化妝品原料學(xué)

實(shí)驗(yàn)七天然活性組分的認(rèn)識(shí)實(shí)驗(yàn)——甘草黃酮提取及應(yīng)用一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握甘草黃酮類物質(zhì)的提取及分離提純?cè)砑安僮鞣椒ā?、掌握抗氧化活性檢測(cè)的一般方法。3、了解甘草黃酮在化妝品中的應(yīng)用。二、實(shí)驗(yàn)原理現(xiàn)代藥理研究結(jié)果表明，甘草中黃酮類化合物具有較強(qiáng)的生理活性，具有抗炎、抗病毒、利膽、強(qiáng)心、鎮(zhèn)靜和鎮(zhèn)痛等功效，是一種有效的活性成分，具有許多潛在的藥用價(jià)值，如抗腫瘤作用，抗氧化作用，抗菌作用，抗病毒作用，抗心律失常作用，保肝及對(duì)消化系統(tǒng)的其它作用，抗炎和抗變態(tài)反應(yīng)作用，對(duì)酶的抑制作用等。微波輔助溶劑提取法微波可直接作用于分子，使其熱運(yùn)動(dòng)加劇，溫度升高，這種熱效應(yīng)使微波穿透到介質(zhì)內(nèi)部，加速細(xì)胞壁的破壞，使甘草黃酮類物質(zhì)更快地被分離提取出來(lái)，再輔以極性溶劑提取，可以更高效的提取甘草中的有效物質(zhì)。三、儀器和試劑1、儀器：10mL容量瓶10個(gè)、刻度試管若干、紫外-可見分光光度計(jì)、燒杯、移液槍、冰箱、離心機(jī)、分析天平、量筒、粉碎機(jī)、80目篩子、微波爐、大孔吸附樹脂裝置2、試劑：甘草、蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品、無(wú)水乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、蒸餾水、甘油、乙?；蛎?、十六醇、單硬脂酸甘油脂、聚氧乙烯山梨醇蜂蠟衍生物、PEG-5蓖麻油、液狀石蠟、香精、抗氧劑、純化水、DPPH溶液：稱取0.0394gDPPH用95%乙醇定容至100mL（濃度為1×10-3mol／L），于0～4℃存放，使用時(shí)稀釋至1×10-4mol／L四、操作步驟1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品19.5mg，加入80%乙醇適量配成濃度為0.975mg/mL的的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液，精密量取標(biāo)準(zhǔn)溶液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9mL于20mL刻度試管中，各加入5%的亞硝酸鈉溶液0.5mL，6min后加入10%的硝酸鋁溶液0.5mL，放置6min，加入5%NaOH溶液5mL，混合均勻，15min后用水定容至10mL，用紫外-可見分光光度計(jì)在510nm處測(cè)吸光值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。2、甘草黃酮的粗提：(1)甘草磨碎成粉，80目過(guò)篩備用。(2)稱取2.000g甘草細(xì)粉，按照固液比1:10加入80%乙醇20mL，混合均勻，浸泡1h。(3)微波功率420W條件下提取50s，加壓過(guò)濾得濾液?；蛘撸?1)甘草磨碎成粉，80目過(guò)篩備用。(2)稱取2.000g甘草細(xì)粉，按照固液比1:10加入80%乙醇20mL，混合均勻，浸泡1h。(3)微波中高火輻照4min，1400r/min離心3min取上清，提取三次。3、提取物的抗氧化活性測(cè)定取2mLDPPH溶液，然后加入甘草黃酮提取物溶液2mL，充分混合，在室溫下靜止30min。在最大波長(zhǎng)(517nm)處，測(cè)定各吸光度(A)。以95%乙醇溶液為空白調(diào)零，每一吸光度平行測(cè)3次，取其平均值。4、大孔吸附樹脂對(duì)甘草黃酮的提純操作流程：樹脂預(yù)處理裝柱上樣洗脫再生樹脂預(yù)處理：裝柱前應(yīng)將大孔樹脂放在燒杯中并加入足量的去離子水，使其溶脹至體積不再增加為止，以除去樹脂內(nèi)殘存的致孔劑及低聚物。將濕態(tài)樹脂裝柱后，先用水漂洗，再加入高于樹脂層10cm裝柱：充分吸脹的樹脂在攪拌下倒入層析柱(80×1500mm)中，裝柱后液體必須高于樹脂20～40mm。上樣：將甘草乙醇提取物加適量去離子水稀釋后上樣至經(jīng)過(guò)預(yù)處理的大孔吸附樹脂柱，調(diào)節(jié)柱層析流出速度大約15mL·min-1，流出液收集備用。洗脫：先用去離子水洗脫，再用體積分?jǐn)?shù)分別為30%、40%、50%和95%的乙醇梯度洗脫，流出液以500mL瓶收集。再生：待分離的樣品經(jīng)大孔樹脂分離后，會(huì)有許多雜質(zhì)被吸附在柱填料中，降低其吸附能力，故使用一段時(shí)間后需要再生。使用到終點(diǎn)后，自下而上逆流通水進(jìn)行反洗，除去雜質(zhì)，松動(dòng)樹脂層，然后自上而下通入再生劑1mol·L-1NaOH進(jìn)行再生，用量為2~3倍于樹脂體積約1600mL，流速為5~10mL·min-1，再用去離子水洗至中性。最后，通過(guò)減壓蒸餾進(jìn)行濃縮。5、甘草黃酮面霜的制作配方（重量%）：原料w/w（%）功能十六-十八醇（鯨蠟硬脂醇）3.5固態(tài)油脂羊毛脂2.0固態(tài)油脂白油（液體石蠟）4.0液態(tài)油脂BHT（2,6二叔丁基對(duì)甲基苯酚）0.05抗氧化劑單甘酯（單硬脂酸甘油酯）1.0乳化劑甘油5.0保濕劑去離子水To100溶劑甘草提取物6.0活性成分香精1粒營(yíng)養(yǎng)成分GPL（DMDM乙內(nèi)酰脲）0.05防腐劑將甘油加入純化水中加熱至85℃即為水相。羊毛脂、十六醇、單硬脂酸甘油脂、液體石蠟在同一容器中加熱至80℃即為油相，將油相加入水相中，攪拌十分鐘。降至45℃加入甘草提取物及香精、抗氧劑攪拌，降至五、計(jì)算1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度（c，mg/mL）與吸光度（A）進(jìn)行線性擬合，以總黃酮（蘆?。┖繛閤軸，吸光值為y軸。（1）甘草黃酮含量計(jì)算取0.6mL提取液，測(cè)定其510nm處的吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線算出比色液中總黃酮的含量，按下式計(jì)算甘草粉中甘草總黃酮的含量：ω=[V×(y+0.0508)/10.866]/(v×m×1000)×100%式中：y為提取液比色液的吸光值；V為提取液總體積，mL；v為移取提取液的體積，mL（本實(shí)驗(yàn)過(guò)程中提取液顯色時(shí)未特別注明時(shí)取0.6mL）；m為所稱甘草粉的質(zhì)量，g。甘草提取液黃酮含量計(jì)算：合并提取液定容，取樣測(cè)吸光度，對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算黃酮含量。3、DPPH自由基清除率計(jì)算抑制率(％)=[1－(Ai—Aj)／Ao]×100％Ai——2mLDPPH溶液+2mL甘草黃酮提取物溶液吸光度值A(chǔ)j——2mL乙醇溶液+2mL甘草黃