恩諾沙星緩釋注射液的研制及在豬體內(nèi)的藥動學(xué)研究幻燈片

恩諾沙星緩釋注射液的研制及

在豬體內(nèi)的藥動學(xué)研究研究生：祝萬菊指導(dǎo)教師：鄧旭明教授指導(dǎo)小組：高豐副教授閻繼業(yè)教授Preparationof

EnrofloxacinSustained-releaseInjectionandPharmacokineticsinSwine

前言

緩釋制劑系指用藥后能在較長時間內(nèi)持續(xù)釋放藥物以達(dá)到長效作用的制劑?？咕幹瞥删忈寗┖笥幸韵聝?yōu)點(diǎn)：可減少服藥次數(shù)，提高病患的順應(yīng)性；可延長維持有效濃度以上的時間，使殺菌效果更好；有利于降低藥物的毒副作用；使血藥濃度平穩(wěn)，避免峰谷現(xiàn)象；可減少用藥總劑量，因此可用最小劑量達(dá)到最大藥效。

恩諾沙星作為第一個畜禽專用的氟喹諾酮類藥物，具有抗菌譜廣，殺菌活性強(qiáng)，有效濃度低、分布廣泛、與其他抗菌藥物無交叉耐藥性等特點(diǎn)，臨床用于預(yù)防和治療禽類、豬、牛及小動物細(xì)菌性感染均取得良好效果。

但目前仍普遍使用其常規(guī)制劑，給藥方案為一日2次連用3天，用藥不方便，且浪費(fèi)人力、時間，若制成長效制劑則可克服上述缺點(diǎn)。

前言

本研究旨在開發(fā)一種易于工業(yè)化生產(chǎn)，且安全、穩(wěn)定的注射用溶液型恩諾沙星緩釋劑。該緩釋劑的研究開發(fā)一方面可擴(kuò)大恩諾沙星的應(yīng)用范圍，提高藥效和安全度，減少不良反應(yīng)；另一方面能夠方便養(yǎng)殖戶給藥，降低飼養(yǎng)成本。因而本研究具有重要的理論意義和實(shí)際應(yīng)用價值。研究的目的和意義主要研究內(nèi)容1.通過處方篩選、優(yōu)化，制備恩諾沙星緩釋注射液

2.考察制劑的穩(wěn)定性

3.研究緩釋注射液在健康豬體內(nèi)的藥物動力學(xué)和生物利用度方法表1三因素三水平表

Tab1ThreeFactorsandthreeLevels

2.處方優(yōu)化

水平因素A（煙酰胺）B（Na2S2O3）C（EDTA-2Na）1231%2.5%5%0.05%0.1%0.2%0.01%0.025%0.05%表2（L9）33正交表Tab2（L9）33Orthogonaltable處方號A（煙酰胺）B（Na2S2O3）C（EDTA-2Na）①212②313③132④233⑤111⑥221⑦123⑧331⑨322方法結(jié)果處方篩選結(jié)果

原輔料配伍試驗(yàn)結(jié)果：所試9種輔料與恩諾沙星均無明顯配伍變化。藥液pH值范圍預(yù)試結(jié)果：恩諾沙星在氫氧化鈉作用下能溶解，但pH值需達(dá)到11.0以上。＊＊延效劑篩選結(jié)果：恩諾沙星與PVP配成的溶液顏色、澄明度均較好。

＊

助溶劑篩選結(jié)果：加煙酰胺后有較好助溶作用且藥液顏色、紫外吸收峰位與未加助溶劑無明顯變化。＊結(jié)果處方優(yōu)化結(jié)果

表39種處方評分結(jié)果Tab3ScoringresultofOptimizingPrescription

處方號pH下降值得分含量下降值得分顏色得分總分①211518②312520③2259④2158⑤28515⑥23510⑦16512⑧2103⑨34512

表4

正交試驗(yàn)的方差分析結(jié)果Tab4AnalysisofvarianceforOrthogonalTest

結(jié)果

因素自由度均方F值P值主效應(yīng)A2.111.036.966B291.44429.393.033*C214.7784.750.174交互效應(yīng)A*B0...B*C0...A*C0...表5B因素各水平間的多重比較Tab5MultipleComparisonsofBetween-LevelsofFactorB結(jié)果水平(I)水平(J)均數(shù)差值(I-J)P值

差值的95%可信區(qū)間下限上限126.333.048*.13712.530

311.000.017*4.80317.19721-6.333.048*-12.530-.137

34.667.083-1.53010.86331-11.000.017*-17.197-4.803

2-4.667.083-10.8631.5301.處方中主藥含量的確定依據(jù)為保證在減少給藥次數(shù)后仍能在一定時間維持有效血藥濃度，在使用劑量相同時緩釋劑一次給藥量相當(dāng)于普通制劑兩天給藥總劑量，因而本緩釋注射液的含量為10%。PVP含量低于10%溶液粘度與水相同，含量過高則有可能導(dǎo)致吸收速度太慢，因此PVP濃度定為10%。討論討論2.處方中添加附加成分的理論依據(jù)

氟喹諾酮類藥物遇金屬離子易變色而使藥效降低，因此加入金屬鏊合劑；恩諾沙星易被氧化變質(zhì)，且因藥液呈堿性，所以加Na2S2O3作抗氧劑。單用氫氧化鈉pH值需達(dá)到11.0以上恩諾沙星才能完全溶解，堿性太強(qiáng)不符合注射劑要求；而且試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在貯存過程中pH值逐漸下降，所以加入煙酰胺既起到助溶作用又能穩(wěn)定藥液的pH值。實(shí)驗(yàn)二恩諾沙星緩釋注射液的穩(wěn)定性試驗(yàn)方法

1.初均速法預(yù)測有效期

在60、65、70、75、80、85、90℃7個加速穩(wěn)定性試驗(yàn)溫度下，每個加速溫度放恩諾沙星緩釋注射液樣品6支，經(jīng)12、11、10、9、8、7、6h加速分解后，立即取出于冰浴中終止反應(yīng)，測定其恩諾沙星含量。

2.穩(wěn)定性考察試驗(yàn)

方法＊加速試驗(yàn)

將本品三批模擬上市包裝，置于溫度（40±2）℃、相對濕度（75±5）%的條件下放置六個月，每月取樣一次,考查外觀性狀、澄明度、含量、pH值等項(xiàng)目。＊光加速試驗(yàn)

取本品三批，裝入無色透明容器中，放置在光櫥內(nèi)于照度（4500±500）lx的條件下放置10天，于第五、十天取樣,考查外觀性狀、澄明度、含量、pH值等變化情況。＊長期試驗(yàn)取本品三批按上市包裝，在溫度（25±2）℃，相對濕度（60±5）%的條件下放置12個月。每3個月取樣一次，對外觀性狀、澄明度、含量、pH值等項(xiàng)目進(jìn)行考查。

結(jié)果表不同溫度下恩諾沙星分解的初均速組別θ(℃)T/K1/T×103t(h)殘存率(c/%)ν0=(100-c%)/tlgν0160333.23.0011299.750.0208-1.6812265338.22.9571199.540.0418-1.3786370343.22.9141099.320.0680-1.1675475348.22.872999.090.1011-0.9952580353.22.831898.840.1450-0.8386685358.22.792798.490.2157-0.6661790363.22.753698.140.3100-0.5086

有效期預(yù)測結(jié)果

以lgν0對1/T作線性回歸，得方程lgν0=12.087-4564.772/T,|r|=0.995。以室溫T=298.2K與ν0=（100-90）/t0.9代入回歸方程，求得25℃有效期t0.9=23個月。

結(jié)果穩(wěn)定性考查結(jié)果

在40℃條件下保存六個月、常溫保存一年，恩諾沙星緩釋注射液的顏色、澄明度無明顯變化，PH值下降幅度不大（<0.3），常溫放置含量下降不到1.5%，高溫使含量下降速度加快，但仍未超過3%。本品在強(qiáng)光照射下10天顏色即變深，含量下降2-3個百分點(diǎn)。

討論關(guān)于初均速法預(yù)測有效期

初均速法取樣點(diǎn)在反應(yīng)初期，可排除反應(yīng)后期副反應(yīng)的干擾，且因增加了加速實(shí)驗(yàn)的溫度數(shù)而提高了所推算有效期的精確度；另外采用此法簡便，在每個加速穩(wěn)定性試驗(yàn)溫度下，只需在反應(yīng)初階段取樣分析1次，實(shí)驗(yàn)工作量及數(shù)據(jù)處理均大大減少。應(yīng)用本方法預(yù)測恩諾沙星緩釋注射液的有效期為23個月，表明該制劑較穩(wěn)定，處方合理，質(zhì)量可靠。關(guān)于制劑的穩(wěn)定性

討論

本品在室溫條件下放置一年各考察指標(biāo)均十分穩(wěn)定，由于時間有限沒有繼續(xù)考察至兩年，但在高溫（40℃）放置六個月的樣品色澤、pH值、含量、澄明度等均無明顯變化，即相當(dāng)于本品在室溫放置兩年內(nèi)質(zhì)量穩(wěn)定。這與有效期預(yù)測結(jié)果（23個月）是一致的。高溫使含量下降速度加快，光照十天顏色明顯加深，提示長期貯存應(yīng)置于陰涼、避光處。實(shí)驗(yàn)三恩諾沙星緩釋注射液在健康豬體內(nèi)的藥動學(xué)研究方法動物分組與給藥血樣采集血樣前處理色譜條件預(yù)試樣品測定數(shù)據(jù)處理空白血漿色譜圖ChromatigramofblandPlasma

內(nèi)標(biāo)色譜圖ChromatigramofInternalStandard

結(jié)果1.色譜圖

結(jié)果1.色譜圖

藥物（恩諾沙星）色譜圖ChromatigramofDrug(Enrofloxacin)測定樣品色譜圖

ChromatigramofDetectedSample結(jié)果2.藥時曲線圖

豬靜注、肌注恩諾沙星普通注射液和肌注恩諾沙星緩釋注射液的藥時曲線圖concentration-TimeCurveofenrofloxacinafterintravenousandintrmusculoradministrationtoswines結(jié)果參數(shù)單位參數(shù)值(平均值±標(biāo)準(zhǔn)差，n=6)靜注恩諾沙星普通注射液肌注恩諾沙星普通注射液肌注恩諾沙星緩釋注射液t1/2Kah

0.415±0.1950.468±0.114t1/2αh0.726±0.1643.036±0.7562.921±0.99t1/2βh9.083±1.1219.460±2.94625.818±6.528﹡﹡Tmaxh

1.347±0.3931.498±0.194Cmaxμg/ml

2.561±0.1522.206±0.555VlL/kg1.795±0.171

VdL/kg4.364±0.565

ClBL·kg-1·h-10.336±0.053

AUCmg·L-1·h30.397±4.89518.397±1.80823.715±3.528﹡﹡F%

60.52±5.9578.02±11.61﹡﹡3.藥動學(xué)參數(shù)

討論1.恩諾沙星緩釋注射液在豬體內(nèi)的藥動學(xué)特征

豬肌注恩諾沙星緩釋注射液的t1/2Ka為0.468h、Tmax為1.498h，與肌注普通注射液的t1/2Ka0.415h、Tmax1.347h相比無顯著性差異；而與國內(nèi)報道的恩諾沙星混懸液的t1/2Ka1.25h、Tmax5.14h相比則差異顯著，說明該緩釋劑與普通制劑一樣可以迅速達(dá)到峰濃度，具速釋作用。血藥峰值Cmax2.206μg/ml與普通注射液Cmax2.561μg/ml相比也沒有顯著降低，這是該制劑不同于其它劑型緩釋劑的又一特點(diǎn)。

討論

豬肌注緩釋注射液的t1/2β為25.82h，比肌注相同劑量的普通注射液的t1/2β9.46h延長了15h，二者差異極顯著，說明緩釋注射液的消除速度明顯減慢。從藥時數(shù)據(jù)也可以看出，前者在豬體內(nèi)維持有效濃度的時間顯著延長。緩釋注射液的AUC和生物利用度與普通注射液相比差異顯著，相對生物利用度為128.9%。說明恩諾沙星制成緩釋注射液后生物利用度得到提高。

討論

豬單劑量肌注緩釋注射液(10mg/kg)，血藥濃度在0.5h即可達(dá)到1.42μg/ml，1.5h達(dá)高峰。資料顯示恩諾沙星對支原體和葡萄球菌的MIC均小于1μg/ml，由此可以推斷，肌注本緩釋注射液對豬支原體、葡萄球菌感染在0.5h內(nèi)即可充分發(fā)揮治療效果，具有速效作用。達(dá)到峰濃度后緩慢下降，給藥后36h血藥濃度仍達(dá)到0.16μg/ml，可見該緩釋劑