微生物標(biāo)本采集與處理課件

微生物學(xué)檢驗(yàn)

標(biāo)本采集與處理血液培養(yǎng)標(biāo)本采集和運(yùn)送1、血液采集時(shí)間：

⑴發(fā)熱（≥38℃）或低溫（≤36℃）寒戰(zhàn)。⑵WBC增多。⑶皮膚粘膜出血。⑷血壓降低。⑸昏迷。⑹特殊患者出現(xiàn)粒細(xì)胞減少,血小板減少等。應(yīng)在以上一種或幾種體征出現(xiàn)，而臨床可疑菌血癥時(shí)采集血培養(yǎng)，并且盡量在使用抗生素之前進(jìn)行。為提高陽(yáng)性率，在24小時(shí)內(nèi)采集2~3份血培養(yǎng)。2、采血部位及抽血量：一般抽取肘靜脈血，成人采血量是5~10ml，兒童為3~5ml（盡量多抽提高陽(yáng)性率），原則為血液與肉湯之比為1:5~1:10。3、采集血標(biāo)本和接種時(shí)要嚴(yán)格無(wú)菌操作，避免雜菌污染。如果雙相培養(yǎng)基則從冰箱取出，應(yīng)將其平衡到室溫，方才采集血標(biāo)本接種。4、無(wú)菌操作采血后應(yīng)立即送檢,如不能立即送檢,需室溫保存或置35℃~37℃培養(yǎng)箱中,切勿冷藏！實(shí)驗(yàn)室處理標(biāo)本驗(yàn)收、登記：1、如發(fā)現(xiàn)血培養(yǎng)瓶標(biāo)識(shí)與化驗(yàn)單申請(qǐng)單不符，如瓶破裂或明顯污染。應(yīng)立即與臨床醫(yī)師聯(lián)系，報(bào)告拒收的具體理由.2、如發(fā)現(xiàn)標(biāo)本采集放置12小時(shí)以上,用不適當(dāng)類(lèi)型的培養(yǎng)瓶收集標(biāo)本、用過(guò)期的培養(yǎng)瓶收集標(biāo)本、采血量不足等。應(yīng)立即與臨床醫(yī)師聯(lián)系，報(bào)告標(biāo)本不合格的具體理由，建議補(bǔ)做血培養(yǎng)。3、對(duì)延遲送檢的血培養(yǎng)瓶注意肉眼觀察瓶?jī)?nèi)是否有絮狀物、混濁、溶血、凝塊、薄膜等。如發(fā)現(xiàn)應(yīng)立即直接涂片鏡檢和劃線轉(zhuǎn)種。4、如驗(yàn)收合格，給標(biāo)本和申請(qǐng)單進(jìn)行標(biāo)識(shí)編號(hào)，并在血培養(yǎng)專(zhuān)用澄記本上澄記病人的姓名、性別、年齡、科室、住院號(hào)、標(biāo)本編號(hào)，然后置于35℃～37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。下呼吸道感染標(biāo)本培養(yǎng)標(biāo)本采集1、自然咳痰法:以晨痰為佳,采集前應(yīng)用清水清潔口腔牙齒,用力咳出呼吸道深部的痰,直接吐入痰培養(yǎng)無(wú)菌杯中,標(biāo)本量應(yīng)≥1ml.咳痰困難患者可霧化吸入取痰,采集完標(biāo)本后應(yīng)盡快送檢,不能及時(shí)送檢的標(biāo)本,室溫保存≤2h.2、支氣管鏡采集法:由臨床醫(yī)師按相應(yīng)操作規(guī)程采集,應(yīng)注意咽喉部正常菌群污染.3、小兒取痰法：用彎壓舌板向后壓舌，將拭子伸入咽部，小兒經(jīng)壓舌刺激咳嗽時(shí)，可噴出肺部或氣管分泌物粘在拭子上送檢。幼兒還可用手指輕叩胸骨柄上方，以誘發(fā)咳痰。痰標(biāo)本驗(yàn)收1、呼吸道定植有大量的正常菌群,咽試子、痰厭氧培養(yǎng)無(wú)臨床意義。2、肉眼觀察痰標(biāo)本呈水樣或唾液樣，或者標(biāo)本涂片細(xì)胞學(xué)檢查，WBC<10/低倍鏡和鱗狀上皮細(xì)胞>25/低倍鏡，提示該標(biāo)本已污染正常菌群，建議重送標(biāo)本。

3、標(biāo)本容器溢漏、無(wú)蓋或送檢時(shí)間超過(guò)2h拒收。

4、同時(shí)同部位或同一天兩份相同檢測(cè)的標(biāo)本，應(yīng)及時(shí)與申請(qǐng)醫(yī)師協(xié)商處理。

5、遇有不合格標(biāo)本,應(yīng)及時(shí)與臨床聯(lián)系,報(bào)告不合格標(biāo)本拒收的具體理由。痰標(biāo)本培養(yǎng)顯微鏡檢查：涂片革蘭氏染色鏡檢（或直接涂片低倍鏡鏡檢）并記錄。1.如WBC>25/低倍鏡和鱗狀上皮細(xì)胞<10/低倍鏡,提示該標(biāo)本合格可用于細(xì)菌培養(yǎng);2.WBC>25/低倍鏡和鱗狀上皮細(xì)胞10—25/低倍鏡,提示該標(biāo)本尚合格可用于細(xì)菌培養(yǎng);3.WBC<10/低倍鏡和鱗狀上皮細(xì)胞>25/低倍鏡,提示該標(biāo)本不合格,重送標(biāo)本.

細(xì)菌涂片染色檢查:挑取標(biāo)本膿性或帶血部份涂片革蘭氏染色鏡檢,報(bào)告所見(jiàn)細(xì)菌的量和吞噬細(xì)胞內(nèi)是否有細(xì)菌等.痰標(biāo)本培養(yǎng)分離培養(yǎng)挑取膿痰分別接種于羊血瓊脂平板、麥康凱平板、巧克力瓊脂平板上,置于35℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)24-48小時(shí)。巧克力平板放入5%~10%CO2環(huán)境中培養(yǎng)24-48小時(shí)。初級(jí)報(bào)告即標(biāo)本涂片染色細(xì)胞學(xué)和細(xì)菌學(xué)顯微鏡鏡檢的描述報(bào)告，如發(fā)現(xiàn)有診斷價(jià)值時(shí)及時(shí)口頭報(bào)告，但應(yīng)按要求詳細(xì)記錄。1.細(xì)胞學(xué)鏡檢的描述報(bào)告：包括WBC數(shù)/低倍鏡和細(xì)胞內(nèi)是否含有細(xì)菌且胞內(nèi)細(xì)菌的染色形態(tài)特性。2.細(xì)菌學(xué)鏡檢的描述報(bào)告：如見(jiàn)到排列成葡萄狀的革蘭氏陽(yáng)性球菌，可報(bào)告“找到革蘭氏陽(yáng)性球菌，形似葡萄球菌”；如找到不識(shí)別的細(xì)菌時(shí)則報(bào)告“找到革蘭×性×形細(xì)菌”。尿液細(xì)菌培養(yǎng)尿培養(yǎng)檢查的臨床指征:1有典型的尿路感染癥狀;2肉眼膿尿或血尿3尿常規(guī)白細(xì)胞和/或亞硝酸鹽陽(yáng)性4不明原因的發(fā)熱,無(wú)其他局部癥狀5泌尿系統(tǒng)疾病手術(shù)前和膀胱排空功能受損等.6留置導(dǎo)尿管的病人出現(xiàn)發(fā)熱。尿標(biāo)本的采集1.清潔中段尿:晚睡前少飲水,女性病人用手分開(kāi)大陰唇,男性病人翻上包皮,用肥皂將陰部清洗干凈后,用清水沖洗尿道口周?chē)?。將前段尿排去，將中段尿約10ml直接排入專(zhuān)用的無(wú)菌管中。2.恥骨上膀胱穿刺法：嚴(yán)格按無(wú)菌操作，用注射器直接從恥骨上皮穿入膀胱，吸取尿液置于專(zhuān)用的無(wú)菌管中。3.直接導(dǎo)尿法：按常規(guī)方法局部消毒后，用導(dǎo)尿管直接經(jīng)尿道插入膀胱，獲取膀胱尿。4.留置導(dǎo)尿：先消毒導(dǎo)尿管外部，按無(wú)菌操作用注射器通過(guò)導(dǎo)尿管吸取尿液置于專(zhuān)用的無(wú)菌管中。6.其他方法：收集特定部位的尿標(biāo)本可以通過(guò)侵入的方式如膀胱鏡或手術(shù)中進(jìn)行采集。尿標(biāo)本的運(yùn)送標(biāo)本采集后應(yīng)及時(shí)送檢，2h內(nèi)進(jìn)行接種,否則應(yīng)置4—8℃冰箱保存，冷藏保存標(biāo)本時(shí)間不得超過(guò)8h。禁止尿中加入防腐劑和消毒劑。盡量在未使用抗生素前采集標(biāo)本培養(yǎng)。尿標(biāo)本驗(yàn)收檢查申請(qǐng)單所提供的信息（姓名、床號(hào)）和標(biāo)本標(biāo)鑒上的信息是否相同，所用的容器（10ml無(wú)菌管）是否合格等。對(duì)不合格的標(biāo)本應(yīng)注明原因，拒收，并做記錄。尿分離培養(yǎng)一般培養(yǎng)：將標(biāo)本輕輕旋轉(zhuǎn)混勻，用定量接種環(huán)或無(wú)菌微量加樣器取尿液0.001ml接種于血平板和麥康凱平板，35℃～37℃培養(yǎng)18—24h。特殊培養(yǎng)：對(duì)懷疑有苛氧菌感染者應(yīng)采用恥骨上膀胱穿刺法或?qū)蚍ú杉瘶?biāo)本，接種時(shí)加一塊巧克力平板，并置5%CO2環(huán)境中培養(yǎng)24-48小時(shí)。經(jīng)18～24h培養(yǎng)無(wú)菌生長(zhǎng)者，應(yīng)將所有培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)。建議：為提高檢出率，要求10ml尿液置于無(wú)菌管內(nèi)離心3000r/h，5~10分鐘。取尿沉渣接種膿汁與創(chuàng)傷感染分泌物培養(yǎng)標(biāo)本采集開(kāi)放性感染分必物或膿液先用無(wú)菌生理鹽水沖洗表面，用2支無(wú)菌棉拭子取創(chuàng)傷或潰瘍深處的膿液及分泌物送檢，一支涂片檢查用，一支為培養(yǎng)用，將棉拭子放入無(wú)菌管內(nèi)或增菌培養(yǎng)基內(nèi)送檢。閉性膿腫常局部消毒后，用注射器抽取膿液置于無(wú)菌試管內(nèi)送檢。如果懷疑厭氧菌感染時(shí)，當(dāng)即作床邊接種或置于厭氧運(yùn)送培養(yǎng)基內(nèi)送檢。細(xì)菌對(duì)干燥敏感或只能采集少量標(biāo)本時(shí)，用棉拭子采集標(biāo)本后立即放入增菌培養(yǎng)基內(nèi)。對(duì)于不能立即送檢的標(biāo)本，應(yīng)放4℃保存，培養(yǎng)淋病奈瑟菌和及腦膜炎奈瑟菌的標(biāo)本除外。對(duì)放線菌標(biāo)本，常用無(wú)菌棉拭子擠壓瘺管，選取流出膿液中的“硫磺樣顆?！敝糜跓o(wú)菌試管內(nèi)送檢。也可無(wú)菌紗布條塞入瘺管，次日撥出送檢。胸腔、腹腔、心包腔和滑膜腔等標(biāo)本采集，應(yīng)嚴(yán)格按無(wú)菌操作程序，由臨床醫(yī)生進(jìn)行采集及時(shí)送檢。分泌物分離培養(yǎng)需氧菌的分離培養(yǎng)：化膿性感染的標(biāo)本用劃線分離法將標(biāo)本接種于血平板、巧克力平板上，經(jīng)35—37℃24—48h培養(yǎng)，巧克力平板放入5%~10%CO2環(huán)境中培養(yǎng)24-48小時(shí)。分泌物涂片檢查及初級(jí)報(bào)告涂片、顯微鏡下觀察細(xì)菌的形態(tài)、大小、排列及染色特點(diǎn)，可初步報(bào)告“找到革蘭氏×性×菌，呈×狀排列。如鏡檢未見(jiàn)細(xì)菌時(shí)，可初步報(bào)告“直接涂片未找到細(xì)菌”對(duì)懷疑有結(jié)核分枝桿菌感染的標(biāo)本，采用抗酸性染色鏡檢，并報(bào)告鏡檢測(cè)結(jié)果。

穿刺液標(biāo)本培養(yǎng)標(biāo)本采集和運(yùn)送：1．由臨床醫(yī)師無(wú)菌操作經(jīng)皮膚抽吸或手術(shù)中采集標(biāo)本。為防止穿刺液的凝固，應(yīng)在無(wú)菌容器內(nèi)預(yù)先加入滅菌肝素（0.5mg肝素，可抗凝5ml標(biāo)本）再注入各種穿刺液。2．標(biāo)本采集量為細(xì)菌≥1ml,真菌≥10ml,分枝桿菌≥10ml。標(biāo)本采集完后應(yīng)立即送檢，最遲不超過(guò)2小時(shí)。實(shí)驗(yàn)室檢查顯微鏡檢查：標(biāo)本如為漿液，可先經(jīng)3000r/min離心，取沉淀涂片。如為膿液，可直接涂片。固定后，革蘭染色和抗酸染色鏡檢。根據(jù)細(xì)菌形態(tài)、染色特征即可初步報(bào)告。分離培養(yǎng)：無(wú)菌操作取離心后的沉淀物接種于血平板、巧克力平板和麥康凱平板，為提高檢出細(xì)菌陽(yáng)性率，并接種肉湯增菌培養(yǎng)。置于35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18～24小時(shí)，其中巧克力平板置于CO2環(huán)境中。女性生殖道感染標(biāo)本培養(yǎng)標(biāo)本采集：由臨床醫(yī)生標(biāo)準(zhǔn)采集，立即送檢，最遲應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)。分離培養(yǎng)：無(wú)菌操作將標(biāo)本接種于血平板、巧克力平板和麥康凱平板，置于35℃培養(yǎng)24～48h，其中巧克力平板置于5%~10%CO2環(huán)境中。精液、前列腺液培養(yǎng)標(biāo)本采集：前列腺液由臨床醫(yī)生進(jìn)行無(wú)菌采集，精液收集于無(wú)菌瓶中。1小時(shí)內(nèi)及時(shí)送檢。分離培養(yǎng)：無(wú)菌操作將標(biāo)本接種于血平板、巧克力平板和麥康凱平板，置于35℃培養(yǎng)24～48h，其中巧克力平板置于5%~10%CO2環(huán)境中。糞便細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本采集：1、標(biāo)本采集盡可能在發(fā)病早期和使用抗生素之前。2、自然排便采集糞便標(biāo)本時(shí)，取有膿血、粘液、組織碎片部分的糞便2~3g。液體糞便則取絮狀物，一般取2~3ml，直接裝入無(wú)菌管或運(yùn)送培養(yǎng)基（GN培養(yǎng)基）中送檢。標(biāo)本采集3、直腸拭子采集糞便標(biāo)本，適于排便困難患者或嬰兒?？捎梅试硭畬⒏亻T(mén)周?chē)磧簦脽o(wú)菌鹽水濕潤(rùn)的棉拭子插入肛門(mén)，成人約4~5cm，兒童約2~3cm，與直腸粘