植物生理指標

植物生理指標1、植物酶液提?。篜VPP固體,PVP單體與金屬元素結(jié)合)酚類吸附劑，酚的羥基與蛋白質(zhì)的羰基形成氫鍵，醌導致蛋白質(zhì)聚合?；?polyclarAT(Polyclar-ATinsolublePVP,alsocalledasPVPP(PolyVinylPolyPyrrolidine).ItbindsphenolsetcmoreefficientlythanPVPandiseasilyremovablebyfiltrationoralowspeedspin )去除酚的毒害防止醌顏色干擾。PVP的肽鍵中的氧與酚羥基上的質(zhì)子牢固結(jié)合，防止酚與酶中肽鍵結(jié)合，保護了酶。母液制備：0.1mol/LDTT:100mg至微量離心管，+650ul水0.5mo/LEDTA93gEDTANa,10gNaOH,U500ml10mg/mlBSA:100mgBSA于9.5ml水中2、可溶性總糖測定(蒽酮比色法) 原理：糖+硫酸一糠醛，其與蒽酮形成綠色絡合物，620nm采用濃硫酸，倒入水中產(chǎn)生大量熱，促進反應發(fā)生。標糖溶液ml00.2 0.4 0.60.81.02.52.3 2.1 1.91.71.5 0.01g的葡萄糖，1050.01g100ml100ug/ml標糖溶液ml00.2 0.4 0.60.81.02.52.3 2.1 1.91.71.5蒸餾水mlml6.56.56.56.56.56.5糖含量ug020406080100總體積9ml，快搖2-3s，室溫冷卻10-15min,顯色，620nm.實驗結(jié)果：實際上并不理想，因abs均偏低，可試將標糖濃度適當升高葡萄糖含量ug20 40 60 80 100abs 0.090.1690.2590.3320.42720070830可溶性糖標準曲線*系列1——線性(系列1)葡萄糖濃度3、電導率（DDS-11A）所測溶液偏于定位調(diào)節(jié)斜率調(diào)節(jié)酸性所測溶液偏于定位調(diào)節(jié)斜率調(diào)節(jié)酸性PH6.86PBS堿性PH4.00鄰苯二甲酸氫鉀PH6.86PBS PH9.18四硼酸鈉10分鐘。將電極浸入去離子水中，須確保極片浸沒，校正零10ms14、培養(yǎng)液PH測定（PHS-3C）PHKCL浸泡液浸泡，用槍從上小孔和帽注滿，至少浸泡24h。將PH4.0緩沖劑包定容至250ml,再加入56g分析純KCL，加熱溶解。30min.同，放入不同溶液，待示數(shù)平衡，再分別調(diào)節(jié)定位、斜率至6.86,4.00.5、細胞活力測定（TTC法）《植物生理學通訊》TTC法測定紅豆杉細胞活力劉華［1］梅興園［2］［1］湖省衛(wèi)生職工醫(yī)學院生物教研室，湖北荊州 434000［2］華中理工大學生命科學與技術(shù)學院，武漢430074）藥品配置：0.4%（m/v）TTC紅四氮唑溶液：0.2gTTC,力卩1.5ml95%50ml。隨配隨用，不宜久藏，遮光，變紅不可用。原理：TTCH還原成紅色的三苯基甲4) 步驟：10ml試管：2.5ml0.4%TTC+2.5mlPH7.00.1mol/LPBS+0.2g鮮細胞，2513-16h5ml95%20min,485nm處吸光度，此數(shù)值可直接作為細胞活力的衡量標準。一般所得值1-2&可溶性蛋白含量測定(考馬斯亮藍G250染色)原理：溶液配置：考馬斯亮藍溶液：100mgG250溶于50ml95%乙醇，加入100ml85%(w/v)的磷酸，定容至1000ml30天。藍黑色過濾后形成棕褐色稀釋成淡藍色；50mmol/LPBSPBSPH無太大影響。100ug/ml10mg,100ml步驟：Ck100ug/ml標準蛋白溶液(ul)02200340045蒸餾水(ul)混勻后G250Ck100ug/ml標準蛋白溶液(ul)02200340045蒸餾水(ul)混勻后G250溶液(ml)蛋白質(zhì)含量(ug)1000800556004005800200561000050206005406080100樣品測定：100ul樣品提取液900ul蒸餾水5mlG250溶液7PAL（陳建勛）原理：PAL催化苯丙氨酸的脫氨反應，使氨釋放形成反式肉桂酸，反式肉桂酸在290nm處有重要吸收。此酶在植物體內(nèi)次生物質(zhì)代謝如木質(zhì)素等起重要作用。藥品配置：PH8.80.1mol/L硼酸緩沖液0.02mol/LL-苯丙氨酸：0.330gL-苯丙氨酸，上述緩沖液定容至100ml步驟：1ml0.02mol/LL-苯丙氨酸2mlPH8.80.1mol/L硼酸緩沖液100ul（2ck:100ul提取緩沖液）混勻，290nmOD，精確計時，3030分鐘后，290nm30min0.011U.計算：PAL活性（U/gFW）=30minOD差值*酶液總體積0.1ml（酶液）*提取酶液時樣品重*0.01注意:PAL為誘導酶，除光誘導外，切割受傷，病害感染等也能誘導此酶活性升高測定。8、過氧化氫酶CAT德］B.施特爾馬赫著?錢嘉淵譯?酶的測定方法［M］?第1版?中國輕工業(yè)出版社，1992. p186-1881）CAT催化H2O2分解，240nmH2O2CATPH7.0,37度時活性最高，冷凍，陽光，氧氣降低酶活。2）藥品：0.18%H2O2:600ul30%H2O2用PH7.0PBS稀釋至100ml.現(xiàn)配。（一般情況下，配置的雙氧水冬天兩周用完，夏天一周，避光）25度預熱的蒸餾水步驟:為檢查在不加酶的情況下吸光度是否也降低，以蒸餾水為參比，用移液管將1.0ml1.9ml125C。在5240nm0.01算主值時須減去此值。以蒸餾水為對照，實驗組：1ml0.18%H2O2+1.9ml蒸餾水+100ul酶液，在連續(xù)5240nm處測定吸光度。（1度的降低值達到穩(wěn)定為止）計算：在上述條件下，每分鐘酶促分解1umol1個酶活力單位。U/mg=

X3/0.0436xEw240式中：E240-240nmEw-0.10ml所用酶液中含酶的重量（mg0.0436—240nm1umol過氧化氫的吸光度3—反應混合液的總體積。4）注意：酶液濃度應為5-20u/ml8、超氧化物歧化酶SOD（NBT光還原法陳建勛原理：NBT在Met560nm處有最大光吸收。SOD藥品配制：a）50mmol/LPH7.8PBSb）220mmol/LMet:3.2824g用50mmol/LPH7.8PBS溶解定容至100ml.41-2d.c）1.25mmol/LNBT（氯化硝基四氮唑蘭）溶液：避光現(xiàn)配，0.102gNBT50mmol/LPH7.8PBS100ml.42-3d.d)0.033mmol/L核黃素：2.52mg核黃素，用50mmol/LPH7.8PBS溶解定容至200ml于棕色瓶，4度冰箱保存8-10d.3)步驟：反應總體積5ml,兩個光對照，兩個暗對照比色時終濃度50mmol/L比色時終濃度50mmol/LPH7.8PBS4.05ml220mmol/LMet300ul13mmol/L1.25mmol/LNBT300ul75umol/L0.033mmo