多聚酶鏈式反應擴增dna片段教案

多聚酶鏈式反響擴增dna片段教課方案多聚酶鏈式反響擴增dna片段教課方案多聚酶鏈式反響擴增dna片段教課方案?多聚酶鏈式反響擴增DNA片段?教課方案教課目的〔一〕知識與技術1、認識PCR技術的根本操作2、理解PCR的原理3、議論PCR的應用〔二〕過程與方法在多聚酶鏈式反響擴增DNA片段的實驗過程中，應防備外源DNA污染，嚴格控制溫度等反響條件〔三〕感情、態(tài)度與價值觀經(jīng)過對PCR實驗的操作及結果剖析，培育學生謹慎的科學態(tài)度和腳踏實地的科研精神教課重難點教課要點：PCR的原理和PCR的根本操作教課難點：PCR的原理教課工具多媒體教課過程〔一〕引入新課在現(xiàn)代生物技術中，DNA技術堪稱是尖端技術。人類基因組方案、基因工程、基因診療、基因檢測、古生物判定等都離不開對DNA分子堿基序列的剖析。而分DNA堿基序列，就需要必定量的DNA片段。如何快速獲取足夠量的DNA片段呢今日我們來研究學習DNA分子的擴增技術――PCR技術?！捕尺M行新課1．根基知識PCR技術擴增DNA的過程，與細胞內(nèi)DNA復制過程近似：1．1細胞內(nèi)DNA復制條件剖析：1．2細胞內(nèi)DNA復制過程1〕DNA的反向平行構造：〔聯(lián)合投影圖〕核苷酸分子的構造與方向性：〔分子構造模式圖〕由核苷酸經(jīng)過3,5-磷酸二酯鍵連結形成核苷酸長鏈：〔模式圖，表達方向性〕。DNA雙螺旋構造的反向平行構造：〔2〕DNA的復制過程:解旋：解旋酶、ATP，DNA兩條鏈打開，，形成兩條DNA單鏈。引物聯(lián)合：在DNA單鏈3’端與DNA反向配對聯(lián)合，保證引物3’端與DNA單鏈正確配對。DNA聚合酶聯(lián)合：子鏈合成：DNA聚合酶從引物3’端開始，將配對的脫氧核苷酸連結起來。后續(xù)加工：DNA聚合酶I將引物切去，并合成空缺處的DNA單鏈，再由DNA連結酶將不連續(xù)的DNA子鏈連結起來〔半不連續(xù)合成。先導鏈，滯后鏈〕子鏈合成特色：不可以從頭合成；合成方向為“5’→3’合成〞。感悟生命的神奇：DNA聚合酶不只可以催化磷酸二酯鍵的形成，還擁有校正功能。它在每引入一個核苷酸后都要復查一次，只有堿基配對無誤后才能持續(xù)往下聚合，它不可以從頭合成。RNA聚合酶沒有校正功能，所以RNA的合成不需要引物，而是從頭合成的，它的錯配可能性較大，在RNA引物達成功能后即被DNA聚合I刪去，代之以高保真的DNA鏈。［思慮］DNA分子能正確復制的原由有哪些DNA雙螺旋構造供給模板；堿基互補配對；DNA聚合酶的復查功能。［思慮］細胞內(nèi)哪些物質是從頭合成的RNA合成、蛋白質合成。1．3DNA分子復制的人工控制解開螺旋：在80～100℃時，DNA雙螺旋打開，形成兩條DNA單鏈，稱為變性?；謴吐菪涸?0℃左右時，兩條DNA單鏈從頭形成雙螺旋構造，稱為復性。復制條件：緩沖液,DNA模板,四種脫氧核苷酸,熱穩(wěn)固DNA聚合酶,兩種引物。反響場所：PCR儀〔自動溫度周期性調理〕。［思慮］緩沖液相當細胞內(nèi)的什么成分〔核基質〕1．4PCR的反響過程變性：在95℃時DNA解旋復性：在50℃時引物與DNA單鏈聯(lián)合延長：在72℃時合成DNA子鏈〔兩個引物間的序列〕2．實驗操作2．1PCR反響系統(tǒng)：緩沖液、DNA模板，四種脫氧核苷酸原料、熱穩(wěn)固DNA聚合酶、兩種RNA引物，水2．2實驗操作步驟2．3依據(jù)PCR反響系統(tǒng)配方配制反響液；2〕將PCR反響系統(tǒng)50μL用微量移液器轉移到微量離心管〔〕中；3〕將微量離心管放到PCR儀中；4〕設置PCR儀的工作參數(shù)。5〕DNA在PCR儀中大批擴增。2．4水浴法：將微型離心管挨次在95℃、55℃、72℃的恒溫水浴鍋中循環(huán)辦理相應時間。3．實驗本卷須知3．1防備外源DNA污染：所用儀器、緩沖液、蒸餾水等使用前高壓滅菌。3．2緩沖液和酶分裝成小份，－20℃低溫保留。3．3每增添一種反響成分，改換一個移液器的槍頭。3．4混勻后離心辦理，使反響液集中在離心管底部。4．結果剖析與評論4．1反響液稀釋：取2uLPCR反響液，增添98uL蒸餾水；2．分光光度計調零：將100uL蒸餾水增添到比色杯中，在260nm處將分光光度計調整讀數(shù)為零。4．2將100uL反響稀釋液倒入比色杯中，測定在260nm處的光汲取值。4．3計算：DNA含量＝50×光汲取值×稀釋倍數(shù)課后小結課后習題1．DNA分子復制時，解旋的兩條鏈中〔〕僅一條作為復制模板兩條鏈作為模板并復制出兩個不一樣的DNA分子兩條鏈作為模板并復制出兩個同樣的DNA分子兩條鏈作為模板，各自合成一便條鏈，而后兩條母鏈從頭聯(lián)合為本來的雙螺旋分子，兩條新鏈聯(lián)合成一個嶄新的DNA分子2.以下對于DNA復制過程的正確次序是〔〕①互補堿基對之間氫鍵斷裂②互補堿基對之間形成氫鍵③DNA分子在解旋酶的作用下解旋④以解旋后的母鏈為模板進行堿基互補配對⑤子鏈與母鏈回旋成雙螺旋狀構造A①③④②⑤B①④②⑤③C①③⑤④②D③①④②⑤3.以下各項過程中，依據(jù)“堿基互補配對原那么〞的有〔〕①DNA復制②RNA復制③轉錄④翻譯⑤逆轉錄A①②③④⑤B①②③④C①②③⑤D①③④⑤4.實驗室內(nèi)模擬生物體DNA的復制必要的一組條件是〔〕①酶②游離的脫氧核苷酸③ATP④DNA分子⑤mRNA⑥tRNA⑦適合的溫度⑧