自身免疫性疾病的免疫學檢驗課件

第十五章

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概述

1自身免疫性疾病的免疫學檢查

2自身抗體的檢測實驗選擇的原則

3小結4

自身耐受(self-tolerance)

：正常情況下，免疫系統(tǒng)對宿主自身的組織和細胞不產生免疫應答。自身免疫

(autoimmunity)：當某種原因使自身耐受

性破壞時，免疫系統(tǒng)就會對自身組織成分、細胞成分及其產物發(fā)生免疫應答。第一節(jié)概述一、自身免疫病與風濕性疾病

風濕性疾?。╮heumaticdiseases）泛指影響骨、關節(jié)及周圍軟組織等一組疾病，簡稱風濕病。結締組織病(connectivetissuedisease,CTD)

是指病變主要發(fā)生于結締組織，有組織黏液樣水腫、纖維蛋白樣變性及壞死性血管炎等基本病理變化的一組疾病。以往所指的結締組織病或膠原病是風濕性疾病的一部分，它們和風濕性疾病不可完全等同。

1.發(fā)生與感染、遺傳、性激素等因素有關，屬AID；2.結締組織及血管的慢性炎癥為其基本病理變化；3.病變可累及多系統(tǒng)、多器官；發(fā)病情況差異大，為異質性疾?。?.以關節(jié)、肌肉、軟組織等疼痛為主要癥狀；6.血清中可查出多種自身抗體；7.對糖皮質激素及免疫抑制劑藥物治療有療效；8.病程慢性、反復、進行性，最終可導致殘疾或死亡。風濕病的臨床特點二、自身免疫病的共同特征血中測到高效價的自身抗體/自身應答性T淋巴細胞自身抗體/自身應答性T淋巴細胞作用于表達自身抗原的組織細胞，造成其損傷或功能障礙動物實驗可復制與AID相似的動物模型，并能通過血清或致敏的淋巴細胞可使疾病被動轉移大多數(shù)自身免疫病是自發(fā)性或特發(fā)性的，外因可有一定影響

，病情的轉歸與自身免疫應答強度相關有遺傳傾向，反復發(fā)作和慢性遷延，部分自身免疫性疾病易發(fā)于女性，應用免疫抑制劑治療有效

器官特異性病名自身抗原橋本甲狀腺炎甲狀腺球蛋白和甲狀腺微粒體甲狀腺功能亢進(Graves病)TSH受體Addison病腎上腺皮質細胞自身免疫性萎縮性胃炎胃壁細胞、內因子潰瘍性結腸炎結腸黏膜細胞重癥肌無力乙酰膽堿受體交感性眼炎眼晶狀體蛋白胰島素依賴型糖尿病胰島β細胞胰島素抵抗型糖尿病胰島素受體原發(fā)性膽汁性肝硬化小膽管上皮細胞器官特異性和器官非特異性的特征性區(qū)別器官特異性器官非特異性自身抗體和病變具器官特異性自身抗體和病變無器官特異性極少量自身抗原與淋巴樣系統(tǒng)接觸大量自身抗原進入免疫系統(tǒng)實質病變可能由Ⅳ變態(tài)反應或自身抗體所致病變由抗原抗體復合物所致治療原則為控制代謝缺陷治療原則為抑制炎癥和抗體形成有發(fā)生器官內癌癥的傾向有發(fā)生淋巴網狀內皮細胞腫瘤的傾向抗原與弗氏佐劑共同免疫動物可誘導產生器官特異性抗體動物被刺激后不產生抗體（一）自身抗原形成分子模擬四、自身免疫病的發(fā)病機制隱蔽抗原的釋放自身抗原改變多克隆激活（二）免疫系統(tǒng)發(fā)育和免疫調節(jié)異常胸腺骨髓功能異常Th1和Th2細胞功能失衡（三）遺傳因素1.自身抗體的作用

（四）AID的病理損傷機制抗血細胞表面抗原的抗體抗細胞表面受體抗體毒性彌漫性甲狀腺腫（Graves病）發(fā)病機制示意圖自身抗體——抗核抗體腎小球、關節(jié)、皮膚和其它多種器官的毛細血管壁結合循環(huán)中的核抗原

多部位脈管炎

系統(tǒng)性紅斑狼瘡形成可溶性抗原—抗體IC

反復沉積1.自身抗體的作用：

自身抗體與相應抗原形成的免疫復合物

抗核抗體（antinuclearantibody，ANA):

是以真核細胞的核成分為靶抗原的自身抗體的總稱；在某些因素作用下改變細胞核某些成分性質，激發(fā)機體產生許多抗不同核成分的抗體；第二節(jié)自身免疫性疾病的免疫學檢查一、抗核抗體測定ANA主要是IgG，也有IgM、IgA、IgD和IgE；ANA無器官特異性和種屬特異性；ANA主要存在于血清中；將檢出ANA作為AID存在的依據。①抗天然DNA(nativeDNA,nDNA)抗體，又稱抗雙鏈DNA(doublestrandedDNA,dsDNA)

抗體。②抗變性DNA(denaturedDNA,dDNA)

抗體，又稱抗單鏈DNA(singlestrandedDNA,ssDNA)抗體。對SLE有高特異性;SLE診斷標準之一。緩解期降低70%～90%SLE活動期增高藥物療效抗dsDNA抗體抗DNA抗體

抗組蛋白抗體（anti-histonicantibody,AHA）：由H1、H2A、H2B、H3和H4五個亞單位，各自都有特異性抗體；AHA檢出百分率抗dsDNA507090100藥物誘導性狼瘡只能檢出此SLEAHAAHA抗組蛋白抗體

可提取性核抗原(extractablenuclearantigen,ENA)

是鹽水可提取性核抗原的總稱，是非組蛋白的核蛋白，屬酸性核蛋白抗原，由許多小分子量的RNA和多肽組成?？笶NA抗體抗DNP抗體（抗核蛋白抗體）：核蛋白(DNP)抗原由DNA和蛋白質組成。DNP抗原有不溶性和可溶性兩種，可分別產生相應的抗體。檢出百分率抗DNP20406080SLE非活動期

SLE活動期抗不溶性DNP抗體抗DNP抗DNP100RA滑膜液中抗DNP抗可溶性DNP抗體抗DNP抗體

抗核小體抗體（anti-nucleosomeantibody，AnuA)

是細胞核染色質的基本單位;

細胞凋亡而致核小體大量蓄積，誘導B細胞產生的AnuA是SLE

特異性的標志抗體?？筪sDNA抗體抗核小體抗體抗dsDNA和抗Sm陰性的SLE陽性率為60%～80%，特異性＞97%?？购诵◇w抗體

常見AID的ANA陽性檢出率疾病ANA（%）疾病ANA（%）SLE≥95SS70～80MCTD≥95PM/DM30PSS85～95RA20～30（二）ANA的檢測方法

將患者血清先進行稀釋，可以做定量試驗，在1:80稀釋仍呈陽性時，對SLE的診斷有較大的參考價值。形成胞核基質—ANA—抗人Ig·FITC1.熒光免疫法抗核抗體核型與相關疾病核型熒光圖形抗體相關疾病周邊型核周環(huán)狀熒光抗dsDNASLE、慢活肝炎均質型核呈均質熒光抗DNA、AHA、AnuASLE、RA、PSS、慢性肝病斑點型核內顆粒狀熒光抗ENAMCTD、SLE、PSS、SS、PM核仁型核仁有熒光抗核仁抗體PSS、雷諾現(xiàn)象、SLE著絲點型核漿細小相同顆粒熒光抗著絲點PSS、CREST綜合征均質型抗核抗體核型著絲點型核仁型斑點型例：間接免疫熒光法（IIF法）測定抗dsDNA抗體

短膜蟲的動基體內含有大量純的

dsDNA，無其他抗原干擾，可用作基質來測定抗dsDNA抗體。短膜蟲替換小鼠肝切片或肝印片或

Hep2，制成抗原基質—抗dsDNA—抗人IgG·FITC,

陽性結果可見鞭毛一端的動基體顯示清晰的熒光。測定抗dsDNA抗體具有特異性強、敏感性高的優(yōu)點。

用ELISA間接法檢測抗dsDNA抗體、抗組蛋白抗體和抗核小體抗體。2.ELISA法SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳待檢血清按分子大小分開不同區(qū)帶

分離轉印NC膜上抗ENA與膜上相應抗原帶結合抗人IgG·HRPNC—ENA—抗ENA—抗人IgG·HRP—顯色3.IBT法

類風濕因子(rheumatoidfactor,RF):

是抗變性IgG的自身抗體，為19S的IgM，也可見7S的IgG和IgA。與人變性IgG結合，不與正常IgG發(fā)生凝集反應。

RF出現(xiàn)在類風濕性關節(jié)炎（RA）患者中，約70%～

90%的血清中和約60%的滑膜液中可檢出IgG類RF；二、類風濕因子測定IgG類抗體與相應抗原結合后，即發(fā)生變性；在炎癥過程中也可發(fā)生IgG變性，構成自身抗原，刺激免疫系統(tǒng)產生各種抗IgG抗體；滑膜液中的IgG類RF與變性IgG結合形成中等大小的IC，比血清中IgM類RF更易致病。（一）RF檢測方法1

RF檢測最常采用的試驗方法。

將IgG吸附在聚苯乙烯膠乳顆粒上作為診斷試劑，與待檢血清中的RF結合，出現(xiàn)膠乳凝集顆粒。但此法的靈敏度和特異性均不高，而且只能檢出血清中的IgM類RF。間接膠乳凝集試驗2

將待檢血清稀釋成一定濃度，再加入定量變性IgG診斷試劑，立即用透射比濁或速率散射比濁儀測定血清中的RF。此法具有速度快、敏感性高（達ng/L水平）、精密度高（CV<5%）、穩(wěn)定性好、能定量分析的優(yōu)點，但仍局限在IgM類RF的檢測。

免疫比濁法3IgM、IgG和IgA類RF需要用RIA法或ELISA法等方法檢測，但前者有放射性污染，故臨床上多采用ELISA間接法或雙抗原夾心法進行測定。ELISA法（二）臨床應用常見AID的RF陽性檢出率疾病RF（%）疾病RF（%）干燥綜合征95結節(jié)性多動脈炎50類風濕70～90系統(tǒng)性紅斑狼瘡30硬皮病/皮肌炎80混合性結締組織病25RF在診斷RA患者時并非特異的，也非唯一標準。慢性活動性肝炎及老年人均可有不同程度的陽性率。三、其他自身抗體測定自身抗體的類型、檢測方法及臨床意義自身抗體類型檢測方法臨床意義抗甲狀腺球蛋白抗體(A-TG)熒光免疫法、ELISA、RIA橋本甲狀腺炎抗甲狀腺過氧化物酶抗體,)ELISAGraves

病,橋本甲狀腺炎抗乙酰膽堿受體抗體(AchR-Ab)ELISA、RIA重癥肌無力抗平滑肌抗體(SMA)熒光免疫法、ELISA、RIA自身免疫性肝炎,慢性活動性肝炎,原發(fā)性膽汁性肝硬化抗線粒體抗體(AMA)熒光免疫法、ELISA、RIARA,SS,SLE,原發(fā)性膽汁性肝硬化,慢性活動性肝炎,持續(xù)性肝阻塞抗胃壁細胞抗體熒光免疫法惡性貧血抗胰島素抗體（IAA）ELISA胰島素依賴性糖尿病抗精子抗體（AsAb）ELISA、熒光免疫法不育癥,不孕癥抗紅細胞抗體直接凝集試驗、Coombs試驗新生兒溶血,自身免疫性溶血性貧血抗血小板抗體ELISA法、ABC-ELISA法原發(fā)性血小板減少性紫癜、輸血史抗心磷脂抗體（ACA）RIA、ELISASLE,血栓,自發(fā)性流產,血小板減少抗腎小球基底膜抗體(GBM-Ab)熒光免疫法Goodpasture綜合征,狼瘡腎炎返回章目錄1.篩選試驗與確診性試驗的合理組合；2.結合臨床癥狀選擇性檢測相關的自身抗體；3.切忌盲目的全面檢測自身抗體。4.通常以抗核抗體作為篩選試驗，ANA在許多AID中可呈陽性。5.ANA陽性時，再進行針對特異性靶抗原成分的自身抗體的檢測，達到明確診斷的目的。第三節(jié)自身抗體的檢測實驗選擇的原則一、自身抗體檢測的一般原則二、實驗室方法的選擇及結果的確認IIF法篩選試驗

ANA抗dsDNAIB法ELISA法IFA法特異性實驗抗原基質片(Hep-2細胞、小鼠肝印片/切片)，加入自身抗體后與抗原成分相結合，再與熒光標記的抗抗體結合，根據熒光在細胞上的著色部位進行定位分析。特異性純化抗原包被載體，檢測特異性自身抗體；特異性抗原不易純化或不明確，用ELISA法和IBT法等檢測自身抗體會有一定誤差。返回章目錄小結

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