的O群及O抗原的各種成分。2.再用H因子血清檢查其第1相和第2相的H抗原以確定血清型。3.必要時還要用Vi血清檢查(目前有3種)。18沙門氏菌的血清鑒定的方法用O、H和Vi因子血清與待檢的菌株1.先用A~F多價O血清檢查，確定菌株是否在A~F六個O群的范圍內(nèi)。2.再用代表六個O群的O因子血清檢查，即O2（A）、O4（B）、O7（C1）、O8（C2）、O9（D）、O3，10（E）、O11（F）。3.確定O群之后，分別用HA(a、b、c、d、i、z10、z29）HB、HC、HD四種多價H血清檢查。4.用3.所確定的多價H血清所包括的所有H因子血清逐一檢查定為第1相或第2相H抗原。5.檢出第1相H抗原而未檢出第2相H抗原，或檢出第2相H抗原而未檢出第1相H抗原的，要用位相變異的方法再檢查其另一個相。單相菌不必作位相變異檢查。6.綜合O和H因子血清以及Vi因子血清的檢查結(jié)果，按照考夫曼-懷特沙門氏菌屬抗原表解判定沙門氏菌的菌型。沙門氏菌的血清型鑒定步驟191.先用A~F多價O血清檢查，確定菌株是否在A~F六個O群實驗方法

50ul血清+待檢菌50ulNS+待檢菌

20實驗方法50ul血清+待檢菌

先用A－F和Vi血清檢測，根據(jù)結(jié)果再進行其他鑒定。注意：21先用A－F和Vi血清檢測，根據(jù)結(jié)果再結(jié)果判斷均勻混濁顆粒狀凝集物＋－22結(jié)果判斷均勻混濁顆粒狀凝集物＋－22沙門氏菌屬國內(nèi)常見菌型診斷抗原表23沙門氏菌屬國內(nèi)常見菌型診斷抗原表23注意事項1.生理鹽水端應不出現(xiàn)凝集顆粒。2.沙門菌Vi抗原存在時可阻止O抗原與相應抗體發(fā)生凝集，故在做玻片凝集時應加注意，需事先加熱破壞Vi抗原，O抗原才得以與相應的O診斷血清發(fā)生凝集。24注意事項1.生理鹽水端應不出現(xiàn)凝集顆粒。24血清學實驗進程先鑒定A－F和Vi，根據(jù)結(jié)果再進行其他鑒定。25血清學實驗進程先鑒定A－F和Vi，根據(jù)結(jié)果再進行其他鑒定。2沙門氏菌屬常見菌型診斷抗原表26沙門氏菌屬常見菌型診斷抗原表26位相變異的解釋將一個雙相沙門氏菌的菌株在瓊脂平板上劃線分離，所得的菌落中，有的有第1相H抗原，有的則有第2相H抗原。若任意挑取一個菌落在培養(yǎng)基上多次傳代，其后代又可出現(xiàn)部分是第1相而另一部分是第2相的菌落。這種兩個相的H抗原可以交相產(chǎn)生的現(xiàn)象稱為位相變異。雙相菌初次分離時，單個菌落的純培養(yǎng)往往只有一個相H抗原，鑒別時常只能檢出一個相，而測不出另一相。此時，可用已知相血清誘導的位相變異試驗來獲得未知的另一個相H抗原。27位相變異的解釋將一個雙相沙門氏菌的菌株在瓊脂平板上劃線分離，位相變異試驗的方法簡易平板法1.配制0.7~0.8%的半固體瓊脂培養(yǎng)基，然后傾注平板烘干表面水分。2.在平板內(nèi)滴上一滴已知的第1相或第2相血清因子，并作好標記。3.待血清吸收到瓊脂內(nèi)，在標記部位的中間點種已知第1相或第2相的新鮮待檢菌株。4.培養(yǎng)后，其已知相細菌的動力受到抑制，解離出另一相的細菌，并向周圍蔓延生長，形成一個大的菌落。5.檢查其菌落的邊緣部分，即可確定該菌株的另一相H抗原。6.該方法通常1~3天內(nèi)可以有結(jié)果。28位相變異試驗的方法簡易平板法28位相變異試驗的方法U形管法小玻管法小套管法軟瓊脂斜面法29位相變異試驗的方法U形管法2959種沙門氏菌的血清列表

3059種沙門氏菌的血清列表

30血清學實驗材料分配31血清學實驗材料分配31寫實驗報告寫明實驗判定結(jié)果（即陰性或陽性），并描述整個實驗過程及注意事項。32寫實驗報告寫明實驗判定結(jié)果（即陰性或陽性），并描述整個實驗過謝謝大家！33謝謝大家！33血清學實驗

《臨床微生物學檢驗》實驗34血清學實驗

《臨床微生物學檢驗》實驗1血清學診斷：是指用已知細菌的特異性抗原檢測患者血清中相應抗體的方法，以診斷感染性疾病。（用已知抗原檢測血清中的特異性抗體）血清學鑒定：即采用含有已知特異性抗體的免疫血清（診斷血清）與分離培養(yǎng)出的未知純種細菌或標本中的抗原進行血清學反應，以確定病原菌的種或型。（用已知抗體鑒定未知的細菌或標本中的抗原）35血清學診斷：是指用已知細菌的特異性抗原檢測患者血清中相應抗體微生物抗原成分-----細菌抗原成分菌體抗原:革蘭氏陰性菌的菌體抗原稱O抗原---脂多糖蛋白質(zhì)的復合物鞭毛抗原稱為H抗原表面抗原:不同細菌的表抗原名稱不同.大腸桿菌的表面抗原稱為封套抗原或K抗原,肺炎雙球菌的叫莢膜抗原,傷寒沙門氏菌的表面抗原稱為Vi抗原36微生物抗原成分-----細菌抗原成分菌體抗原:革蘭氏陰性菌的細菌抗原細菌的各種抗原37細菌抗原細菌的各種抗原4

抗原抗體反應抗原抗體反應（antigen-antibodyreaction）是指抗原與相應抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應。可發(fā)生于體內(nèi)（invivo），也可發(fā)生于體外(invitro)。體內(nèi)反應可介導吞噬、溶菌、殺菌、中和毒素等作用；體外反應則根據(jù)抗原的物理性狀、抗體的類型及參與反應的介質(zhì)（例如電解質(zhì)、補體、固相載體等）不同，可出現(xiàn)凝集反應、沉淀反應、補體參與的反應及中和反應等各種不同的反應類型。因抗體主要存在于血清中，在抗原或抗體的檢測中多采用血清作試驗，所以體外抗原抗體反應亦稱為血清反應（erologicreaction）。38抗原抗體反應抗原抗體反應（antigen-antibody抗原抗體反應條件抗原抗體3.環(huán)境因素：（1）電介質(zhì)：0.85%NaCI；（2）溫度：37或56（3）pH值：7.0（4）振蕩：適當?shù)臋C械振（5）反應時間39抗原抗體反應條件抗原3.環(huán)境因素：6抗原抗體反應的特點特異性和交叉性若兩種抗原之間含有部分共同抗原時，則發(fā)生交叉反應。親緣關(guān)系越近，交叉反應的程度也越高。反應的可逆性

抗原與抗體的結(jié)合為分子表面的結(jié)合，結(jié)合的適宜溫度為0～40℃、pH在4.0～9.0范圍內(nèi)。如溫度超過60℃或pH降到3.0以下，或加入解離劑臺硫氰化鉀、尿素等，則抗原抗體復合物又可重新解離，解離后的抗原或抗體性質(zhì)不改變。40抗原抗體反應的特點特異性和交叉性7抗原抗體反應特點最適比和帶現(xiàn)象只有抗原與抗體呈適當比例時，才可出現(xiàn)可見的結(jié)合反應。當抗原過多或抗體過多，則抗原抗體的結(jié)合不能形成大的復合物，因而抑制可見反應的出現(xiàn)，這一現(xiàn)象稱為帶現(xiàn)象?？贵w過多出現(xiàn)的抑制現(xiàn)象稱前帶現(xiàn)象，而抗原過多出現(xiàn)的抑制現(xiàn)象稱后帶現(xiàn)象。為了克服帶現(xiàn)象，在進行血清學試驗時，需將抗原或抗體作適當稀釋。41抗原抗體反應特點最適比和帶現(xiàn)象8抗原抗體反應特點反應的二階段性結(jié)合階段-----反應發(fā)生快，幾秒鐘至幾分鐘。反應階段-----較慢，需幾分鐘、幾十分鐘或更長時間。42抗原抗體反應特點反應的二階段性9凝集反應顆粒性抗原（如細菌、紅血球等）或吸附在乳膠、白陶土、離子交換樹脂和紅細胞的抗原與其特異性抗體結(jié)合后，在有電介質(zhì)存在時，凝聚成肉眼可見的凝集小塊。凝集原——凝集素直接凝集反應玻片法試管法抗原抗體反應類型-----凝集反應43凝集反應顆粒性抗原（如細菌、紅血球等）或吸附在乳膠、白陶土、血清學鑒定

掌握細菌的血清學鑒定法。實驗目的44血清學鑒定掌握細菌的血清學鑒定法。實驗目的11實驗原理

根據(jù)抗原抗體反應具有高度特異性的特點，用已知抗體來檢測未知抗原（細菌）。45實驗原理根據(jù)抗原抗體反應具有高度特異實驗材料1.菌種待檢細菌2.試劑多價沙門菌O(A-F)診斷血清3.其他載玻片46實驗材料1.菌種待檢細菌13沙門氏菌診斷血清（11種）47沙門氏菌診斷血清（11種）14O抗原、H抗原和Vi抗原O抗原:是一種沙門氏菌細胞壁表面的耐熱多糖抗原，100℃，2.5h不被破壞，它的特異性依賴于細胞壁脂多糖側(cè)鏈多糖的組成。

H抗原:是一種蛋白質(zhì)性鞭毛抗原，共有63種，60℃加熱30～60min及酒精作用均可破壞其抗原性，但能抵抗甲醛。Vi抗原:是一種N-乙酰-D-半乳糖胺糖醛酸聚合物，60℃加熱1h即破壞其凝集性和免疫原性。48O抗原、H抗原和Vi抗原O抗原:是一種沙門氏菌細胞壁表面的沙門氏菌的主要抗原組成O抗原：至少58種,

含相同抗原組分歸為一組，引起人類疾病的沙門菌大多數(shù)在A~F組。H抗原：分為Ⅰ、Ⅱ相，Ⅰ相以a、b、c等表示，Ⅱ相以1、2、3等表示。Vi抗原：抗原性弱，不穩(wěn)定，可阻止O抗原與其相應抗體的凝集反應。49沙門氏菌的主要抗原組成O抗原：至少58種,含相同抗原組分歸沙門氏菌菌型的表示方法血清型以數(shù)字和字母表示.

例如:查考夫曼-懷特沙門氏菌屬抗原表.鼠傷寒沙門氏菌:O抗（1，4，[5]，12），第Ⅰ相H抗原（i）第Ⅱ相H抗原(1,2)。它的血清型應表示為:鼠傷寒沙門氏菌（1，4，[5]，12：i：1，2）[]內(nèi)的O抗原可能存在或不存在。[]內(nèi)的H抗原可能是罕見的，正常情況下一般不存在。50沙門氏菌菌型的表示方法血清型以數(shù)字和字母表示.17沙門氏菌的血清鑒定的方法用O、H和Vi因子血清與待檢的菌株作玻片凝聚試驗。1.先用O因子血清確定菌株所屬的O群及O抗原的各種成分。2.再用H因子血清檢查其第1相和第2相的H抗原以確定血清型。3.必要時還要用Vi血清檢查(目前有3種)。51沙門氏菌的血清鑒定的方法用O、H和Vi因子血清與待檢的菌株1.先用A~F多價O血清檢查，確定菌株是否在A~F六個O群的范圍內(nèi)。2.再用代表六個O群的O因子血清檢查，即O2（A）、O4（B）、O7（C1）、O8（C2）、O9（D）、O3，10（E）、O11（F）。3.確定O群之后，分別用HA(a、b、c、d、i、z10、z29）HB、HC、HD四種多價H血清檢查。4.用3.所確定的多價H血清所包括的所有H因子血清逐一檢查定為第1相或第2相H抗原。5.檢出第1相H抗原而未檢出第2相H抗原，或檢出第2相H抗原而未檢出第1相H抗原的，要用位相變異的方法再檢查其另一個相。單相菌不必作位相變異檢查。6.綜合O和H因子血清以及Vi因子血清的檢查結(jié)果，按照考夫曼-懷特沙門氏菌屬抗原表解判定沙門氏菌的菌型。沙門氏菌的血清型鑒定步驟521.先用A~F多價O血清檢查，確定菌株是否在A~F六個O群實驗方法

50ul血清+待檢菌50ulNS+待檢菌

53實驗方法50ul血清+待檢菌

先用A－F和Vi血清檢測，根據(jù)結(jié)果再進行其他鑒定。注意：54先用A－F和Vi血清檢測，根據(jù)結(jié)果再結(jié)果判斷均勻混濁顆粒狀凝集物＋－55結(jié)果判斷均勻混濁顆粒狀凝集物＋－22沙門氏菌屬國內(nèi)常見菌型診斷抗原表56沙門氏菌屬國內(nèi)常見菌型診斷抗原表23注意事項1.生理鹽水端應不出現(xiàn)凝集顆粒。2.沙門菌Vi抗原存在時可阻止O抗原與相應抗體發(fā)生凝集，故在