愈傷組織的誘導繼代及分化課件

【學習目的與要求】

掌握愈傷組織的誘導與繼代培養(yǎng)、分化與植株再生的兩種發(fā)生途徑及愈傷組織形態(tài)發(fā)生的調(diào)控因素?！緦W習目的與要求】【主要內(nèi)容】第一節(jié)愈傷組織的誘導與繼代培養(yǎng)第二節(jié)愈傷組織分化與植株再生第三節(jié)愈傷組織形態(tài)發(fā)生的調(diào)控因素【主要內(nèi)容】12345蘆薈的植物組織培養(yǎng)過程12第一節(jié)愈傷組織的誘導與繼代培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)（PlantTissueCulture）：指通過無菌操作分離植物體的一部分（外植體explant），接種到培養(yǎng)基上，在人工控制的條件下進行培養(yǎng)，使其產(chǎn)生完整植株的過程。愈傷組織（Callus）：原指植物在受傷之后于傷口表面形成的一團薄壁細胞，在組培中則指人工培養(yǎng)基上由外植體長出來的一團無序生長的薄壁細胞。第一節(jié)愈傷組織的誘導與繼代培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)（PlantT一.愈傷組織形成條件

雖然如全能性所言，發(fā)育和分化過程并不導致細胞全能性的喪失。但是，在一個完整的植物中，每個分化細胞都是某個器官和組織中的一個成員，它只能在與其周圍成員相互協(xié)調(diào)和彼此制約當中，恰如其分地發(fā)揮整個植株所賦予它的一定的功能，而不具備施展其全能性的外部條件。一.愈傷組織形成條件雖然如全能性所言，發(fā)一.愈傷組織形成條件

若是一旦脫離了母體植株，擺脫了原來所受到的遺傳上的控制和生理上的制約，在一定的培養(yǎng)條件下，就會發(fā)生一種回復變化，從而失去分化狀態(tài)，變?yōu)榉稚毎?，實現(xiàn)脫分化過程。然后，這些脫分化細胞經(jīng)過連續(xù)的有絲分裂，形成愈傷組織（離體隔離）。一.愈傷組織形成條件若是一旦脫離了母體植株，

一般認為靜止細胞并未喪失其分裂潛能，只是分化過程中產(chǎn)生一類抑制劑阻礙其分裂的能力，若去除抑制物質(zhì)即可使分化的體細胞恢復分裂活力。機械損傷是引起誘導組織細胞分裂的刺激因素。一.愈傷組織形成條件一般認為靜止細胞并未喪失其分裂潛能，只是分化過程中產(chǎn)生一.愈傷組織形成條件

外植體可以是各種器官或組織，理論上講誘導愈傷組織成敗的關鍵不在于外植體，而在于培養(yǎng)條件，其中激素的成分和濃度是極為重要的因素。特別是生長素類對于細胞分裂的誘導以及其后的生長增殖，是必要的物質(zhì)。一.愈傷組織形成條件外植體可以是各種器官或組織，理論二.愈傷組織的誘導

外植體中已分化的活細胞，在外源激素的誘導下通過脫分化后形成愈傷組織，這一過程被大致劃分為三個時期（誘導期、分裂期和形成期）。二.愈傷組織的誘導外植體中已分化的活細胞，在外源激素的1.誘導期：細胞分裂的準備期接種的外植體細胞通常都是分化的成熟細胞，處于靜止狀態(tài)，細胞大小沒有多大變化，外觀無明顯特征，但在外源激素作用下，細胞內(nèi)物質(zhì)代謝活動加強，迅速進行蛋白質(zhì)和核酸等物質(zhì)的合成。王凱基等（1981）在研究離體培養(yǎng)的油橄欖莖段時發(fā)現(xiàn)，細胞內(nèi)合成代謝活躍，RNA含量迅速增加，細胞核體積明顯增大。1.誘導期：細胞分裂的準備期接種的外植體細胞通常都是分化的成2.分裂期：開始分裂到持續(xù)分裂的時期

分裂期是指細胞通過一分為二的分裂，不斷增生子細胞的過程。外植體的細胞一旦經(jīng)過誘導，其外層細胞開始迅速分裂，使細胞脫分化。分裂期主要表現(xiàn)如下：①細胞的數(shù)目迅速增加。如胡蘿卜培養(yǎng)7天后，細胞數(shù)可增加10倍。2.分裂期：開始分裂到持續(xù)分裂的時期分裂期分裂期：開始分裂到持續(xù)分裂的時期②細胞體積小，內(nèi)無液泡，細胞的核和核仁增大到最大。如同根尖和莖尖的分生組織細胞特性。③細胞中RNA含量減少，而DNA含量保持不變。④隨著細胞不斷分裂和組織生長，細胞的總干重、蛋白質(zhì)和核酸含量大大增加，新細胞壁的合成極快。分裂期：開始分裂到持續(xù)分裂的時期②細胞體積小，內(nèi)無液泡，細3.形成期：形成無序結構的愈傷組織的時期

形成期是指外植體經(jīng)過誘導期和分裂期后形成了無序結構的愈傷組織的時期。進入形成期后，細胞的平均大小相對穩(wěn)定，不再發(fā)生變化，細胞分裂由原來局限在組織外緣的平周分裂轉(zhuǎn)為組織內(nèi)部較深層局部細胞的分裂，結果形成瘤狀或片狀的擬分生組織，稱做分生組織結節(jié)。3.形成期：形成無序結構的愈傷組織的時期形形成期：形成無序結構的愈傷組織的時期

分生組織結節(jié)可以成為愈傷組織的生長中心，或者進一步分化為維管組織結節(jié)——由分生組織結節(jié)外圍的細胞作平周分裂成為形成層狀細胞，并形成了部分維管組織如管胞、纖維細胞等，但不形成維管系統(tǒng)。形成期：形成無序結構的愈傷組織的時期分生組織愈傷組織的形態(tài)特征

來自不同植物或是不同部位外植體的愈傷組織，其質(zhì)地、顏色和物理性質(zhì)差異很大。有的很緊密堅實，有的很疏松脆弱或呈膠質(zhì)狀；有的呈淡黃色，有的呈白色或淡綠色等。不同質(zhì)地、顏色的愈傷組織再分化能力不同。愈傷組織在長期的繼代培養(yǎng)中能夠形成分生組織區(qū)、管胞和色素細胞或是體細胞胚，這種能夠形成體細胞胚的愈傷叫做胚性愈傷組織。愈傷組織的形態(tài)特征來自不同植愈傷組織的誘導繼代及分化課件三.繼代培養(yǎng)

脫分化細胞不斷進行分裂形成愈傷組織，愈傷組織在培養(yǎng)基上生長一段時間以后，由于營養(yǎng)物質(zhì)枯竭，水分散失，以及代謝產(chǎn)物的積累，必須轉(zhuǎn)移到新鮮培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)。這個過程叫做繼代。通過繼代培養(yǎng)，可使愈傷組織無限期地保持在不分化的增殖狀態(tài)。

三.繼代培養(yǎng)脫分化細胞不斷進行分裂形成三.繼代培養(yǎng)

一般在愈傷組織生長至直徑2～3cm(4～6周)時將其切成小塊繼代培養(yǎng)?？梢愿鶕?jù)需要選取合適質(zhì)地、顏色的愈傷進行培養(yǎng)。繼代培養(yǎng)時應切除黑褐色的愈傷，選取生長旺盛的組織。生長旺盛的愈傷組織一般呈奶黃色或白色，有光澤，也有淡綠色或綠色的；老化的愈傷組織多轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色甚至褐色。

三.繼代培養(yǎng)一般在愈傷組織生長至直徑2～3cm第二節(jié)愈傷分化與植株再生

形態(tài)建成：外植體在適宜的培養(yǎng)條件下經(jīng)脫分化、分化或直接發(fā)育成各種形態(tài)完整的植物體的過程。在愈傷組織培養(yǎng)物中，細胞分裂常以無規(guī)則方式發(fā)生，并產(chǎn)生無明顯形態(tài)或極性的無序結構組織塊，這時雖然在愈傷組織中發(fā)生了細胞分化，形成維管化組織和瘤狀結構，但并無器官發(fā)生。若將其轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基中，即可再分化完成形態(tài)發(fā)生，再分化產(chǎn)生苗或根的分生組織，甚至胚狀體，進而使它發(fā)育成苗或完整植株。第二節(jié)愈傷分化與植株再生形態(tài)建成：外一.愈傷組織形態(tài)發(fā)生的途徑

1.器官發(fā)生方式：指細胞或愈傷組織培養(yǎng)物，通過形成不定芽再生成植株。這是細胞和組織培養(yǎng)中常見的器官發(fā)生方式。

2.胚狀體方式：指由培養(yǎng)細胞誘導分化出的胚芽、胚根、胚軸的胚狀結構，進而長成完整植株。一.愈傷組織形態(tài)發(fā)生的途徑1.器官發(fā)生方式：指細胞或愈1.器官發(fā)生與植株再生

根據(jù)起源不同器官分化發(fā)生有兩種方式：

①器官是由切下的外植體中已存在的器官原基發(fā)育而成的。

②從外植體脫分化形成愈傷，在愈傷組織上產(chǎn)生一些分生細胞團，隨后由這些分生細胞團分化成不同的器官原基。

1.器官發(fā)生與植株再生根據(jù)起源不同器官分化發(fā)生有兩種方①外植體不經(jīng)過典型的愈傷組織即可形成器官原基。這一途徑有兩種情況：一、是外植體中已存在器官原基，進一步培養(yǎng)即形成相應的組織器官進而再生植株，如莖尖、根尖分生組織培養(yǎng)。二、外植體某些部位的細胞，在重新分裂后直接形成分生細胞團，然后由分生細胞團形成器官原基。這種不經(jīng)過愈傷組織直接發(fā)生器官的途徑在以品種繁殖為目的的離體培養(yǎng)中具有重要的實踐意義。

①外植體不經(jīng)過典型的愈傷組織即可形成器官原基。這一途徑有兩種研究表明，在葉肉細胞再生植株過程中，最初分裂細胞的第一次分裂軸向是十分重要的。在不經(jīng)過愈傷組織的器官分化中，這次平周分裂既是葉肉細胞的脫分化，同時也是該細胞轉(zhuǎn)變發(fā)育方式極性的確定?，F(xiàn)在，有人把最先啟動分裂的這些細胞稱之為感受態(tài)細胞。研究表明，在葉肉細胞再生植株過程中，最初分裂細胞的第一次分裂②經(jīng)過愈傷組織再分化器官一般要經(jīng)過三個生長階段第一階段是外植體經(jīng)過誘導形成愈傷組織。第二階段是“生長中心”形成。當把愈傷組織轉(zhuǎn)移到有利于有序生長的條件下以后，首先在若干部位成叢出現(xiàn)類似形成層的細胞群，通常稱之為“生長中心”，也稱為擬分生組織，它們是愈傷組織中形成器官的部位。第三階段是器官原基及器官形成。②經(jīng)過愈傷組織再分化器官一般要經(jīng)過三個生長階段第一階段是外愈傷組織分化芽和根而再生植株的方式先形成芽，再在芽伸長后，在其莖的基部長出根而形成小植株，多數(shù)植物屬這種情況；先產(chǎn)生根，再從根的基部分化出芽而形成小植株。這種情況較難誘導芽的形成，尤其對于單子葉植物；先在愈傷組織的鄰近不同部位分別形成芽和根，然后兩者結合起來形成一株小植株，只有芽和根的微管束是相通的，才能得到成活的植株。愈傷組織分化芽和根而再生植株的方式先形成芽，再在芽伸長后，在愈傷組織的誘導繼代及分化課件花枝、果枝、和樹干花枝、果枝、和樹干香果樹簡介香果樹(Emmenopteryshenryi)又名廟瓜樹、水蘿卜，為茜草科香果樹屬的單種，屬落葉大喬木，為我國特產(chǎn)單種屬的古老珍稀瀕危樹種，屬國家二級保護植物。香果樹是細木工藝、雕刻、裝飾、建筑和家具的優(yōu)良用材，其枝皮纖維細，是供制蠟紙及人造棉的好原料。它的花大，樹姿雄偉，也是庭園觀賞樹種。香果樹簡介香果樹(Emmenopteryshenry香果樹簡介主要分布在西南地區(qū)和長江流域。香果樹的分布雖然較廣泛，但多零星分散，種群數(shù)量不多，自然條件下種子萌發(fā)率低，又由于長期以來人為的濫砍濫伐、過度放牧，使其種群分布范圍逐年縮小，種群數(shù)量日益降低，處于瀕危甚至滅絕的狀態(tài)。如何有效地挽救和保護珍稀瀕危植物香果樹是我們面臨的重要課題。香果樹簡介主要分布在西南地區(qū)和長江流域。香果樹的分布雖然較廣香果樹的莖段香果樹的根香果樹的葉柄香果樹的葉塊外植體香果樹的莖段香果樹的根香果樹的葉柄香果樹的葉塊外植體不同外植體來源形成的愈傷組織香果樹通過愈傷組織生成芽的過程不同外植體來源形成的愈傷組織香果樹通過愈傷組織生成芽的過程不同的愈傷組織再分化的情況香果樹通過愈傷組織生成芽的過程不同的愈傷組織再分化的情況香果樹通過愈傷組織生成芽的過程香果樹芽直接再生MS+6-BA2.0mg/l

圖

1MS+ZT1.0mg/l

圖3香果樹芽直接再生MS+6-BA2.0mg/lMS+ZT1.MS+6-BA1.0mg/l

圖2MS+6-BA2.0mg/l

圖1MS+6-BA1.0mg/lMS+6-BA2.0mg/l

將香果樹葉片外植體接到不同生長調(diào)節(jié)劑組合培養(yǎng)基上誘導芽直接再生，培養(yǎng)40d后再生率均達100%。葉片外植體在MS+6-BA2.0mg/l培養(yǎng)基上培養(yǎng)40d后的再生芽（芽高≥5mm）數(shù)目最多，每塊外植體平均高達15個，小于5mm的再生芽有19.67個/cm2（圖1）。香果樹芽直接再生將香果樹葉片外植體接到不同生長調(diào)節(jié)劑組合香果樹芽直接再生

其次是MS+6-BA1.0mg/l培養(yǎng)基，每塊外植體平均有12.52個（芽高≥5mm），小于5mm的再生芽有19.33個/cm2(圖2)。葉片外植體在MS+ZT1.0mg/l培養(yǎng)基上培養(yǎng)40d后的再生芽數(shù)（芽高<5mm）達到了56.67個/cm2（圖3），其次是MS+ZT2.0mg/l+KT1.0mg/l，每平方厘米外植體上平均有47.0個（芽高<5mm）。香果樹芽直接再生其次是MS+6-BA1.0香果樹生根香果樹生根香果樹移栽

當苗長到3～5cm高時，洗凈根上的培養(yǎng)基，將苗移入裝有富含有機質(zhì)、易排水、透氣性好的椰絨花盆里。然后置入人工氣候箱中培養(yǎng)，溫度25℃左右，濕度80%左右，在人工氣候箱中生長一個月后移到室外，成活率95%以上。香果樹移栽當苗長到3～5cm高時，洗凈移栽成活的香果樹的苗移栽成活的香果樹的苗離體的植物器官、組織、細胞

脫分化再分化愈傷組織根芽植物體植物組織培養(yǎng)過程【小結】離體的植物器官、組織、細胞脫分化再分化愈傷幼年細胞細胞分裂多細胞團細胞分化形態(tài)建成完整植株圖1：高等植株細胞分化示意圖成熟細胞細胞脫分化分生細胞細胞分裂多細胞團細胞再分化形態(tài)建成完整植株圖2：高等植株細胞脫分化和再分化示意圖【小結】幼年細胞細胞分裂多細胞團細胞分化形態(tài)建成完整植株圖1：高等植第三節(jié)愈傷組織形態(tài)發(fā)生的調(diào)控因素

來源于不同植物或同一種植物不同部位的愈傷組織，在顏色、結構和生長習性上都可能存在差異，其遺傳生理功能也可能或是具有胚性，或是不具胚性，在不同的實驗中由于目的的不同，對愈傷組織狀態(tài)的要求也不完全相同。第三節(jié)愈傷組織形態(tài)發(fā)生的調(diào)控因素來源于不同植物第三節(jié)愈傷組織形態(tài)發(fā)生的調(diào)控因素優(yōu)良的愈傷組織通常必須具備以下4個特性中的2-3個:⑴高度的胚性或再分化能力，以便從這些愈傷組織得到再生植物。⑵容易散碎，以便用這些愈傷組織建立優(yōu)良的懸浮系，并且在需要時能從中分離出全能性的原生質(zhì)體。⑶旺盛的自我增殖能力，以便用這些愈傷組織建立大規(guī)模的愈傷組織無性系。⑷經(jīng)過長期繼代保存而不喪失胚性，方便對它們進行各種遺傳操作。第三節(jié)愈傷組織形態(tài)發(fā)生的調(diào)控因素優(yōu)良的愈傷組織通常必須具備愈傷形態(tài)發(fā)生的主要影響因素

植物細胞和愈傷組織的形態(tài)發(fā)生，主要受外植體本身、培養(yǎng)基的理化性質(zhì)和培養(yǎng)環(huán)境條件等三大類因素的調(diào)控。愈傷形態(tài)發(fā)生的主要影響因素一.外植體類型及其生理狀態(tài)

許多研究表明，在植物組織培養(yǎng)中，外植體的基因型、組織器官來源及其生理狀態(tài)、誘導愈傷組織的條件及其繼代培養(yǎng)時間等，均對胚狀體形成及組織器官分化有十分重要的影響。一.外植體類型及其生理狀態(tài)許多研究表明，在1.植株基因型的影響

材料的基因型對胚狀體發(fā)生和愈傷組織的器官分化有決定性的影響。不同植物種的器官分化明顯不同，如煙草、胡蘿卜和矮牽牛等植物容易誘導器官形成，而禾谷類、豆類、棉花等就比較困難。

1.植株基因型的影響材料的基因型對胚狀體發(fā)生和愈傷1.植株基因型的影響

不同種植物或是同種的不同品種(種源)個體之間，其基因型存在差異，其體細胞胚胎發(fā)生能力明顯不同。如玉米的3個栽培品種的葉器官培養(yǎng)，僅有一個品種較易產(chǎn)生胚狀體；若不同品種都能獲得胚狀體，但其發(fā)生頻率有顯著的差異。1.植株基因型的影響不同種植物或是同種的不同品種2.外植體來源及其生理狀態(tài)

理論上講，植物體細胞均具有全能性，但在一些植物中，胚狀體產(chǎn)生和器官分化與離體培養(yǎng)的器官或組織密切相關。如油菜的花器官比葉、根易于分化成苗，水稻和小麥幼穗的苗分化頻率也比其他器官為高。甜菜花芽和花莖愈傷組織能分化成芽，而根切斷愈傷則不能形成芽器官。2.外植體來源及其生理狀態(tài)理論上講，植物2.外植體來源及其生理狀態(tài)

外植體的不同發(fā)育階段即生理狀態(tài)對胚狀體產(chǎn)生和器官分化也有非常明顯的影響。年齡較幼的外植體，不僅易于誘導形成愈傷組織，而且也容易誘導分化成植株。如油菜植株的自下而上的莖段的培養(yǎng)結果表明，下部莖段的器官形成頻率低，越往上部，苗的分化頻率越高。2.外植體來源及其生理狀態(tài)外植體的不同發(fā)3.愈傷組織繼代培養(yǎng)時間的影響

愈傷組織的年齡也是影響因素之一，年齡越大，當轉(zhuǎn)移至分化培養(yǎng)基上生長時，其再生植株的頻率越低。愈傷組織或懸浮培養(yǎng)物長期繼代培養(yǎng)可使其胚性逐步喪失，植株再生能力下降。因此，在組織培養(yǎng)中，要及時轉(zhuǎn)移已形成的愈傷組織進行分化培養(yǎng)，可大大提高苗的分化頻率。3.愈傷組織繼代培養(yǎng)時間的影響愈傷組織的二.培養(yǎng)基化學成分和物理性質(zhì)

植物組織培養(yǎng)基中化學成分復雜，其對形態(tài)建成的影響大體可規(guī)為生長調(diào)節(jié)物質(zhì)、無機物、有機物、附加物和天然添加物。培養(yǎng)基的物理性質(zhì)包括培養(yǎng)基狀態(tài)、培養(yǎng)基的滲透壓和pH值等。二.培養(yǎng)基化學成分和物理性質(zhì)植物組織培養(yǎng)基1.培養(yǎng)基中生長調(diào)節(jié)物質(zhì)的影響

培養(yǎng)基的各種成分和物理性質(zhì)，都對形態(tài)建成產(chǎn)生一定影響，但起決定作用的仍然是植物生長調(diào)節(jié)劑，特別是生長素和細胞分裂素的配比。細胞分裂素/生長素的比例是控制芽和根形成的重要條件之一，生長素對芽的抑制作用可為細胞分裂素所克服。細胞分裂素/生長素比例高時有利于芽形成；而這一比例低時，有利于根的形成。這樣通過變換激素的種類和濃度，即可有效地調(diào)節(jié)培養(yǎng)組織的器官分化。1.培養(yǎng)基中生長調(diào)節(jié)物質(zhì)的影響培養(yǎng)基的各

胚狀體的分化，很大程度上為愈傷組織或是懸浮細胞培養(yǎng)及繼代培養(yǎng)中生長素的延續(xù)作用所影響。2,4-D是誘導體細胞胚發(fā)生的重要激素。在模式植物胡蘿卜的體胚研究中，在含有2,4-D的MS培養(yǎng)基中可誘導愈傷組織形成，當轉(zhuǎn)移至去除2,4-D的培養(yǎng)基中，可誘導體細胞胚的形成。大多數(shù)植物的體細胞胚誘導均遵循這一模式。1.培養(yǎng)基中生長調(diào)節(jié)物質(zhì)的影響胚狀體的分化，很大程度上為愈傷組織或是2.培養(yǎng)基中無機和有機成分的影響

無機營養(yǎng)元素在植物組織培養(yǎng)中和整體植物一樣，細胞的生長也要求滿足植物生長的必要元素，若完全投入或過多或不足，也會影響細胞生長和分化。不過其影響不如激素的影響明顯。

但是各種類型的植物，器官所需要的每種元素的量，特別是大量元素是有區(qū)別的，如生根培養(yǎng)要求無機離子濃度小一些，所以常用1/2MS或White。如有些植物要求的氮，以硝酸態(tài)形式供應為佳；而有些植物要求的氮，以銨態(tài)氮的形式供應為佳。2.培養(yǎng)基中無機和有機成分的影響無機

在培養(yǎng)基中加入糖、各類B族維生素、肌醇和甘氨酸等有機成分，可以滿足愈傷組織的生長和分化的要求。各種氨基酸和嘌呤、嘧啶類物質(zhì)，可以促進器官分化。

其中酪氨酸可明顯增加煙草組織培養(yǎng)的器官形成。酰胺類往往有促進器官形成的作用。水解酪蛋白、椰子汁、麥芽汁、香蕉泥等天然復合物中含有多種氨基酸、激素類物質(zhì)，在進行器官分化培養(yǎng)時，加入一定量是有益的。2.培養(yǎng)基中無機和有機成分的影響在培養(yǎng)基中加入糖、各類B族維生素、肌醇和甘3.培養(yǎng)基物理性質(zhì)的影響

培養(yǎng)基的物理性質(zhì)（固體或液體狀態(tài)，滲透壓等）對形態(tài)發(fā)生有明顯的影響。在胡蘿卜和石刁柏的培養(yǎng)過程中，需要改變培養(yǎng)基的形式，才能順利地分化出苗。其方法是：第一階段誘導形成愈傷組織，應在固體培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)；第二階段細胞和胚狀體的增殖，需在液體培養(yǎng)基中完成；第三階段由胚狀體發(fā)育成可移植的植株，又應轉(zhuǎn)移到固體瓊脂培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)。3.培養(yǎng)基物理性質(zhì)的影響培養(yǎng)基的物理性3.培養(yǎng)基物理性質(zhì)的影響

培養(yǎng)基中的滲透壓，對細胞增殖和胚狀體的形成都有十分明顯的影響，在花藥培養(yǎng)中受到普遍的重視。如油菜花藥培養(yǎng)宜先在高糖（9-10%）培養(yǎng)基中培養(yǎng)，有利于細胞增殖和胚狀體的形成。3.培養(yǎng)基物理性質(zhì)的影響培養(yǎng)基中的滲透壓，對細胞3.培養(yǎng)基物理性質(zhì)的影響

在培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基中的pH常常隨著培養(yǎng)基中的水分喪失和養(yǎng)分消耗，會發(fā)生變化，難以保持恒定。通常把培養(yǎng)基中的pH調(diào)整到5.6-6.0的范圍內(nèi)，過高過低都會對培養(yǎng)物造成不利影響。3.培養(yǎng)基物理性質(zhì)的影響在培養(yǎng)過程中，培三.培養(yǎng)環(huán)境條件的影響

植物組織培養(yǎng)的外部環(huán)境條件包括光照、溫度、濕度和氣相條件。在這些條件中，對于器官和胚狀體形成有較大影響的主要是光和溫度。濕度和氣相條件對于離體植物材料的培養(yǎng)也有影響，但研究較少。三.培養(yǎng)環(huán)境條件的影響植物組織培養(yǎng)的外部1.光周期的影響

光周期的需要與否，根據(jù)植物種類、培養(yǎng)目的來確定。

在愈傷組織誘導階段，一般采用三種做法：全暗、周期性光照、散射性光照。如石刁柏全暗誘導愈傷組織，要比周期性光照下好得多。大豆愈傷組織誘導采用散射性光照比較好；光照對地錢干重的增加明顯地優(yōu)于黑暗培養(yǎng)。

器官發(fā)生階段，多數(shù)植物一般給予周期性光照比較好。光周期長短因植物種類而異。多數(shù)植物8-10小時黑暗為宜。如茄子、蘋果等。1.光周期的影響光周期的需要與否，根據(jù)植物種類、培養(yǎng)目2.培養(yǎng)溫度的影響

一般都采用24-28℃的恒溫條件下進行外植體的培養(yǎng)。對一般植物來講，都可較好地形成芽和根。但是很多資料表明，溫度高低對器官發(fā)生的數(shù)量和質(zhì)量仍有影響。如培養(yǎng)溫度在18℃時，對煙草組培苗形成有良好促進作用。2.培養(yǎng)溫度的影響一般都采用24-28℃2.培養(yǎng)溫度的影響

培養(yǎng)周期中的晝夜溫差。至今，多數(shù)植物離體培養(yǎng)，均采用恒溫培養(yǎng)。而國內(nèi)有關小麥、水稻花藥培養(yǎng)溫度試驗的報道認為：在誘導花形成愈傷組織時，晝夜恒溫較好，而在器官分化時，晝夜具有一定溫差比較好，分化出的小植株比較健壯。菊芋試驗也有類似的報道，在白天26℃和夜間15℃變溫條件下，能最好地促進根的形成。2.培養(yǎng)溫度的影響培養(yǎng)周期中的晝夜溫差【思考題】1.植株再生通過胚狀體與器官兩種途徑的區(qū)別與聯(lián)系?2.胚狀體和合子胚的異同點?3.植物的成熟細胞在外源激素的誘導下通過脫分化后形成愈傷組織，這一過程被大致劃分為哪幾個時期，這些時期的特點和區(qū)別?4.愈傷組織形態(tài)發(fā)生的調(diào)控因素有哪些？【思考題】1.植株再生通過胚狀體與器官兩種途徑的區(qū)別與聯(lián)系?愈傷組織的誘導繼代及分化課件【學習目的與要求】

掌握愈傷組織的誘導與繼代培養(yǎng)、分化與植株再生的兩種發(fā)生途徑及愈傷組織形態(tài)發(fā)生的調(diào)控因素?！緦W習目的與要求】【主要內(nèi)容】第一節(jié)愈傷組織的誘導與繼代培養(yǎng)第二節(jié)愈傷組織分化與植株再生第三節(jié)愈傷組織形態(tài)發(fā)生的調(diào)控因素【主要內(nèi)容】12345蘆薈的植物組織培養(yǎng)過程12第一節(jié)愈傷組織的誘導與繼代培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)（PlantTissueCulture）：指通過無菌操作分離植物體的一部分（外植體explant），接種到培養(yǎng)基上，在人工控制的條件下進行培養(yǎng)，使其產(chǎn)生完整植株的過程。愈傷組織（Callus）：原指植物在受傷之后于傷口表面形成的一團薄壁細胞，在組培中則指人工培養(yǎng)基上由外植體長出來的一團無序生長的薄壁細胞。第一節(jié)愈傷組織的誘導與繼代培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)（PlantT一.愈傷組織形成條件

雖然如全能性所言，發(fā)育和分化過程并不導致細胞全能性的喪失。但是，在一個完整的植物中，每個分化細胞都是某個器官和組織中的一個成員，它只能在與其周圍成員相互協(xié)調(diào)和彼此制約當中，恰如其分地發(fā)揮整個植株所賦予它的一定的功能，而不具備施展其全能性的外部條件。一.愈傷組織形成條件雖然如全能性所言，發(fā)一.愈傷組織形成條件

若是一旦脫離了母體植株，擺脫了原來所受到的遺傳上的控制和生理上的制約，在一定的培養(yǎng)條件下，就會發(fā)生一種回復變化，從而失去分化狀態(tài)，變?yōu)榉稚毎?，實現(xiàn)脫分化過程。然后，這些脫分化細胞經(jīng)過連續(xù)的有絲分裂，形成愈傷組織（離體隔離）。一.愈傷組織形成條件若是一旦脫離了母體植株，

一般認為靜止細胞并未喪失其分裂潛能，只是分化過程中產(chǎn)生一類抑制劑阻礙其分裂的能力，若去除抑制物質(zhì)即可使分化的體細胞恢復分裂活力。機械損傷是引起誘導組織細胞分裂的刺激因素。一.愈傷組織形成條件一般認為靜止細胞并未喪失其分裂潛能，只是分化過程中產(chǎn)生一.愈傷組織形成條件

外植體可以是各種器官或組織，理論上講誘導愈傷組織成敗的關鍵不在于外植體，而在于培養(yǎng)條件，其中激素的成分和濃度是極為重要的因素。特別是生長素類對于細胞分裂的誘導以及其后的生長增殖，是必要的物質(zhì)。一.愈傷組織形成條件外植體可以是各種器官或組織，理論二.愈傷組織的誘導

外植體中已分化的活細胞，在外源激素的誘導下通過脫分化后形成愈傷組織，這一過程被大致劃分為三個時期（誘導期、分裂期和形成期）。二.愈傷組織的誘導外植體中已分化的活細胞，在外源激素的1.誘導期：細胞分裂的準備期接種的外植體細胞通常都是分化的成熟細胞，處于靜止狀態(tài)，細胞大小沒有多大變化，外觀無明顯特征，但在外源激素作用下，細胞內(nèi)物質(zhì)代謝活動加強，迅速進行蛋白質(zhì)和核酸等物質(zhì)的合成。王凱基等（1981）在研究離體培養(yǎng)的油橄欖莖段時發(fā)現(xiàn)，細胞內(nèi)合成代謝活躍，RNA含量迅速增加，細胞核體積明顯增大。1.誘導期：細胞分裂的準備期接種的外植體細胞通常都是分化的成2.分裂期：開始分裂到持續(xù)分裂的時期

分裂期是指細胞通過一分為二的分裂，不斷增生子細胞的過程。外植體的細胞一旦經(jīng)過誘導，其外層細胞開始迅速分裂，使細胞脫分化。分裂期主要表現(xiàn)如下：①細胞的數(shù)目迅速增加。如胡蘿卜培養(yǎng)7天后，細胞數(shù)可增加10倍。2.分裂期：開始分裂到持續(xù)分裂的時期分裂期分裂期：開始分裂到持續(xù)分裂的時期②細胞體積小，內(nèi)無液泡，細胞的核和核仁增大到最大。如同根尖和莖尖的分生組織細胞特性。③細胞中RNA含量減少，而DNA含量保持不變。④隨著細胞不斷分裂和組織生長，細胞的總干重、蛋白質(zhì)和核酸含量大大增加，新細胞壁的合成極快。分裂期：開始分裂到持續(xù)分裂的時期②細胞體積小，內(nèi)無液泡，細3.形成期：形成無序結構的愈傷組織的時期

形成期是指外植體經(jīng)過誘導期和分裂期后形成了無序結構的愈傷組織的時期。進入形成期后，細胞的平均大小相對穩(wěn)定，不再發(fā)生變化，細胞分裂由原來局限在組織外緣的平周分裂轉(zhuǎn)為組織內(nèi)部較深層局部細胞的分裂，結果形成瘤狀或片狀的擬分生組織，稱做分生組織結節(jié)。3.形成期：形成無序結構的愈傷組織的時期形形成期：形成無序結構的愈傷組織的時期

分生組織結節(jié)可以成為愈傷組織的生長中心，或者進一步分化為維管組織結節(jié)——由分生組織結節(jié)外圍的細胞作平周分裂成為形成層狀細胞，并形成了部分維管組織如管胞、纖維細胞等，但不形成維管系統(tǒng)。形成期：形成無序結構的愈傷組織的時期分生組織愈傷組織的形態(tài)特征

來自不同植物或是不同部位外植體的愈傷組織，其質(zhì)地、顏色和物理性質(zhì)差異很大。有的很緊密堅實，有的很疏松脆弱或呈膠質(zhì)狀；有的呈淡黃色，有的呈白色或淡綠色等。不同質(zhì)地、顏色的愈傷組織再分化能力不同。愈傷組織在長期的繼代培養(yǎng)中能夠形成分生組織區(qū)、管胞和色素細胞或是體細胞胚，這種能夠形成體細胞胚的愈傷叫做胚性愈傷組織。愈傷組織的形態(tài)特征來自不同植愈傷組織的誘導繼代及分化課件三.繼代培養(yǎng)

脫分化細胞不斷進行分裂形成愈傷組織，愈傷組織在培養(yǎng)基上生長一段時間以后，由于營養(yǎng)物質(zhì)枯竭，水分散失，以及代謝產(chǎn)物的積累，必須轉(zhuǎn)移到新鮮培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)。這個過程叫做繼代。通過繼代培養(yǎng)，可使愈傷組織無限期地保持在不分化的增殖狀態(tài)。

三.繼代培養(yǎng)脫分化細胞不斷進行分裂形成三.繼代培養(yǎng)

一般在愈傷組織生長至直徑2～3cm(4～6周)時將其切成小塊繼代培養(yǎng)?？梢愿鶕?jù)需要選取合適質(zhì)地、顏色的愈傷進行培養(yǎng)。繼代培養(yǎng)時應切除黑褐色的愈傷，選取生長旺盛的組織。生長旺盛的愈傷組織一般呈奶黃色或白色，有光澤，也有淡綠色或綠色的；老化的愈傷組織多轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色甚至褐色。

三.繼代培養(yǎng)一般在愈傷組織生長至直徑2～3cm第二節(jié)愈傷分化與植株再生

形態(tài)建成：外植體在適宜的培養(yǎng)條件下經(jīng)脫分化、分化或直接發(fā)育成各種形態(tài)完整的植物體的過程。在愈傷組織培養(yǎng)物中，細胞分裂常以無規(guī)則方式發(fā)生，并產(chǎn)生無明顯形態(tài)或極性的無序結構組織塊，這時雖然在愈傷組織中發(fā)生了細胞分化，形成維管化組織和瘤狀結構，但并無器官發(fā)生。若將其轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基中，即可再分化完成形態(tài)發(fā)生，再分化產(chǎn)生苗或根的分生組織，甚至胚狀體，進而使它發(fā)育成苗或完整植株。第二節(jié)愈傷分化與植株再生形態(tài)建成：外一.愈傷組織形態(tài)發(fā)生的途徑

1.器官發(fā)生方式：指細胞或愈傷組織培養(yǎng)物，通過形成不定芽再生成植株。這是細胞和組織培養(yǎng)中常見的器官發(fā)生方式。

2.胚狀體方式：指由培養(yǎng)細胞誘導分化出的胚芽、胚根、胚軸的胚狀結構，進而長成完整植株。一.愈傷組織形態(tài)發(fā)生的途徑1.器官發(fā)生方式：指細胞或愈1.器官發(fā)生與植株再生

根據(jù)起源不同器官分化發(fā)生有兩種方式：

①器官是由切下的外植體中已存在的器官原基發(fā)育而成的。

②從外植體脫分化形成愈傷，在愈傷組織上產(chǎn)生一些分生細胞團，隨后由這些分生細胞團分化成不同的器官原基。

1.器官發(fā)生與植株再生根據(jù)起源不同器官分化發(fā)生有兩種方①外植體不經(jīng)過典型的愈傷組織即可形成器官原基。這一途徑有兩種情況：一、是外植體中已存在器官原基，進一步培養(yǎng)即形成相應的組織器官進而再生植株，如莖尖、根尖分生組織培養(yǎng)。二、外植體某些部位的細胞，在重新分裂后直接形成分生細胞團，然后由分生細胞團形成器官原基。這種不經(jīng)過愈傷組織直接發(fā)生器官的途徑在以品種繁殖為目的的離體培養(yǎng)中具有重要的實踐意義。

①外植體不經(jīng)過典型的愈傷組織即可形成器官原基。這一途徑有兩種研究表明，在葉肉細胞再生植株過程中，最初分裂細胞的第一次分裂軸向是十分重要的。在不經(jīng)過愈傷組織的器官分化中，這次平周分裂既是葉肉細胞的脫分化，同時也是該細胞轉(zhuǎn)變發(fā)育方式極性的確定。現(xiàn)在，有人把最先啟動分裂的這些細胞稱之為感受態(tài)細胞。研究表明，在葉肉細胞再生植株過程中，最初分裂細胞的第一次分裂②經(jīng)過愈傷組織再分化器官一般要經(jīng)過三個生長階段第一階段是外植體經(jīng)過誘導形成愈傷組織。第二階段是“生長中心”形成。當把愈傷組織轉(zhuǎn)移到有利于有序生長的條件下以后，首先在若干部位成叢出現(xiàn)類似形成層的細胞群，通常稱之為“生長中心”，也稱為擬分生組織，它們是愈傷組織中形成器官的部位。第三階段是器官原基及器官形成。②經(jīng)過愈傷組織再分化器官一般要經(jīng)過三個生長階段第一階段是外愈傷組織分化芽和根而再生植株的方式先形成芽，再在芽伸長后，在其莖的基部長出根而形成小植株，多數(shù)植物屬這種情況；先產(chǎn)生根，再從根的基部分化出芽而形成小植株。這種情況較難誘導芽的形成，尤其對于單子葉植物；先在愈傷組織的鄰近不同部位分別形成芽和根，然后兩者結合起來形成一株小植株，只有芽和根的微管束是相通的，才能得到成活的植株。愈傷組織分化芽和根而再生植株的方式先形成芽，再在芽伸長后，在愈傷組織的誘導繼代及分化課件花枝、果枝、和樹干花枝、果枝、和樹干香果樹簡介香果樹(Emmenopteryshenryi)又名廟瓜樹、水蘿卜，為茜草科香果樹屬的單種，屬落葉大喬木，為我國特產(chǎn)單種屬的古老珍稀瀕危樹種，屬國家二級保護植物。香果樹是細木工藝、雕刻、裝飾、建筑和家具的優(yōu)良用材，其枝皮纖維細，是供制蠟紙及人造棉的好原料。它的花大，樹姿雄偉，也是庭園觀賞樹種。香果樹簡介香果樹(Emmenopteryshenry香果樹簡介主要分布在西南地區(qū)和長江流域。香果樹的分布雖然較廣泛，但多零星分散，種群數(shù)量不多，自然條件下種子萌發(fā)率低，又由于長期以來人為的濫砍濫伐、過度放牧，使其種群分布范圍逐年縮小，種群數(shù)量日益降低，處于瀕危甚至滅絕的狀態(tài)。如何有效地挽救和保護珍稀瀕危植物香果樹是我們面臨的重要課題。香果樹簡介主要分布在西南地區(qū)和長江流域。香果樹的分布雖然較廣香果樹的莖段香果樹的根香果樹的葉柄香果樹的葉塊外植體香果樹的莖段香果樹的根香果樹的葉柄香果樹的葉塊外植體不同外植體來源形成的愈傷組織香果樹通過愈傷組織生成芽的過程不同外植體來源形成的愈傷組織香果樹通過愈傷組織生成芽的過程不同的愈傷組織再分化的情況香果樹通過愈傷組織生成芽的過程不同的愈傷組織再分化的情況香果樹通過愈傷組織生成芽的過程香果樹芽直接再生MS+6-BA2.0mg/l

圖

1MS+ZT1.0mg/l

圖3香果樹芽直接再生MS+6-BA2.0mg/lMS+ZT1.MS+6-BA1.0mg/l

圖2MS+6-BA2.0mg/l

圖1MS+6-BA1.0mg/lMS+6-BA2.0mg/l

將香果樹葉片外植體接到不同生長調(diào)節(jié)劑組合培養(yǎng)基上誘導芽直接再生，培養(yǎng)40d后再生率均達100%。葉片外植體在MS+6-BA2.0mg/l培養(yǎng)基上培養(yǎng)40d后的再生芽（芽高≥5mm）數(shù)目最多，每塊外植體平均高達15個，小于5mm的再生芽有19.67個/cm2（圖1）。香果樹芽直接再生將香果樹葉片外植體接到不同生長調(diào)節(jié)劑組合香果樹芽直接再生

其次是MS+6-BA1.0mg/l培養(yǎng)基，每塊外植體平均有12.52個（芽高≥5mm），小于5mm的再生芽有19.33個/cm2(圖2)。葉片外植體在MS+ZT1.0mg/l培養(yǎng)基上培養(yǎng)40d后的再生芽數(shù)（芽高<5mm）達到了56.67個/cm2（圖3），其次是MS+ZT2.0mg/l+KT1.0mg/l，每平方厘米外植體上平均有47.0個（芽高<5mm）。香果樹芽直接再生其次是MS+6-BA1.0香果樹生根香果樹生根香果樹移栽

當苗長到3～5cm高時，洗凈根上的培養(yǎng)基，將苗移入裝有富含有機質(zhì)、易排水、透氣性好的椰絨花盆里。然后置入人工氣候箱中培養(yǎng)，溫度25℃左右，濕度80%左右，在人工氣候箱中生長一個月后移到室外，成活率95%以上。香果樹移栽當苗長到3～5cm高時，洗凈移栽成活的香果樹的苗移栽成活的香果樹的苗離體的植物器官、組織、細胞

脫分化再分化愈傷組織根芽植物體植物組織培養(yǎng)過程【小結】離體的植物器官、組織、細胞脫分化再分化愈傷幼年細胞細胞分裂多細胞團細胞分化形態(tài)建成完整植株圖1：高等植株細胞分化示意圖成熟細胞細胞脫分化分生細胞細胞分裂多細胞團細胞再分化形態(tài)建成完整植株圖2：高等植株細胞脫分化和再分化示意圖【小結】幼年細胞細胞分裂多細胞團細胞分化形態(tài)建成完整植株圖1：高等植第三節(jié)愈傷組織形態(tài)發(fā)生的調(diào)控因素

來源于不同植物或同一種植物不同部位的愈傷組織，在顏色、結構和生長習性上都可能存在差異，其遺傳生理功能也可能或是具有胚性，或是不具胚性，在不同的實驗中由于目的的不同，對愈傷組織狀態(tài)的要求也不完全相同。第三節(jié)愈傷組織形態(tài)發(fā)生的調(diào)控因素來源于不同植物第三節(jié)愈傷組織形態(tài)發(fā)生的調(diào)控因素優(yōu)良的愈傷組織通常必須具備以下4個特性中的2-3個:⑴高度的胚性或再分化能力，以便從這些愈傷組織得到再生植物。⑵容易散碎，以便用這些愈傷組織建立優(yōu)良的懸浮系，并且在需要時能從中分離出全能性的原生質(zhì)體。⑶旺盛的自我增殖能力，以便用這些愈傷組織建立大規(guī)模的愈傷組織無性系。⑷經(jīng)過長期繼代保存而不喪失胚性，方便對它們進行各種遺傳操作。第三節(jié)愈傷組織形態(tài)發(fā)生的調(diào)控因素優(yōu)良的愈傷組織通常必須具備愈傷形態(tài)發(fā)生的主要影響因素

植物細胞和愈傷組織的形態(tài)發(fā)生，主要受外植體本身、培養(yǎng)基的理化性質(zhì)和培養(yǎng)環(huán)境條件等三大類因素的調(diào)控。愈傷形態(tài)發(fā)生的主要影響因素一.外植體類型及其生理狀態(tài)

許多研究表明，在植物組織培養(yǎng)中，外植體的基因型、組織器官來源及其生理狀態(tài)、誘導愈傷組織的條件及其繼代培養(yǎng)時間等，均對胚狀體形成及組織器官分化有十分重要的影響。一.外植體類型及其生理狀態(tài)許多研究表明，在1.植株基因型的影響

材料的基因型對胚狀體發(fā)生和愈傷組織的器官分化有決定性的影響。不同植物種的器官分化明顯不同，如煙草、胡蘿卜和矮牽牛等植物容易誘導器官形成，而禾谷類、豆類、棉花等就比較困難。

1.植株基因型的影響材料的基因型對胚狀體發(fā)生和愈傷1.植株基因型的影響

不同種植物或是同種的不同品種(種源)個體之間，其基因型存在差異，其體細胞胚胎發(fā)生能力明顯不同。如玉米的3個栽培品種的葉器官培養(yǎng)，僅有一個品種較易產(chǎn)生胚狀體；若不同品種都能獲得胚狀體，但其發(fā)生頻率有顯著的差異。1.植株基因型的影響不同種植物或是同種的不同品種2.外植體來源及其生理狀態(tài)

理論上講，植物體細胞均具有全能性，但在一些植物中，胚狀體產(chǎn)生和器官分化與離體培養(yǎng)的器官或組織密切相關。如油菜的花器官比葉、根易于分化成苗，水稻和小麥幼穗的苗分化頻率也比其他器官為高。甜菜花芽和花莖愈傷組織能分化成芽，而根切斷愈傷則不能形成芽器官。2.外植體來源及其生理狀態(tài)理論上講，植物2.外植體來源及其生理狀態(tài)

外植體的不同發(fā)育階段即生理狀態(tài)對胚狀體產(chǎn)生和器官分化也有非常明顯的影響。年齡較幼的外植體，不僅易于誘導形成愈傷組織，而且也容易誘導分化成植株。如油菜植株的自下而上的莖段的培養(yǎng)結果表明，下部莖段的器官形成頻率低，越往上部，苗的分化頻率越高。2.外植體來源及其生理狀態(tài)外植體的不同發(fā)3.愈傷組織繼代培養(yǎng)時間的影響

愈傷組織的年齡也是影響因素之一，年齡越大，當轉(zhuǎn)移至分化培養(yǎng)基上生長時，其再生植株的頻率越低。愈傷組織或懸浮培養(yǎng)物長期繼代培養(yǎng)可使其胚性逐步喪失，植株再生能力下降。因此，在組織培養(yǎng)中，要及時轉(zhuǎn)移已形成的愈傷組織進行分化培養(yǎng)，可大大提高苗的分化頻率。3.愈傷組織繼代培養(yǎng)時間的影響愈傷組織的二.培養(yǎng)基化學成分和物理性質(zhì)

植物組織培養(yǎng)基中化學成分復雜，其對形態(tài)建成的影響大體可規(guī)為生長調(diào)節(jié)物質(zhì)、無機物、有機物、附加物和天然添加物。培養(yǎng)基的物理性質(zhì)包括培養(yǎng)基狀態(tài)、培養(yǎng)基的滲透壓和pH值等。二.培養(yǎng)基化學成分和物理性質(zhì)植物組織培養(yǎng)基1.培養(yǎng)基中生長調(diào)節(jié)物質(zhì)的影響

培養(yǎng)基的各種成分和物理性質(zhì)，都對形態(tài)建成產(chǎn)生一定影響，但起決定作用的仍然是植物生長調(diào)節(jié)劑，特別是生長素和細胞分裂素的配比。細胞分裂素/生長素的比例是控制芽和根形成的重要條件之一，生長素對芽的抑制作用可為細胞分裂素所克服。細胞分裂素/生長素比例高時有利于芽形成；而這一比例低時，有利于根的形成。這樣通過變換激素的種類和濃度，即可有效地調(diào)節(jié)培養(yǎng)組織的器官分化。1.培養(yǎng)基中生長調(diào)節(jié)物質(zhì)的影響培養(yǎng)基的各

胚狀體的分化，很大程度上為愈傷組織或是懸浮細胞培養(yǎng)及繼代培養(yǎng)中生長素的延續(xù)作用所影響。2,4-D是誘導體細胞胚發(fā)生的重要激素。在模式植物胡蘿卜的體胚研究中，在含有2,4-D的MS培養(yǎng)基中可誘導愈傷組織形成，當轉(zhuǎn)移至去除2,4-D的培養(yǎng)基中，可誘導體細胞胚的形成。大多數(shù)植物的體細胞胚誘導均遵循這一模式。1.培養(yǎng)基中生長調(diào)節(jié)物質(zhì)的影響胚狀體的分化，很大程度上為愈傷組織或是2.培養(yǎng)基中無機