時間分辨免疫熒光技術(shù)-李超課件

時間分辨免疫熒光技術(shù)演講人：李超2015年2月3日主要內(nèi)容目前有哪些標記免疫學分析方法？什么是免疫熒光技術(shù)？什么是時間分辨免疫熒光技術(shù)？時間分辨免疫熒光技術(shù)的優(yōu)勢是什么？時間分辨免疫熒光技術(shù)可應用于哪些方面？目前有哪些標記免疫學分析方法？免疫熒光分析(Coons,1941)放射免疫分析(Berson和Yalow,1960)酶聯(lián)免疫分析(Engvall,1971)膠體金標記免疫分析(Faulk和Taylor,1971)化學發(fā)光免疫分析(Arakawa，1977)時間分辨熒光免疫分析(Soini和Hemmila，1979)電化學發(fā)光免疫分析(Leland,1990)生物芯片(美國Luminex公司,1997)什么是時間分辨免疫熒光技術(shù)？概念：

時間分辨免疫熒光技術(shù)指利用具有雙功能基團結(jié)構(gòu)的螯合劑，將鑭系元素標記到抗體（或抗原）上，經(jīng)免疫反應形成復合物，由于鑭系元素能發(fā)出熒光，故分離除去未結(jié)合的成分后，利用時間分辨熒光儀即可測定熒光強度，從而推測待測物含量。什么是時間分辨免疫熒光技術(shù)？

基本原理：用三價稀土離子及其螯合物作為示蹤物，代替熒光物質(zhì)、同位素、酶和化學發(fā)光物質(zhì)，標記抗原、抗體、激素、核酸探針等物質(zhì)；當免疫反應發(fā)生后，根據(jù)稀土離子螯合物的熒光光譜的特點（特異性強、熒光光譜的Stokes位移、壽命長），用時間分辨熒光分析儀，測定免疫反應最后產(chǎn)物的熒光強度；根據(jù)熒光強度和相對熒光強度比值，判斷反應體系中分析物的濃度，達到定量分析的目的什么是時間分辨免疫熒光技術(shù)？

例如：三價稀土離子包括有銪(Eu)，釤（Sm)，鋱

(Tb)，鏑

(Dy)等，它們的熒光光譜具有特異性強﹑Stokes位移大﹑壽命長的特點；采用異硫氰酸芐基二亞乙基三胺四乙酸銪(DTTA-Eu)為雙功能螯合試劑，其一端螯合Eu3+，另一端可與蛋白質(zhì)的-NH2

連接；在中性或接近中性pH條件下，DTTA與Eu3+具有足夠的螯合穩(wěn)定性，而在增強液（呈酸性）作用下，DTTA-Eu又能將螯合的Eu3+迅速、徹底地釋放出來并與增強液中的配體螯合﹑進入膠束的疏水內(nèi)核，使Eu3+熒光得以成千萬倍地放大。通過時間延遲，將特異性熒光與非特異性熒光分辨開來技術(shù)上的先進性特點特異性熒光與非特異性熒光分離度高時間、光譜分辨發(fā)射熒光與激發(fā)熒光分離度高零背景、高特異性解離、增強熒光性大大提高穩(wěn)定的熒光螯合物線性范圍更寬重復性更好標記位點標記位點多對標記物結(jié)構(gòu)及活性影響小無衰變受環(huán)境影響小高穩(wěn)定性，高精確度試劑保存時間長標準曲線保留時間長標記方法單、雙標記多標記同一試劑盒可同時測多個項目時間分辨熒光和電化學發(fā)光比較的優(yōu)勢標記物多標記技術(shù)做科研試劑種類試劑價格Eu,Sm,Te,Dy有能58種臨床,24種科研低釕無無28種臨床,無科研試劑高時間分辨熒光電化學發(fā)光時間分辨免疫熒光技術(shù)的應用內(nèi)分泌檢測甲狀腺功能檢測糖尿病指標檢測生長激素檢測T3、T4、FT3、FT4、TSH-U、TBG、Ab、TPOAb胰島素、C－肽hGH（生長激素）意義：甲狀腺疾病也是目前最常見最多發(fā)一種內(nèi)分泌疾病，以上各項目的聯(lián)合檢測，為臨床醫(yī)生對病患者甲狀腺功能的評價提供更基礎、全面的依據(jù)用于區(qū)分胰島素依賴型糖尿病(IDDM)和非胰島素依賴型糖尿病(NIDDM)和用于胰島素瘤的診斷對診斷肢端肥大癥是一項特異的方法時間分辨免疫熒光技術(shù)的應用婦產(chǎn)科檢查：

hCG絨毛膜促性腺激素

LH-Spec黃體生成素(特異性)FSH促卵泡激素

PRL催乳素

E2雌二醇

Testo睪酮

Prog孕酮

SHBG性激素結(jié)合球蛋白意義：

檢測這些激素的含量對于生殖生理的研究、疾病的診斷、治療、隨訪及計劃生育工作的開展具有重要的意義。腫瘤科檢查：

AFP甲胎蛋白

PSA前列腺特異抗原

B2-MBeta2微球蛋白

NSE神經(jīng)元烯醇化酶

PAP前列腺酸性磷酸酶

CEA癌胚抗原

PSAFree/total前列腺特異抗原/總量時間分辨免疫熒光技術(shù)的應用腫瘤標志物是指示體內(nèi)腫瘤存在并反映其一定的生物特性的生化物質(zhì)。通過測定其存在或含量，對于腫瘤可輔助診斷，分析病情，指導治療，監(jiān)測復發(fā)或轉(zhuǎn)移及判斷預后等。意義：時間分辨免疫熒光技術(shù)的應用遺傳疾病檢查產(chǎn)前篩查新生兒篩查血液疾病檢查貧血檢查白血病分型免疫細胞分型細胞毒試驗傳染病檢查乙肝系列表面抗原表面抗體e抗原e抗體核心抗體意義：