人內(nèi)皮脂肪酶ELELISA試劑盒分析方法

人皮肪（）ELISA試盒析法檢范：使目：

96T本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中內(nèi)皮脂肪酶EL）含量。實原本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人內(nèi)皮脂肪酶（EL）水平。純化的人內(nèi)皮脂肪EL包被微孔板成固相抗體被抗的微孔中依次加入內(nèi)皮脂肪再與標的內(nèi)皮脂肪酶）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原酶標抗體復合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物顯。TMB在HRP酶催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的內(nèi)皮脂肪酶EL）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波下測定吸光度OD值過準曲線計算樣品中人內(nèi)皮脂肪酶）濃度。試盒成

倍縮洗滌液

20ml×1瓶

終止液

×1瓶

酶標試劑

6ml×1瓶

標準品（1600pg/ml×

酶標包被板樣品稀釋液顯色劑A液顯色劑液

孔×8條6ml×1瓶6ml×1瓶6ml×瓶

標準品稀釋液說明書封板膜密封袋

1.5ml1瓶標要．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不馬上進行試驗，可將標本放于℃保存，但應避免反復凍2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑辣根過氧化物酶的HRP活性。操步標品的稀釋試劑盒提供原倍標準品一支戶按下列圖表在小試管中進行稀釋。800pg/ml400pg/ml200pg/ml100pg/ml

標準品標準品標準品標準品標準品

μl的倍準品加150l標品稀釋液μl的標準品加入150l標品釋液μl的標準品加入150l標品釋液μl的標準品加入150l標品釋液μl的標準品加入150l標品釋液

加樣分設空白（白對照不加樣品及酶標試劑其各步操作相同準孔、待測樣品孔標被板上標準品準確加樣μl樣品孔中先加樣品稀釋液40l，然后再加待測樣品10l樣品最終稀釋度為倍樣樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。溫育：用封板膜封板后置37溫育3鐘。配液：將30倍縮洗滌液用蒸餾水30倍釋備用洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒棄去，如此重復次，拍干。

加：每孔加入酶標試劑μl，空白孔除外。

溫育：操作同。洗滌：操作同。顯色：每孔先加入顯色劑A50l，再加入顯色劑B50μl輕輕震蕩混勻，37避光顯色15分.10.終：孔加終止液50，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色11.測：空白空調(diào)零450nm長依序測量各孔的吸光度OD值測應在加終止液后15分以內(nèi)進行。操程總：計以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品OD值標準曲線查相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與O值計算出標準曲線的直線回歸方程式樣的OD值入方程式算出樣品濃度乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。注事．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡分后方可使用，酶包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時最好

控制在鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。．請次測定的同做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣D大于標準品孔第一孔的OD值先樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（n．封膜只限一次使用，以避免交叉污染。．底物請避光保存。．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為．所有