T細胞體外培養(yǎng)

目前應(yīng)用于臨床的治療的T細胞有如下幾種：1、CD3AK細胞CD3AK細胞全稱為抗CD3單克隆抗體激活的殺傷細胞，當(dāng)淋巴細胞與抗CD3單克隆抗體共育2-3天，淋巴細胞可以明顯增殖，此種激活為一次性完成，淋巴細胞一經(jīng)激活即無需抗CD3單克隆抗體持續(xù)存在而發(fā)揮作用。只會在加入低劑量的IL-2繼續(xù)培養(yǎng)即可維持起活躍增殖，經(jīng)2-3周培養(yǎng)后可獲得大量的表現(xiàn)為CD3+、CD4以及CD8+的混合體，且隨時間延長，CD3+和CD8+雙陽性細胞的比例增加，而CD4+和CD8+雙陽性的比例則下降。因此，CD3AK細胞在表型上似乎接近于CTL。具體培養(yǎng)方法:1、 培養(yǎng)前1天以含CD3Ab5mg／L的磷酸鹽緩沖液(PBS)20ml平鋪培養(yǎng)瓶，4°C過夜包被；2、 培養(yǎng)第1天棄去PBS，以PBS沖洗2次及1640培養(yǎng)液沖洗1次，加入1000U/ml的IFN-y，置于37C體積分數(shù)為5%C02的飽和濕度培養(yǎng)箱中；23、 24小時后加入1000U/ml的lL-2。4、 繼續(xù)培養(yǎng)2、CIK細胞CIK細胞的全稱為細胞因子活化的殺傷細胞，它是在多種細胞因子(IFN-y，CD3單抗，CD28單抗，IL-2和IL-1)作用下，外周血單核細胞可以被定向誘導(dǎo)并大量增殖成為具有抗腫瘤活性的細胞群。CIK細胞的表型主要為CD3+CD56+,是來源于PBMC中的T細胞(CD3+CD56-)。具體培養(yǎng)方法：3、LAK細胞LAK細胞全稱為淋巴因子激活的殺傷細胞，可在外周血單核細（PBMC）中加入IL-2體外培養(yǎng)4-6天，能誘導(dǎo)出一種非特異的殺傷細胞，稱為LAK細胞。LAK細胞的前體細胞是NK細胞和T細胞。4、TIL細胞TIL細胞的全稱為腫瘤浸潤淋巴細胞。它的制備方法與LAK細胞相似，所不同的是TIL的細胞來源是腫瘤組織中分離的浸潤淋巴細胞用少量的IL-2細胞刺激后，能大量擴增表型為CD4+及CD8+為主的T細胞。外周血單核細胞（PBMC）分離實驗血標本：EDTA（2%）鹽抗凝血：采集后可4度保存不超過半天，盡量早處理。10ml抗凝血分2份（分離淋巴細胞可稍多）。外周血單核細胞（PBMC）分離步驟：吸出10ml新鮮抗凝血（含2%EDTA）至50ml離心管中，加入10mlPBS混勻，此時共20ml；2個50ml離心管內(nèi)分別加入10ml外周血單核細胞（PBMC）分離分層液；向裝有分層液的50ml的離心管分別加入10ml稀釋樣品，注意緩慢加入，不要沖破液面，2000r/min離心20分鐘；巴氏管插入液面，輕吸灰白色的淋巴細胞層，放入另一個離心管中，避免吸入分層液和血漿（2管混入一個離心管）；加入5mlPBS，1800r/min離心5分鐘；棄上清，取沉淀，再次加入5mlPBS混勻成細胞懸液，1000r/min離心5分鐘，棄去上清，保留沉淀;7.2ml/r/