免疫共沉淀(Immunoprecipitation,+IP)課件

免疫共沉淀(CO—immunoprecipitation)用抗體將相應(yīng)特定分子沉淀的同時(shí)，與該分子特異性結(jié)合的其他分子也會被帶著一起沉淀出來的技術(shù)。這種技術(shù)常用于驗(yàn)證蛋白質(zhì)之間相互特異性結(jié)合。免疫共沉淀可分為細(xì)胞內(nèi)過表達(dá)蛋白、細(xì)胞內(nèi)源性蛋白、組織內(nèi)蛋白的免疫共沉淀?；驹砑?xì)胞裂解物中加入抗體，這樣可與已知抗原形成特異的免疫復(fù)合物，若存在與已知抗原相互作用的蛋白質(zhì)，則免疫復(fù)合物中還應(yīng)包含這種蛋白質(zhì)；經(jīng)過洗脫，收集免疫復(fù)合物，然后分離該蛋白質(zhì)，對該蛋白質(zhì)進(jìn)行N端氨基酸序列分析，推斷出相應(yīng)的核苷酸序列。將包含活性物質(zhì)的組織或細(xì)胞構(gòu)建成cDNA文庫，以上述核苷酸序列為探針從cDNA文庫中分離出cDNA克隆。一、樣品處理：二、抗體-agarosebeads孵育三、抗體-agarosebeads復(fù)合物洗滌：四、鑒定免疫共沉淀技術(shù)的應(yīng)用腫瘤酶與病毒信號傳導(dǎo)寄生蟲免疫共沉淀技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)與局限性優(yōu)點(diǎn)：

與蛋白質(zhì)親和層析一樣，檢測的產(chǎn)物是蛋白質(zhì)的粗提物； 抗原與相互作用的蛋白以細(xì)胞中相類似的濃度存在，避免了過量表達(dá)所造成的人為效應(yīng)； 蛋白質(zhì)以翻譯后被修飾的天然狀態(tài)存在；

復(fù)合物以天然狀態(tài)存在，蛋白的相互作用可以在天然狀態(tài)下進(jìn)行，可以避免人為影響，可以分離得到天然狀態(tài)下相互作用的蛋白復(fù)合體.乙醇沉淀dna和異丙醇沉淀dna的區(qū)別

異丙醇和酒精都是有機(jī)溶劑，一般來講，提取質(zhì)粒的時(shí)候一開始都要用異丙醇沉淀，因?yàn)楫惐汲恋淼男Ч靡恍?，但最后大多用酒精沉淀，因?yàn)榫凭菀讚]發(fā)，對下游的實(shí)驗(yàn)影響小

。

異丙醇比較疏水，能很更好地沉淀核酸，用乙醇的目的是去鹽，它比異丙醇更親水，所以能去掉一些鹽離子。

有時(shí)還用70%的乙醇洗樣品也是為了增加鹽的溶解度。

在沉淀核酸時(shí)可用乙醇與異丙醇，乙醇的極性要強(qiáng)于異丙醇，所以一般用2倍體積乙醇沉淀，但在多糖、蛋白含量高時(shí)，用異丙醇沉淀可部分克服這種污染，尤其用異丙醇在室溫下沉淀對擺脫多糖、雜蛋白污染更為有效。

異丙醇沉淀核酸時(shí)，高濃度鹽存在將使大量多糖存在在溶液中，從而可