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第第5頁高考生物選修三知識(shí)點(diǎn)總結(jié)
高考生物選修三知識(shí)點(diǎn)(一)
基因工程概念:按照人們的愿望,進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計(jì),通
過體外DNA重組和轉(zhuǎn)基因技術(shù),賦予生物新的遺傳特性,創(chuàng)
造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品?;蚬こ袒驹恚鹤屇康幕蛟谑荏w細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定且高效的表達(dá)?;蚬こ汤碚摶A(chǔ):DNA是生物遺傳物質(zhì)的發(fā)現(xiàn),DNA雙螺旋結(jié)構(gòu),遺傳信息傳遞方式基因工程核心:構(gòu)建重組DNA分子植物體細(xì)胞:農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法(插入Ti質(zhì)粒上的T-DNA),基因槍法、花粉管通道法——導(dǎo)入葉綠體DNA中,由于細(xì)胞質(zhì)/器DNA的遺傳與性別相關(guān)聯(lián),故可避免因花粉傳播而造成基因污染(目的基因傳播到非轉(zhuǎn)基因生物中)動(dòng)物受精卵:顯微注射技術(shù)用(如顯微注射)技術(shù)/方法將目的基因?qū)隿f轉(zhuǎn)基因/基因工程技術(shù)原核細(xì)胞:CaCI2/Ca2+處理法(先用Ca2+處理增加細(xì)胞壁通透性,使之成為感受態(tài)細(xì)胞,再將重組質(zhì)粒與感受態(tài)細(xì)胞混合,在一定溫度下感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子)——原核生物作為受體細(xì)胞的原因:①繁殖快②體積小新陳代謝旺盛(目的產(chǎn)物合成效率高)③遺傳物質(zhì)少(便于操作)、④單細(xì)胞(容易培養(yǎng))高考生物選修三知識(shí)點(diǎn)(二)限制性核酸內(nèi)切酶(1)來源:主要是從原核生物中分離純化出來的(不切割自身DNA的原因:原核生物中無該限制酶的識(shí)別序列或其已被修飾)(2)功能:識(shí)別和切割DNA分子內(nèi)一小段特殊的脫氧核苷酸序列(偶數(shù)堿基對回文序列)特異性表現(xiàn):識(shí)別特定片段、切割該片段中的特定位點(diǎn)、形成一種末端Cf—G↓GATCC—&—↓GATC—(3)結(jié)果:DNA片段末端形成末端堿基互補(bǔ)的黏性末端或平末端DNA連接酶(1)功能:連接具有末端堿基互補(bǔ)的2個(gè)DNA片段,形成重組DNA分子CfDNA聚合酶:只能將單個(gè)脫氧核苷酸逐個(gè)添加到已有的脫氧核苷酸鏈之后,需模板DNA,連接磷酸二酯鍵載體(1)條件:①能在受體細(xì)胞中穩(wěn)定保存并大量復(fù)制,基本不影響受體細(xì)胞正常生命活動(dòng)②一至多個(gè)限制酶酶切位點(diǎn)(必須在所需標(biāo)記基因外),供外源DNA片段插入③標(biāo)記基因,便于篩選含有重組DNA分子的受體細(xì)胞——往往需要根據(jù)需求改造天然載體。功能:①作為運(yùn)載工具將目的基因轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞內(nèi)——載體選質(zhì)粒的原因:具有環(huán)狀結(jié)構(gòu),能夠攜帶目的基因②利用它在受體細(xì)胞內(nèi)對目的基因進(jìn)行大量復(fù)制和轉(zhuǎn)錄/表達(dá)質(zhì)粒(最常用的載體)一種能夠自主復(fù)制,在細(xì)菌(或酵母菌)中獨(dú)立于染色體之外存在的雙鏈環(huán)狀DNA分子其它載體:噬菌體、動(dòng)植物病毒高考生物選修三知識(shí)點(diǎn)(三)獲取目的基因目的基因:人們所需要的編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因方法:(1)序列已知、(2)序列未知:(1)序列已知:①化學(xué)合成法——較長DNA單鏈合成過程中容易出現(xiàn)堿基缺失如反轉(zhuǎn)錄法(e.g獲取mRNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA再用DNA聚合酶生成雙鏈)②聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增原料:水、緩沖液、4種游離脫氧核苷酸、TaqDNA聚合酶、模板DNA(……基因)、對…基因特異的2段DNA引物(防止相互或自身折疊)過程:第一步:加熱至90?95°C,DNA在高溫下變性解鏈第二步:冷卻到55?60C,引物結(jié)合到互補(bǔ)DNA鏈(退火)第三步:加熱至70?75°C,熱穩(wěn)定DNA聚合酶從引物起始互補(bǔ)鏈的合成能量來源于dNTP(2)序列未知:建立基因文庫:建立一個(gè)包括目的基因在內(nèi)的基因文庫(保存在受體菌中),再從基因文庫中獲取目的基因大量擴(kuò)增/分子水平的克隆利用受體細(xì)胞(如E.coli)無性繁殖,利用基因探針釣取,再導(dǎo)入最終受體細(xì)胞e.g目的基因→大腸桿菌→農(nóng)桿菌→植物細(xì)胞→植物(主要在細(xì)菌分裂時(shí)幾何級(jí)擴(kuò)增,盡管質(zhì)粒獨(dú)立于擬核,可在分裂時(shí)發(fā)生自我復(fù)制,但由于多數(shù)細(xì)菌對胞內(nèi)質(zhì)粒數(shù)量有限制,故該種復(fù)制對擴(kuò)增效果不大)PCR技術(shù)形成重組DNA分子(基因表達(dá)載體:啟動(dòng)子+目的基因+終止子+標(biāo)記基因)目的:轉(zhuǎn)運(yùn)目的基因,并使在受體內(nèi)穩(wěn)定存在、復(fù)制、表達(dá)/轉(zhuǎn)錄并穩(wěn)定遺傳(基因型X0)過程:(1)單酶切:用同種限制酶分別切割目的基因和載體從而形成相同的粘性末端,然后用DNA連接酶將目的基因和載體連接起來——有時(shí)用不同限制酶也可以形成相同的粘性末端(2)雙酶切:用兩種限制酶切割使目的基因和載體兩端各形成兩種粘性末端,防止載體和目的基因自身環(huán)化。看了&It;高考生物選修
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