皮膚組織病理切片技術(shù)課件

皮膚組織病理切片技術(shù)皮膚組織病理切片技術(shù)1一、取材1、手術(shù)取材。適用于：（1）面部、關(guān)節(jié)部，易出血部位等；（2）較大、較深的皮疹；（3）結(jié)節(jié)和囊腫性皮疹；（4）切除治療和檢查，主要用于小的腫瘤。2、鉆孔取材。（角膜鉆孔器）適用于一般的皮疹取材。一、取材2二、固定

固定的作用和目的：1、可以防止組織溶解及腐敗。2、使細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、脂肪、糖、酶等各種成分沉淀保存下來，保持它原有的結(jié)構(gòu)與生活時(shí)相仿。二、固定3

3、因沉淀及凝固的關(guān)系使細(xì)胞內(nèi)成分產(chǎn)生不同的折射率，造成光學(xué)上的差異，使得在生活情況下原來看不清楚的結(jié)構(gòu)變得清晰起來了，并使得細(xì)胞各部分容易染色。4、固定劑兼有硬化作用，使組織硬化，增加組織硬度，使組織不易變形，在制片過程中，可減少繼續(xù)收縮。因此，固定是制片過程中的一個(gè)重要程序。3、因沉淀及凝固的關(guān)系使細(xì)胞內(nèi)成分產(chǎn)生不同的折射率4固定的注意事項(xiàng)：

1、組織塊必須小而薄。2、固定液對(duì)組織有收縮及硬化作用，亦有使組織膨脹的作用。3、組織固定，注意掌握時(shí)間。4、組織干涸后再作固定，細(xì)胞因而收縮過甚，細(xì)胞擠成長(zhǎng)條，造成人為變態(tài)，失去病理診斷價(jià)值。固定的注意事項(xiàng)：5常用固定液甲醛

俗稱福爾馬林，久存則氧化產(chǎn)生甲酸，呈酸性，酸性的甲醛使標(biāo)本嗜染酸性，嚴(yán)重時(shí)可影響細(xì)胞核的嗜堿性染色，故最好用中性福爾馬林。組織固定和標(biāo)本保存常用10%福爾馬林液。常用固定液6

配法：(PH7.0~7.2)

甲醛100mlNaH2PO4·2H2O5.2g或無(wú)水4.0gNa2HPO4·12H2O16.4g或無(wú)水6.5g蒸餾水900ml

配法：(PH7.0~7.2)7三、脫水

組織脫水，就是把組織內(nèi)的水分徹底除掉，故亦稱無(wú)水法。無(wú)論任何組織都含有不同程度的水分。一般組織經(jīng)過固定和水洗進(jìn)行石蠟包埋，而水與石蠟不能相混合，所以在浸蠟、包埋前，必須將組織內(nèi)所含的水分脫去。脫水劑必須與水在任何比例均能混合的液體，最常用的脫水劑是酒精。三、脫水8酒精

高濃度酒精對(duì)組織有強(qiáng)烈收縮及脆化的缺點(diǎn)。因此，在以酒精作為脫水劑時(shí)，應(yīng)該先從濃度較低的酒精開始，然后遞增其濃度，即由稀而濃，使逐漸脫掉組織中的水分，這樣可避免組織過度的收縮。酒精9四、透明

石蠟切片，組織既要脫水，又要經(jīng)過透明步驟。目的是要使石蠟滲入組織。透明劑不僅有脫酒精的作用，也能溶解石蠟，與石蠟混合能幫助石蠟滲入組織。起到充分支持作用，使其硬度均勻，切片完整。四、透明10二甲苯、苯、甲苯

三者都是揮發(fā)性無(wú)色透明液，能溶于酒精，亦能溶解石蠟，為良好透明劑，尤以二甲苯為常用。組織脫水后，直接投入透明劑，能使組織透明，又可使組織收縮和硬化，故透明時(shí)間不宜過長(zhǎng)。二甲苯常為30分鐘至2小時(shí)。二甲苯、苯、甲苯11五、浸蠟

浸蠟是將石蠟滲入組織中，充分填充，使其硬度均勻，切片完整。組織塊首要徹底脫水，才能充分透明；組織愈透明，則石蠟滲透愈速，就更利于切片。五、浸蠟12六、包埋

石蠟包埋主要將組織飽浸于石蠟中，通常浸蠟和包埋蠟加1~2%蜂蠟，增加粘性。七、切片厚度為5μm六、包埋13八、染色目的：組織通過固定、脫水、包埋、切片等一系列的過程后，制成切片，如果不經(jīng)過任何染色，在顯微鏡下只能看到極其簡(jiǎn)單的組織結(jié)構(gòu)和輪廓，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足診斷的要求。用染色的方法顯示切片的組織和細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)，通過組織和細(xì)胞的形態(tài)變化來研究其變化的發(fā)生和發(fā)展。八、染色14染料的性質(zhì)和類別：

染料是一類有色的有機(jī)化合物，不但要有鮮艷的色彩，而且對(duì)于纖維或組織必須具有親和力。按染料來源分為：1、天然染料；主要有蘇木素、胭脂紅等。2、人工染料；主要有苦味酸、甲苯胺藍(lán)、伊紅Y、等。染料的性質(zhì)和類別：15按染料用途分為：1、細(xì)胞核染料；常為堿性，如蘇木素、結(jié)晶紫、甲苯胺藍(lán)等。2、細(xì)胞漿染料：常為酸性，如伊紅Y、苦味酸、酸性品、紅等。3、脂肪染料：如蘇丹黑、油紅O等。按染料用途分為：16九、封固

中性樹膠作封固劑，將中性樹膠滴于切片上，并用蓋玻片蓋在切片面。封固后平置于干燥、陰涼處，以便久存。九、封固17

石蠟制片程序：取材→固定→脫水→透明→

浸蠟→包埋→切片→染色→封固石蠟制片程序：18皮膚標(biāo)本常規(guī)石蠟制片過程：固定10%中性福爾馬林4小時(shí)以上脫水80%酒精4小時(shí)95%酒精I(xiàn)4小時(shí)95%酒精I(xiàn)I過夜或5小時(shí)100%酒精I(xiàn)1小時(shí)100%酒精I(xiàn)I1小時(shí)透明二甲苯45分鐘~1小時(shí)浸蠟3~4小時(shí)包埋切片5微米染色皮膚標(biāo)本常規(guī)石蠟制片過程：19

切片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（100分）

切片完整10分沒有刀痕5分厚薄均勻10分（一層細(xì)胞）附貼適量5分平坦無(wú)褶10分

切片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（100分）20樹膠適量5分染色鮮艷10分對(duì)比清晰10分透明度好10分片內(nèi)無(wú)污染10分無(wú)“人工”現(xiàn)象5分玻片整潔5分標(biāo)簽端正5分樹膠適量5分21常規(guī)染色常規(guī)染色22HE染色（蘇木素伊紅染色法）染色方法：

二甲苯I20分鐘二甲苯II20分鐘95%酒精二浸次95%酒精二浸次80%酒精二浸次水洗蘇木素10~15分鐘水洗1%鹽酸酒精1~2分鐘HE染色（蘇木素伊紅染色法）23

水洗后浸15分鐘伊紅30秒~1分鐘水洗一浸次80%酒精一浸次95%酒精I(xiàn)一浸次95%酒精I(xiàn)I一浸次100%酒精I(xiàn)一浸次100%酒精I(xiàn)I一浸次二甲苯I一浸次二甲苯II一浸次中性樹膠封固水洗后浸15分鐘24

Ehrlich氏蘇木素蘇木素2g無(wú)水酒精100ml甘油100ml冰醋酸10ml蒸餾水100ml硫酸鋁鉀2~3g皮膚組織病理切片技術(shù)課件25一般醫(yī)院病理科用Harris蘇木素染細(xì)胞核。Harris蘇木素因含有氧化汞，配制時(shí)，加熱沸騰時(shí)容易噴出，危險(xiǎn)期大，而Ehrlich蘇木素安全性好；Ehrlich蘇木素呈蘭褐色，色彩鮮艷，染料使用時(shí)間長(zhǎng)，可達(dá)3~4個(gè)月，染色穩(wěn)定。鹽酸酒精分化時(shí)，Harris蘇木素分化短，數(shù)十秒~1分鐘，略長(zhǎng)時(shí)染色淡；而Ehrlich蘇木素分化時(shí)間可長(zhǎng)可短，間隔可達(dá)1~5分鐘，不影響染色結(jié)果。

一般醫(yī)院病理科用Harris蘇木素染細(xì)胞26結(jié)果：細(xì)胞核呈藍(lán)色，細(xì)胞漿及其他組織呈紅色。結(jié)果：27

特殊染色

特殊染色

28

組織切片經(jīng)HE染色法染色，其基本形態(tài)、組織變化及組織產(chǎn)物都可顯示出來。而組織中有些特殊結(jié)構(gòu)，如膠元纖維、彈力纖維、糖、脂肪、真菌孢子、神經(jīng)等，在HE染色下不能明顯區(qū)別，需通過不同的特殊染色方法，顯示其特有的結(jié)構(gòu)和色彩加以區(qū)別，特殊染色對(duì)病理診斷有極其重要的意義?，F(xiàn)介紹皮膚組織常用的幾種特殊染色方法：組織切片經(jīng)HE染色法染色，其基本形態(tài)、組織變29一、V—G法（膠元纖維染色法）

結(jié)締組織含有三種纖維，即膠原纖維、網(wǎng)狀纖維、彈力纖維。膠原纖維在結(jié)締組織中含量最多，起支持作用，具有一定的韌性和堅(jiān)固性，抗拉力強(qiáng)的特點(diǎn)。膠原纖維染色在病理診斷上主要用于和肌纖維的鑒別。常用的膠原纖維染色方法為V—G法。結(jié)果：細(xì)胞核藍(lán)黑色或黑色，膠原纖維紅色，肌纖維、細(xì)胞漿、紅血球呈黃色。一、V—G法（膠元纖維染色法）30二、彈力纖維染色

彈力纖維具有彈性，可以伸達(dá)原長(zhǎng)的一倍半。彈力纖維比膠原纖維細(xì)，纖維分支，交織成網(wǎng)。彈力纖維由集合成束的彈力微原纖維和均質(zhì)狀的彈力蛋白組成，能抵抗沸水、弱酸及堿的溶解，但可被胃液、胰液消化。二、彈力纖維染色31

在HE染色中，彈力纖維和膠原纖維相似，都著染紅色，二者較難區(qū)別，若用特殊染色方法可區(qū)別二者，常用的彈力纖維法有間苯二酚、地衣紅法等。間苯二酚法結(jié)果：彈力纖維呈深藍(lán)黑色，膠原纖維呈紅色肌纖維和紅細(xì)胞呈黃色。在HE染色中，彈力纖維和膠原纖維相似，都32三、PAS染色法：

亞硫酸氫鈉遇鹽酸產(chǎn)生亞硫酸氣體，鹽基品紅在亞硫酸氣體的作用下變?yōu)闊o(wú)色品紅。高碘酸是一種氧化劑，它能破壞多糖類結(jié)構(gòu)的碳鍵，使多糖分子的乙二醇或氨羥基的碳鍵打開，生成醛類化合物，游離的醛基與無(wú)色品紅作用生成新的紅色復(fù)合物，稱為雪夫氏（Schiff）反應(yīng)。結(jié)果：基底膜、真菌、Paget細(xì)胞呈紅色，細(xì)胞核呈藍(lán)色。三、PAS染色法：33皮膚組織病理切片技術(shù)課件34四、Giemsa染色、甲苯胺藍(lán)法：

在皮膚病病理診斷中，常用此二法染肥大細(xì)胞，肥大細(xì)胞呈園形、卵園形或長(zhǎng)形，細(xì)胞漿內(nèi)含有嗜堿性粗顆粒，若用Giemsa及甲苯胺藍(lán)染色，則顆粒具有異染性而呈紫紅色，不呈藍(lán)色。五、結(jié)晶紫染色

淀粉樣蛋白成分為90%淀粉樣原纖維蛋白，10%糖蛋白。對(duì)結(jié)晶紫有異染性呈紫紅色。四、Giemsa染色、甲苯胺藍(lán)法：35六、阿爾新蘭(alcianblue)染色法

阿爾新蘭是一類銅酞花青染料，易溶于水，因含銅而呈藍(lán)色，阿爾新蘭與組織內(nèi)含有陰離子基團(tuán)，如酸性粘多糖的羧基形成不溶性的復(fù)合物。即染料中帶正電荷的鹽鍵與酸性粘液中帶負(fù)電荷的酸性基團(tuán)結(jié)合呈藍(lán)色，其結(jié)合與PH值有關(guān)，常采用PH2.5或PH1.0。

六、阿爾新蘭(alcianblue)染色法36皮膚組織病理切片技術(shù)課件37皮膚組織病理切片技術(shù)課件38七、抗酸染色

抗酸桿菌屬分枝桿菌，由于菌體壁上含有類脂，一般不易著色，但一經(jīng)著染后可抵抗酸的脫色作用，故稱抗酸染色。常見的抗酸桿菌為結(jié)核桿菌和麻風(fēng)桿菌。八、含鐵血黃素染色法

含鐵血黃素是一種血紅蛋白源性色素，為金黃色或黃棕色，由氫氧化鐵和鐵蛋白組織的復(fù)合物。由于鐵蛋白的分子含有高鐵鹽，用亞鐵氰化鉀和鹽酸處理后產(chǎn)生藍(lán)色，呈普魯士藍(lán)反應(yīng)。七、抗酸染色39皮膚組織病理切片技術(shù)課件40皮膚組織病理切片技術(shù)課件41

謝謝謝謝42皮膚組織病理切片技術(shù)皮膚組織病理切片技術(shù)43一、取材1、手術(shù)取材。適用于：（1）面部、關(guān)節(jié)部，易出血部位等；（2）較大、較深的皮疹；（3）結(jié)節(jié)和囊腫性皮疹；（4）切除治療和檢查，主要用于小的腫瘤。2、鉆孔取材。（角膜鉆孔器）適用于一般的皮疹取材。一、取材44二、固定

固定的作用和目的：1、可以防止組織溶解及腐敗。2、使細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、脂肪、糖、酶等各種成分沉淀保存下來，保持它原有的結(jié)構(gòu)與生活時(shí)相仿。二、固定45

3、因沉淀及凝固的關(guān)系使細(xì)胞內(nèi)成分產(chǎn)生不同的折射率，造成光學(xué)上的差異，使得在生活情況下原來看不清楚的結(jié)構(gòu)變得清晰起來了，并使得細(xì)胞各部分容易染色。4、固定劑兼有硬化作用，使組織硬化，增加組織硬度，使組織不易變形，在制片過程中，可減少繼續(xù)收縮。因此，固定是制片過程中的一個(gè)重要程序。3、因沉淀及凝固的關(guān)系使細(xì)胞內(nèi)成分產(chǎn)生不同的折射率46固定的注意事項(xiàng)：

1、組織塊必須小而薄。2、固定液對(duì)組織有收縮及硬化作用，亦有使組織膨脹的作用。3、組織固定，注意掌握時(shí)間。4、組織干涸后再作固定，細(xì)胞因而收縮過甚，細(xì)胞擠成長(zhǎng)條，造成人為變態(tài)，失去病理診斷價(jià)值。固定的注意事項(xiàng)：47常用固定液甲醛

俗稱福爾馬林，久存則氧化產(chǎn)生甲酸，呈酸性，酸性的甲醛使標(biāo)本嗜染酸性，嚴(yán)重時(shí)可影響細(xì)胞核的嗜堿性染色，故最好用中性福爾馬林。組織固定和標(biāo)本保存常用10%福爾馬林液。常用固定液48

配法：(PH7.0~7.2)

甲醛100mlNaH2PO4·2H2O5.2g或無(wú)水4.0gNa2HPO4·12H2O16.4g或無(wú)水6.5g蒸餾水900ml

配法：(PH7.0~7.2)49三、脫水

組織脫水，就是把組織內(nèi)的水分徹底除掉，故亦稱無(wú)水法。無(wú)論任何組織都含有不同程度的水分。一般組織經(jīng)過固定和水洗進(jìn)行石蠟包埋，而水與石蠟不能相混合，所以在浸蠟、包埋前，必須將組織內(nèi)所含的水分脫去。脫水劑必須與水在任何比例均能混合的液體，最常用的脫水劑是酒精。三、脫水50酒精

高濃度酒精對(duì)組織有強(qiáng)烈收縮及脆化的缺點(diǎn)。因此，在以酒精作為脫水劑時(shí)，應(yīng)該先從濃度較低的酒精開始，然后遞增其濃度，即由稀而濃，使逐漸脫掉組織中的水分，這樣可避免組織過度的收縮。酒精51四、透明

石蠟切片，組織既要脫水，又要經(jīng)過透明步驟。目的是要使石蠟滲入組織。透明劑不僅有脫酒精的作用，也能溶解石蠟，與石蠟混合能幫助石蠟滲入組織。起到充分支持作用，使其硬度均勻，切片完整。四、透明52二甲苯、苯、甲苯

三者都是揮發(fā)性無(wú)色透明液，能溶于酒精，亦能溶解石蠟，為良好透明劑，尤以二甲苯為常用。組織脫水后，直接投入透明劑，能使組織透明，又可使組織收縮和硬化，故透明時(shí)間不宜過長(zhǎng)。二甲苯常為30分鐘至2小時(shí)。二甲苯、苯、甲苯53五、浸蠟

浸蠟是將石蠟滲入組織中，充分填充，使其硬度均勻，切片完整。組織塊首要徹底脫水，才能充分透明；組織愈透明，則石蠟滲透愈速，就更利于切片。五、浸蠟54六、包埋

石蠟包埋主要將組織飽浸于石蠟中，通常浸蠟和包埋蠟加1~2%蜂蠟，增加粘性。七、切片厚度為5μm六、包埋55八、染色目的：組織通過固定、脫水、包埋、切片等一系列的過程后，制成切片，如果不經(jīng)過任何染色，在顯微鏡下只能看到極其簡(jiǎn)單的組織結(jié)構(gòu)和輪廓，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足診斷的要求。用染色的方法顯示切片的組織和細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)，通過組織和細(xì)胞的形態(tài)變化來研究其變化的發(fā)生和發(fā)展。八、染色56染料的性質(zhì)和類別：

染料是一類有色的有機(jī)化合物，不但要有鮮艷的色彩，而且對(duì)于纖維或組織必須具有親和力。按染料來源分為：1、天然染料；主要有蘇木素、胭脂紅等。2、人工染料；主要有苦味酸、甲苯胺藍(lán)、伊紅Y、等。染料的性質(zhì)和類別：57按染料用途分為：1、細(xì)胞核染料；常為堿性，如蘇木素、結(jié)晶紫、甲苯胺藍(lán)等。2、細(xì)胞漿染料：常為酸性，如伊紅Y、苦味酸、酸性品、紅等。3、脂肪染料：如蘇丹黑、油紅O等。按染料用途分為：58九、封固

中性樹膠作封固劑，將中性樹膠滴于切片上，并用蓋玻片蓋在切片面。封固后平置于干燥、陰涼處，以便久存。九、封固59

石蠟制片程序：取材→固定→脫水→透明→

浸蠟→包埋→切片→染色→封固石蠟制片程序：60皮膚標(biāo)本常規(guī)石蠟制片過程：固定10%中性福爾馬林4小時(shí)以上脫水80%酒精4小時(shí)95%酒精I(xiàn)4小時(shí)95%酒精I(xiàn)I過夜或5小時(shí)100%酒精I(xiàn)1小時(shí)100%酒精I(xiàn)I1小時(shí)透明二甲苯45分鐘~1小時(shí)浸蠟3~4小時(shí)包埋切片5微米染色皮膚標(biāo)本常規(guī)石蠟制片過程：61

切片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（100分）

切片完整10分沒有刀痕5分厚薄均勻10分（一層細(xì)胞）附貼適量5分平坦無(wú)褶10分

切片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（100分）62樹膠適量5分染色鮮艷10分對(duì)比清晰10分透明度好10分片內(nèi)無(wú)污染10分無(wú)“人工”現(xiàn)象5分玻片整潔5分標(biāo)簽端正5分樹膠適量5分63常規(guī)染色常規(guī)染色64HE染色（蘇木素伊紅染色法）染色方法：

二甲苯I20分鐘二甲苯II20分鐘95%酒精二浸次95%酒精二浸次80%酒精二浸次水洗蘇木素10~15分鐘水洗1%鹽酸酒精1~2分鐘HE染色（蘇木素伊紅染色法）65

水洗后浸15分鐘伊紅30秒~1分鐘水洗一浸次80%酒精一浸次95%酒精I(xiàn)一浸次95%酒精I(xiàn)I一浸次100%酒精I(xiàn)一浸次100%酒精I(xiàn)I一浸次二甲苯I一浸次二甲苯II一浸次中性樹膠封固水洗后浸15分鐘66

Ehrlich氏蘇木素蘇木素2g無(wú)水酒精100ml甘油100ml冰醋酸10ml蒸餾水100ml硫酸鋁鉀2~3g皮膚組織病理切片技術(shù)課件67一般醫(yī)院病理科用Harris蘇木素染細(xì)胞核。Harris蘇木素因含有氧化汞，配制時(shí)，加熱沸騰時(shí)容易噴出，危險(xiǎn)期大，而Ehrlich蘇木素安全性好；Ehrlich蘇木素呈蘭褐色，色彩鮮艷，染料使用時(shí)間長(zhǎng)，可達(dá)3~4個(gè)月，染色穩(wěn)定。鹽酸酒精分化時(shí)，Harris蘇木素分化短，數(shù)十秒~1分鐘，略長(zhǎng)時(shí)染色淡；而Ehrlich蘇木素分化時(shí)間可長(zhǎng)可短，間隔可達(dá)1~5分鐘，不影響染色結(jié)果。

一般醫(yī)院病理科用Harris蘇木素染細(xì)胞68結(jié)果：細(xì)胞核呈藍(lán)色，細(xì)胞漿及其他組織呈紅色。結(jié)果：69

特殊染色

特殊染色

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組織切片經(jīng)HE染色法染色，其基本形態(tài)、組織變化及組織產(chǎn)物都可顯示出來。而組織中有些特殊結(jié)構(gòu)，如膠元纖維、彈力纖維、糖、脂肪、真菌孢子、神經(jīng)等，在HE染色下不能明顯區(qū)別，需通過不同的特殊染色方法，顯示其特有的結(jié)構(gòu)和色彩加以區(qū)別，特殊染色對(duì)病理診斷有極其重要的意義?，F(xiàn)介紹皮膚組織常用的幾種特殊染色方法：組織切片經(jīng)HE染色法染色，其基本形態(tài)、組織變71一、V—G法（膠元纖維染色法）

結(jié)締組織含有三種纖維，即膠原纖維、網(wǎng)狀纖維、彈力纖維。膠原纖維在結(jié)締組織中含量最多，起支持作用，具有一定的韌性和堅(jiān)固性，抗拉力強(qiáng)的特點(diǎn)。膠原纖維染色在病理診斷上主要用于和肌纖維的鑒別。常用的膠原纖維染色方法為V—G法。結(jié)果：細(xì)胞核藍(lán)黑色或黑色，膠原纖維紅色，肌纖維、細(xì)胞漿、紅血球呈黃色。一、V—G法（膠元纖維染色